中医药延缓类风湿关节炎骨侵蚀进程的研究进展

中医药在延缓类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)骨侵蚀进程方面疗效显著,具有多功能、多途径、多靶点的优势,主要通过抑制T细胞活化、干预炎性细胞因子、阻断细胞内信号通路、调控破骨细胞的增殖与分化等防治RA,延缓骨侵蚀进程。现有研究缺乏对中医药延缓RA骨侵蚀进程重要阶段的系统化论述,对中药有效成分作用机制、途径、靶点的探讨亦有待加强,基础研究深度不够,临床研究样本量不足。故今后需进一步加强基础理论研究,基于相关信号通路、细胞因子/趋化因子系统轴、细胞间相互作用,结合现代科学理论及技术,加强对中药及其有效成分对RA骨侵蚀作用及机制的靶向分析及实验验证,广泛建立与中医病证相符合的实验动物模型,充分发挥中医药延缓RA骨侵蚀的作用。     

卷积神经网络的发展及其在肿瘤影像学中的应用

肿瘤病死率高,影像学检查对肿瘤的早期诊断、治疗意义重大.随着人工智能深度学习技术的发展,卷积神经网络算法能够自动提取图像特征,快速寻找医学影像图片中的细微病变.计算机辅助检测系统可以帮助医生在肿瘤的早期阶段提高诊断准确率.     

青少年肾消耗病-髓质囊性病综合征2例并文献复习

目的：了解青少年肾消耗病一髓质囊性病综合征（juvenile nephronophthisis and medullary cystic disease，JN-MCD）的临床特征，以提高对该病的认识。方法：回顾性分析2例临床资料并进行文献复习。蛄果：2例患者均在青少年时期发病，以多尿、烦渴、贫血、慢性肾功能不全、生长发育迟缓为主要表现。其中1例伴有色素性视网膜炎而另1例伴有明显的甲状旁腺功能亢进症。实验室检查可见血红蛋白降低、尿比重降低、多种电解质紊乱、肾功能异常等特点，影像学检查可见双肾多发囊肿，囊肿主要位于皮髓交界及髓质。结论：JN-MCD是一组以肾髓质囊肿形成及隐匿性慢性肾功能不全为特征的遗传性囊性肾病。该病临床表现多样，有时患者临床表现不典型，加强对该病的认识，可以减少误诊、漏诊率，提高对该痛的早期诊断。     

热打击联合脂多糖刺激对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响

目的：观察脂多糖（LPS）与热打击分别单独作用与联合作用对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响。方法：于37℃、5％CO2标准培养箱中培养人肠上皮细胞株SW480。实验分4组：空白对照组直接收集细胞上清;LPS单独刺激组（LPS组）分别使用0、0．01、0．1、1和10μg／ml的LPS刺激SW480细胞,24h后收集细胞上清;热打击组将SW480细胞进行热打击（42℃,1h）后在标准孵箱分别培养1h和24h后收集细胞上清;LPS＋热打击组将SW480细胞42℃热打击1h后给予上述浓度的LPS刺激,再重新置于标准孵箱中培养,24h后收集细胞上清。各组细胞上清用LiquiChip液相蛋白芯片系统分别检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）、7干扰素（IFN-7）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等10种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平。结果：单独LPS刺激时呈剂量依赖性诱导SW480表达分泌IL-8,对其余9种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平影响不明显。单纯热打击仅诱导SW480细胞表达分泌IL-8的水平升高,且与空白对照组比较,仅热打击24h后IL-8的水平显著增加（P〈0．01）。热打击联合不同浓度的LPS刺激SW480细胞,LPS浓度低时并不影响SW480表达分泌IL-8的水平（P〉O．05）,而高浓度LPS可以显著减少其表达分泌水平（P〈0．05）。结论：人肠上皮细胞SW480作为脏器实质细胞,对炎性刺激仅能产生单一种类的细胞因子,其中LPS单独刺激和一定强度的热打击均可上调SW480分泌IL-8;但高浓度LPS在热环境下可抑制SW480细胞的IL-8表达分泌水平。     

成纤维细胞生成因子23在慢性肾脏病中的作用及其对预后的影响

成纤维细胞生长因子23（fibroblast growth factor-23，FGF-23）是新近发现的调磷因子，它在体内的磷代谢过程中发挥着重要作用。慢性肾脏病患者常常出现钙、磷代谢紊乱，引发甲状旁腺功能亢进、骨矿化障碍、软组织钙化等表现，这些病理生理改变可降低患者的生活质量。近来研究发现，FGF-23与上述病理生理改变有关，影响慢性肾脏病，特别是终末期肾病患者的预后。     

具有细胞穿透功能的串联亲和层析分离载体的构建与功能鉴定

目的建立基于抗生蛋白链菌素结合肽(SBP)-钙调蛋白结合肽(CBP)分离标签以及细胞穿透肽转录反式激活因子(TAT)和绿色荧光蛋白(GFP)原核表达系统的、具有细胞穿透功能的原核串联亲和层析分离系统。方法应用PCR方法,以pEG-FP-C2载体为模板扩增EGFP序列,以pNTAP载体为模板扩增CBP-SBP序列,采用退火方法得到TAT片段,采用常规酶切、连接方法将EGFP、CBP-SBP和TAT片段依次克隆入pET14b-MCStop载体中,酶切、PCR和测序鉴定无误后,得到pET14b-CBP-SBP-EGFP-TAT重组质粒。将重组质粒转化BL21(DE3)大肠埃希菌,以IPTG诱导融合蛋白表达,利用Ni2+-NTA亲和层析纯化获得融合蛋白,将不同浓度的融合蛋白加入培养的人肝癌细胞株(HepG2)检测融合蛋白的穿细胞膜功能。结果所构建的pET14b-MCS-CBP-SBP-EGFP-TAT融合蛋白表达载体正确,该载体可在大肠埃希菌内高效表达,用Ni2+-NTA纯化获得了相对分子量约40kD的目的融合蛋白。细胞功能实验结果表明融合蛋白能够穿越细胞膜,且具有浓度依赖性。结论成功构建了pET14b-MCS-CB...     

槐定碱对裸鼠移植性实体瘤SW480生长及p53、VEGF表达作用的研究

目的 探讨盐酸槐定碱对裸鼠移植性实体瘤SW480的作用及对p53和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 建立裸鼠移植性实体瘤SW480模型,观察在槐定碱作用下移植性实体瘤SW480的体积和质量,用免疫组化法、Western blotting、荧光定量PCR法检测秽植性实体瘤组织中p53、VEGF的表达.结果 槐定碱组裸鼠移植性实体瘤SW480的体积和质量、p53表达、VEGF表达均显著低于对照组,对移植性实体瘤抑瘤率为34.07%.结论 槐定碱对裸鼠移植性实体瘤SW480的生长有明显抑制作用,与抑制p53、VEGF表达相关.     

BRCA1调节乳腺癌细胞黄体酮受体A和B蛋白的表达

目的 研究BRCA1能否在乳腺癌细胞中调节黄体酮受体A和B的表达.方法 在乳腺癌细胞MCF-7中,用lipofectamine 2000转染含有野生型BRCA1 cDNA的pFlag-CMV2-BRCA1 wt质粒或BRCA1特异性的小干扰RNA,过表达BRCA1或敲低BRCA1的表达.转染24 h以后,加入含有100 nmol/L黄体酮完全培养基刺激24 h.提取全细胞蛋白或总RNA,进行Western blotting和RT-PCR检测BRCA1、黄体酮受体A(PRA)和黄体酮受体B(PRB)在蛋白质水平和mRNA水平的表达.结果 在MCF-7细胞中过表达BRCA1,PRA和PRB蛋白的表达下降,而PRA和PRB在mRNA水平无变化;BRCA1的表达被敲低后,PRA和PRB的表达升高.结论 在乳腺癌细胞中,外源性和内源性BRCA1都可以下调PRA和PRB蛋白的表达.     

两种细胞系中内源性C-反应蛋白的表达和定位分析

目的 观察在不同刺激条件下,不同组织来源细胞系中内源性C-反应蛋白(CRP)的表达及定位情况.方法 培养人单核细胞系THP-1和人肝细胞系LO2,用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞;使用内毒素(LPS)对两种细胞进行刺激,同时收集LPS刺激后的THP-1细胞的培养液上清加人到LO2细胞的培养液中进行孵育,运用Westernblot和免疫细胞化学技术检测上述刺激条件下CRP在两种细胞中的表达及其定位情况.结果 Western blot检测表明,在未受到刺激时,两种细胞的裂解物中均检测到一定量的CRP,在细胞培养液上清中没有检测到;受到LPS刺激后,THP-1细胞内的CRP表达增加,且在培养液上清中也检测到少量的CRP,但对于LO2细胞,刺激前后CRP的表达和分泌没有明显变化:当用LPS刺激后的THP-1细胞的培养液上清处理LO2细胞后,在LO2的细胞裂解物和培养液上清中均检测到CRP.免疫细胞化学检测结果显示,整个THP-1细胞中均可检测到标记的CRP的荧光信号,其中以核内的最明显.LPS刺激可以增加该蛋白的表达,使其核定位更加明显;在LO2细胞中,CRP定位于核外,LPS刺激对其表达和定位没有明显影响.而给予LPS刺激的THP-1细胞培养液上清处理后,LO2细胞中标记CRP的荧光信号增强,尤其以细胞膜上的增强明显.结论 LPS不能直接上调肝细胞LO2内的CRP表达,却可以诱导THP-1表达分泌某些细胞因子来增加CRP的合成分泌;CRP在肝细胞系LO2和单核.巨噬细胞系THP-1中的定位有明显不同,在LO2中主要表现为分泌型蛋白的定位特征,而在THP-1细胞中却有明显的核定位表现.