体外细胞模型中氟伐他汀对映体的手性分离和含量测定方法学研究

目的:建立手性固定相(CSP)正相高效液相色谱法分离细胞裂解液中氟伐他汀对映体的分析方法。方法:采用直链淀粉-三[3,5-二甲基氨基甲酸酯]衍生物(Chiralpak AD)手性色谱柱(4.6 mm×250 mm),流动相:正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(90∶10∶0.1),流速0.5 ml/min,检测波长:239 nm。结果:在建立的手性分离方法下,氟伐他汀消旋体在20μmol/L~300μmol/L浓度范围内线性关系良好,两个对映异构体的相关系数r2分别为0.9993、0.9997,方法回收率为(99.4±0.8)%,日内、日间精密度(RSD)均小于10%。结论:建立的正相手性固定相高效液相色谱法分离和测定细胞裂解液中氟伐他汀对映体的方法准确、可靠,可用于体外细胞模型中氟伐他汀的立体选择性研究。     

杭白菊总黄酮对ECV304细胞内钙信号的影响

目的 :杭白菊是我国传统的栽培药用植物。药物分析表明 ,杭白菊内含黄酮类、菊甙及多种维生素和微量元素。我们的前期研究表明 ,杭白菊总黄酮 (FDM)可以增加大鼠心脏的收缩力和冠脉流量 ,并且能对抗由缺血 /复灌引起的心脏收缩力下降和冠脉流量的下降。血管环实验证明FDM具有舒张大鼠胸主动脉环的作用 ,但是尚无直接证据表明FDM可直接影响细胞内钙水平。本实验观察了FDM对人脐静脉内皮细胞株ECV30 4细胞内钙的影响。方法 :将人脐静脉内皮细胞株ECV30 4细胞接种于含有 1mLDMEM培养基的培养板内的盖玻片上。用Fura - 2 /AM(1μmol/…     

稳定表达人有机阳离子转运体1的细胞模型构建

 目的 建立能稳定表达人有机阳离子转运体1（human organic cation transporter1, hOCT1）野生型及两个突变体的马丁达比狗肾上皮（Madin-Darby canine kidney, MDCK）细胞模型。方法 从人肝组织中提取hOCT1野生型基因,经定点突变获得hOCT1_P341L,hOCT1_M420del两个突变型基因,构建表达质粒pcDNA3.1(+)-hOCT1,pcDNA3.1(+)-hOCT1_P341L,pcDNA3.1(+)-hOCT1_M420del。将质粒转染MDCK细胞,通过G418筛选获得抗性克隆,并通过hOCT1的荧光底物(4-二甲氨基苯乙烯基)-N-甲基吡啶 (ASP+)筛选得到具有较高活性的MDCK-hOCT1细胞。经反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及经典底物N-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)的摄取实验,鉴定筛选得到的单克隆细胞株hOCT1 mRNA的表达及功能。结果 本实验获得的hOCT1野生型及2个突变体细胞模型与转染空载体的MDCK细胞相比,其 hOCT1 mRNA表达量显著增高,对经典底物MPP+的摄取为转染空载体细胞的12.5,13.7,12.0倍,hOCT1抑制剂可显著抑制细胞对MPP+的摄取。结论 建立的细胞模型可用于hOCT1抑制剂及底物的筛选。     

判别分析法研究对位取代苯胺形成P－450代谢中间体络合物的构效关系（论著摘要）

判别分析法研究对位取代苯胺形成Ｐ－４５０代谢中间体络合物的构效关系（论著摘要）傅旭春，蒋惠娣，刘志强（中国医学科学院浙江分院，杭州３１００３１）本实验分别测定１４个对位取代苯胺与未经处理的大鼠肝微粒体形成Ｐ－４５０－ＭＩ络合物的活性和１５个对位取代苯...     

对氨基二苯醚类对细胞色素P－450抑制机理的探讨

本文研究发现，体内抑制细胞色素Ｐ－４５０活性强、中、弱的三个对氨基二苯醚同系物──４－个氨基－２′，４′－二氯二苯醚、４－氨基－４′－氯二苯醚、４－氨基－２′，３′－二甲基二苯醚与苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体在ＮＡＤＰＨ及Ｏ２存在下，于３７℃经或未经预孵育（５ｍｉｎ），对Ｐ－４５０对硝基茴香醚脱甲基酶均呈竞争性抑制。预孵育后三者Ｋｉ值依次为０．１１３±０．０９６、０．３６３±０．２６３、０．７０３±０．２４４μｍｏｌ／Ｌ。三者间差异显著（Ｐ＜０．０５）。三者Ｋｉ值与体内抑制Ｐ－４５０的能力呈负相关。若未经预孵育，三者Ｋｉ无明显差异。本实验还发现，三者体外形成的Ｐ－４５０－ＭＩ络合物可以解离。因此，本实验结果似提示，对氨基二苯醚类对Ｐ－４５０的抑制机理不同于传统的“准不可逆”抑制剂。     

部份抗癌中草药微量元素硒的含量测定

用2、3-二氨基萘(DAN)荧光法测定了抗癌中草药与普通中草药各14种的硒含量,其平均值抗癌中草药高于普通中草药,两者硒有含量显著性差异(P<0.05)。本研究提示中草药的硒含量与其抗肿瘤活性有关,同种药用植物的中草药,由于药用部位不同,其硒含量亦有差异。     

研究性自主实验和设计性实验的开设与尝试

通过优化实验结构，开设设计性实验和研究性自主实验，发挥学生在实验中的主体作用，综合评定实验成绩等手段，对药物分析课程的实验教学进行改革。实践表明设计性实验和研究性自主实验充分发挥了学生的主观能动性，提高了学生的分析问题、解决问题和创新思维能力。     

槲皮素与芦丁对离体大鼠主动脉环的舒张作用及机制

目的:比较研究槲皮素与芦丁对离体大鼠胸主动脉环的作用及其可能的途径。方法:采用累积加药法,检测槲皮素和芦丁对去氧肾上腺素(pheny lephrine,PE)预收缩的胸主动脉环张力的影响。结果:槲皮素对离体大鼠内皮完整和去内皮的胸主动脉环均有浓度依赖性的舒张作用,而芦丁对PE预收缩血管的舒张作用是内皮依赖性的。槲皮素和芦丁对内皮完整的胸主动脉环的最大舒张反应分别为(77.20±6.11)%和(44.28±7.48)%,但两者对内皮完整的胸主动脉环最大舒张的半数有效浓度无明显差异。用一氧化氮合酶抑制剂L-NAM E(0.1 mm o l/L)预处理后,可阻断芦丁诱导的舒张血管作用,但不能阻断槲皮素引起的舒张血管作用;用鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝(10μm o l/L)预处理后,两者的血管舒张作用均被阻断。用环氧合酶抑制剂吲哚美辛(10μm o l/L)预处理后可减弱槲皮素诱导的舒张血管作用,但不能阻断芦丁引起的舒张血管作用。结论:槲皮素的舒血管作用强于芦丁,槲皮素可能是通过鸟苷酸环化酶和环氧合酶途径产生非内皮依赖性的血管舒张作用,而芦丁可能是通过NO-鸟苷酸环化酶途径产生内皮依赖性的血管舒张作用。     

肠道菌群对菊花提取物的代谢作用

目的观察和比较人、大鼠、B eag le犬及家兔肠道菌群对菊花提取物(Chry santhem um m orif olium ex tracts,CM E)的代谢作用。方法采用人、大鼠、B eag le犬及家兔的新鲜粪便37℃厌氧培养,经醋酸乙酯提取后采用RP-HPLC及LC-M S方法对代谢成分进行分离和定性、定量分析。结果CM E容易被肠道菌群代谢,0.5 h后样本中能检测出较高浓度代谢物;经LC-M S检测,主要的代谢物为木犀草素和芹菜素;随着代谢时间的延长,两者均出现降解代谢的现象,24 h后几乎检测不到这两种代谢物;且人、大鼠和B eag le犬肠道菌群对CM E的代谢较快,而家兔肠道菌群对CM E的代谢过程比较平缓。结论在离体条件下,CM E可以被人、大鼠、B eag le犬及家兔的肠道菌群代谢,主要的代谢物为木犀草素和芹菜素。