Omega-6型多不饱和脂肪酸增加急性心肌缺血损伤“易感性”的机制研究

脂质代谢紊乱是冠心病的常见病理特征。虽然增加不饱和脂肪酸(PUFA)的摄入一直以来被认为可以有效预防冠心病,但是越来越多的临床试验却否定了该观点。PUFA在冠心病中的具体作用机制尚不明确。本实验通过建立omega-6型PUFA负荷急性心肌缺血的动物模型,来探讨PUFA对心肌缺血损伤的影响及其潜在机制。实验方案及程序均符合动物使用和护理的伦理原则,并已获暨南大学动物实验伦理委员会批准。实验采用亚油酸(LA)连续灌胃14天后,大剂量腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)诱导急性心肌缺血以建立动物模型。24 h后,采用小动物超声影像系统检测心脏功能。随后,采集血清及心肌组织样本进行心肌酶、磷脂组学分析、试剂盒含量测定和Western blot检测。心脏功能结果表明,与单纯LA组比较, LA负荷ISO小鼠的左心室射血分数(EF%)和左心室缩短分数(FS%)显著降低,天门冬氨酸转移酶(AST)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)显著增加。磷脂组学分析表明,与ISO组比较, LA负荷ISO小鼠心肌组织中的PUFA显著增加,且氧化型磷脂酰乙醇胺(ox-PE)的含量变化最为显著。还原型辅酶Ⅱ(...     

五波长高效液相色谱指纹图谱和红外指纹图谱联合鉴定复方丹参片质量

目的建立复方丹参片（compound Danshen tablet,CDST）五波长HPLC指纹图谱（HPLC-FP）,测定其红外定量指纹图谱（IR-FP）和一阶导数定量指纹图谱（D-IR-FP）,先把五波长HPLC-FP整合后再与IR-FP进行等权整合用以综合评价其质量。方法采用RP-HPLC法,记录254、265、280、290和326 nm 5个波长下色谱图,以丹酚酸B为参照物峰,确立40个共有指纹峰。以系统指纹定量法全面鉴定其质量,将五波长测得100个指纹图谱按均值法生成对照指纹图谱评价样品质量,分别在每个波长下进行评价,再按方均开方值法整合5个波长下的Sm和Pm及α,并重新评价20批CDST质量。用IR-FP和一阶导数定量指纹图谱基于系统指纹定量法进行质量评级。最后把HPLC-FP和IR-FP等权整合。结果 HPLC-FP和IR-FP等权整合后鉴定20批CDSTs的S9质量（1级）极好;S8,S13和S18质量（2级）很好;S4、S6和S16质量（4级）较好;其余13批质量（3级）均好。结论多波长HPLC-FP结合IR-FP联合鉴定中药质量即能突出紫外吸收化学成分也能表达饱和化学键成分对质量评价的贡献作用。     

铁死亡主要检测方法及其应用的研究进展

铁死亡是一种在形态学、生物化学、基因学等方面均不同于细胞凋亡、坏死、焦亡和自噬等传统细胞死亡途径的新型细胞死亡类型,其主要特征为铁累积和脂质过氧化,铁死亡的调控机制涉及铁代谢、谷胱甘肽代谢和脂质过氧化反应等方面,并与肿瘤、衰老、神经退行性疾病、缺血再灌注损伤、心脑血管疾病、肾脏损伤、肝纤维化等疾病的病理过程密切相关。如何有效研究铁死亡调控机制治疗疾病已成为铁死亡研究领域的热点。近年来,随着对铁死亡研究的深入,铁死亡的识别、确认及机制等方面的研究进展显著,用于检测铁死亡的方法不断发展且日趋成熟,形态学、生物化学、分子生物学、基因学等方面的技术已广泛应用于铁死亡的检测与研究。为进一步加深读者对铁死亡及其检测方法的认识,本文主要综述了目前常规使用的铁死亡检测方法及其应用,并对其在铁死亡检测中的优缺点进行总结和讨论。这些方法将有助于更好地理解和研究铁死亡的诱导和调控过程及其在治疗疾病中的作用。     

五波长高效液相色谱指纹图谱和紫外指纹图谱联用评价二妙丸质量

目的建立二妙丸（Ermiao pill,EMP）平行五波长HPLC定量指纹图谱（PFW-HPLC—FP）,并与紫外定量指纹图谱（wFP）联用,把PFW-HPLC—FP整合后再与UV-FP进行等权融合用以综合评价EMP质量。方法采用RP—HPLC法,记录EMP在246、265、290、326、345nm5个平行波长下色谱图,以小檗碱为参照物峰。分别确立55（246nm）、57（265nm）、54（290nm）、44（326nm）和41（345nm）5个共有指纹峰。以系统指纹定量法全面鉴定EMP质量,采用均方开方法（SRAS）整合5波长下的品和Pm及α,并重新评价12批EMPs质量。用紫外定量指纹图谱和一阶导数定量指纹图谱基于系统指纹定量法进行质量评级。最后把PFW．HPLC—FP的sRAs结果和UV-FP结果等权整合来评价EMP质量。结果PFW-HPLC．FP的SRAS结果和UVFP等权整合后鉴定12批EMPs的S3和S7质量（1级）极好;S1、S9、S10、S11和S12质量（2级）很好;S2、S4、S5、S6和S8质量（3级）好。结论由一元五维波长HPLC定量指纹图谱与一元全区段（190～400nm）连续紫外定量指纹图谱联用构成二元色谱一光谱指纹图谱,按均值法整合后鉴定中药质量既能突出紫外吸收大的化学成分作用,也能避免漏检紫外吸收小的化学组分的贡献,鉴定结果优于简单一元指纹图谱对质量评价的准确度。     

鲜冬虫夏草中抑制肿瘤细胞生长提取物制备工艺研究

目的优化鲜冬虫夏草中肿瘤细胞生长抑制活性提取物的低温超声波提取条件。方法采用3因素3水平中心组合试验,以鲜冬虫夏草提取物对黑色素瘤B16细胞的抑制率为响应值,进行响应曲面分析。结果鲜冬虫夏草的最佳低温超声波提取工艺参数为:超声机功率320 W,超声提取时间43 min,超声提取温度30℃。在此条件下提取,提取物实际黑色素瘤B16细胞的抑制率达72.80%。结论该研究所得优选提取工艺参数是稳定可行的,为鲜冬虫夏草资源的合理利用及产品开发提供支持。     

中药色谱指纹图谱评价方法的不确定度和可靠度研究

目的建立中药指纹图谱不确定度和可靠度评价理论并用其评价二妙丸(Ermiao Wan,EMW)HPLC指纹图谱的不确定度和可靠度。方法采用RP-HPLC法测定EMW-HPLC指纹图谱,以系统指纹定量法综合评价12批EMW质量。结果以盐酸小檗碱(berberine hydrochloride,BBR)为参照物峰,确定55个共有指纹峰,建立了EMW-HPLC指纹图谱。用不确定度和可靠度评价EMW-HPLC对照指纹图谱和12批样品指纹图谱,EMW-HPLC对照指纹图谱的定性可靠度和定量可靠度均>0.95,表明对照指纹图谱反映的化学指纹数量和含量分布比例以及整体含量的可靠性很高。S2、S3和S7的定性和定量可靠度依次升高,表明其反映的化学指纹数量分布和含量分布与整体含量的可信性依次增强。质量为Ⅲ级的S8的定性定量可靠度均为0.98,而质量为Ⅱ级的S2的定性定量可靠度均为0.92,表明中药质量高低与可靠度不一定相关。结论所建立的不确定度评价方法能准确反映中药指纹图谱所代表质量的变动性,可靠度评价方法可准确评价对照指纹图谱和单批指纹图谱所表征的中药质量的定性和定量信息的可靠程度。     

平行多波长色谱指纹图谱均值评价法的不确定度和可靠度研究

目的建立平行多波长色谱指纹谱均值法(PMW-FP-AM)的不确定度和可靠度评价理论,并用以评价单批二妙丸(Ermiao Wan,EMW)平行六波长指纹谱均值法(PSW-FP-AM)结果与均值法(AM)对应标准谱的不确定度和可靠度。方法采用RP-HPLC法测定二妙丸平行六波长HPLC指纹图谱(EMW-PSW-HPLC-FP),以均值法和系统指纹定量法综合鉴定11批EMW质量。结果以小檗碱为参照物峰,分别确定53(254nm)、54(265nm)、51(284nm)、57(305nm)、53(326nm)和47(340nm)个共有指纹峰,建立了EMW-PSW-HPLC-FP。用PSW-FP-AM鉴定S2、S6和S10(Ⅰ级)质量最好,S7、S8和S9(Ⅱ级)质量很好,S5和S11(Ⅲ级)质量好,S1、S3和S4(Ⅵ级)质量一般。评价出EMW-PSW-FP-AM对应标准的定性定量及均化性可靠度均>0.97,表明标准谱反映的化学指纹数量和含量分布比例与整体含量信息的可靠度极高。S2、S5、S6、S7、S8、S9和S10的定性定量信息可靠度(0.918～0.984)极高,S11定性定量信息可靠;S1、S3和S4的定性定量信息的可靠度(0.778～0.881)中等。结论所建立方法能准确反映PMW-FP-AM结果所代表质量信息的不确定性,评价PMW-FP-AM标准和单批指纹图谱所表征的中药质量的定性和定量信息的可靠程度。     

中药标准制剂控制模式发展历程和构建全质量关控制中药质量模式

对近10年中药定量指纹图谱发展过程进行归纳总结,论述中药标准制剂概念的诞生过程。中药标准指纹对照物系列只有在国家层面上法规化,以标准制剂控制模式作为标准指纹对照物与待测药物样品随行对照检验和同步操作,最大程度消除分析系统误差。以全质量关：中药质量平衡（TCM—MB）、中药能量平衡（TCM-EB）和中药药效平衡（TCM—AEB）为基础,用具有恒定化学组成和等效的标准指纹对照物系列来实现中药真实质量的安全、稳定、均一和等价等效控制。中药标准制剂控制模式适应中药复杂性科学特征,能整体、动态、有效地控制好中药质量,是中药走向国际的必由之路。     

基于应激诱导潜伏Ⅰ型单纯疱疹病毒复发的“肝郁化火”证研究进展北大核心CSCD

“肝郁化火”是中医情志致病理论的核心内容之一,广泛存在于各种相关疾病的病理过程中,是情志相关病证病机转变的关键环节。然而,由于缺乏符合中医药作用特点的动物模型,严重影响了“肝郁化火”证的生物医学基础研究,限制了“疏肝泻火”等清热中药作用机制的研究进展。在研究中发现“肝郁化火”证的颜面部火热症状的部分病理过程,与情志应激诱发潜伏Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus-1,HSV-1)的激活复发引起的头面部症状有相通之处,因此提出采用情志应激诱导潜伏HSV-1激活可以建成“肝郁化火”病证结合的动物模型。该文对近年作者课题组及国内外相关文献进行了总结和分析,从情志应激导致潜伏HSV-1复发感染角度来建立“肝郁化火”的实验动物模型,揭示“肝郁化火”病理过程中的效应分子、效应靶标与机制通路,为“肝郁化火”临床常用中药的药效表征方法提供参考和依据。     

在线固相萃取-HPLC测定4种虫草类药材中虫草素和2'-脱氧腺苷

该文建立一种同时测定4种虫草类药材(冬虫夏草、蛹虫草、虫草菌丝体和蝉花)中虫草素(3'-脱氧腺苷)和2'-脱氧腺苷含量的在线固相萃取-高效液相色谱分析方法。供试品经ZORBAX SB-AQ(4.6 mm×12.5 mm,5μm)色谱柱富集,水-甲醇(91∶9)洗脱;ZORBAX SB-AQ(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱分离,流动相为0.1%甲酸水溶液-甲醇(91∶9),检测波长260nm,柱温40℃,流速1.0 m L·min~(-1),分别对4种虫草类药材中虫草素和2'-脱氧腺苷含量进行检测。结果表明冬虫夏草、虫草菌丝体和蝉花样品中仅检测到2'-脱氧腺苷,蛹虫草样品中仅检测到虫草素,早期报道的在冬虫夏草中检测到的虫草素色谱峰可能是其同分异构体2'-脱氧腺苷色谱峰或以2'-脱氧腺苷为主的与虫草素的共洗脱色谱峰。该方法重复性好,准确度高,分析时间短,可用于虫草类药材中虫草素和2'-脱氧腺苷的分析。