阿米巴活体微培养法

目的 建立一种既可做阿米巴与病原体共培养实验，又可连续观察阿米巴活体形态细微变化的培养技术。 方法 以24孔细胞培养板覆盖玻片为容器，37 ℃下微量悬滴将阿米巴与白色念珠菌共同培养, 普通光学显微镜（×1000）下连续观察阿米巴的形态、活动能力、吞噬的细菌等情况。 结果 经微量悬滴培养在普通光学显微镜油镜下可连续观察阿米巴各种形态，滋养体呈T、K、Y字形态，并可连续观察吞噬白色念珠菌的过程。 结论 本法可观察到常规固定染色标本无法见到的阿米巴滋养体T、K、Y字形态及其吞噬白色念珠菌过程。     

上海市一例肠出血性大肠埃希菌O157∶H7感染病例的病原学分析

目的通过流行病学调查与病原菌鉴定，并结合既往相关菌株资料，对2016年6月上海市腹泻病综合监测中报告的1例肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157∶H7感染病例进行病原学分析。方法对患者开展流行病学调查。 采集标本后进行菌株分离培养、生化鉴定并确定血清型；利用聚合酶链式反应（PCR）检测所携带的毒力基因；采用微量肉汤稀释法进行药敏试验；应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术进行分子分型；通过全基因组测序获取序列信息进行多位点序列分型（MLST）及单核苷酸多态性分析。结果流行病学调查未发现可疑传染源。 患者样本分离出EHEC O157∶H7；携带eae、stx2基因；对进行试验的16种抗生素均敏感；菌株图谱带型与以往监测中分离菌株带型均不相同；MLST分型为ST11型，与以往分离菌株核心基因组差异较大。结论上海市较长时间无检出EHEC O157∶H7菌株的病例记录，通过对此次分离的菌株的全面检测，确定了其毒力基因、耐药性和MLST型别，并发现新的PFGE带型，其核心基因组与以往菌株呈现出一定差异，值得进一步关注。     

贝类水产中副溶血性弧菌菌型分布研究

目的了解贝类水产中副溶血性弧菌(VP)的菌型构成及其特点。方法按照GB/T 4789.7标准处理贝类标本,每份VP阳性标本挑取10个克隆,并对其进行血清分型,以PCR法检测tdh、trh、GS-PCR和f237噬菌体的携带情况,并据此对阳性标本中的VP进行菌型区分,分析各菌型在相应标本中的构成。结果 75份贝类水产中18份(24.0%)检出VP,5.6%携带trh阳性VP(O4∶KUT),未检出tdh阳性菌株。18份VP阳性标本共获得180株VP克隆,共可分为42种菌型。检出3株O3∶K6和1株O1∶K33 GS-PCR阳性菌株,均为非流行株。不同标本中菌型数不完全相同,最多可检出9种,平均每份VP阳性标本含6.1种菌型。检出47个(26.1%)克隆株携带f237的orf8完全缺失变种。结论 f237 orf8完全缺失变种噬菌体在贝类中具有广泛的分布。贝类中VP种群构成复杂,常携带多个菌型。临床常见菌型在贝类中不具优势,食品中VP的检测应充分考虑血清分型、基因分型的作用。     

上海市饮用水源地原水中抗生素抗性基因多样性研究

目的研究饮用水源地原水中的各种抗生素抗性基因（ARGs）的分布,分析抗性基因与水源地水中分离到的常见碳青霉烯多重耐药细菌相关性,为城市饮用水安全提供科学依据。方法采集2020年上海市某主要饮用水源地原水水样30件,用含1 μg·μL-1美罗培南的哥伦比亚血琼脂培养基选择性培养菌株,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI?TOF?MS）系统进行菌种鉴定,微量肉汤稀释法检测菌株的最小抑菌浓度（MIC）。0.45 μm滤膜过滤水样,富集样本,采用高通量宏基因组测序进行抗性基因多样性分析。结果从30件水样中分离到占比前5位的碳青霉烯多重耐药菌64株,分别为嗜麦芽窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）、屎肠球菌（Enterococcus faecium）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）和肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）,这些菌株对多种临床常用的抗生素均耐药。通过宏基因组测序,检测到1 244种抗性基因,前100个抗性基因的相对平均丰度占所有抗性基因96.1%,多重耐药类占63.41%,多重耐药基因主要为adeJ, mexT, adeC, oprM, mexF, mdfA, mexB, mdtK, adeK等。使用Spearman等级相关系数分析发现,水源地水中分离的5种多重耐药菌与抗性基因有明显正相关关系。结论该主要水源地原水中多重耐药基因相对丰度占比较高,5种分离到的碳青霉烯多重耐药细菌与抗性基因明显相关,涉及的抗生素种类与多重菌耐药表型相符。提示需持续加强抗生素的合理规范应用,保护水资源,保障饮水安全。     

上海市宝山区2015—2018年腹泻病人沙门菌血清分型和分子分型

目的 揭示上海市宝山区腹泻病人分离沙门菌的血清型和分子分型分布特征。方法 对2015—2018年分离的118株沙门菌进行血清分型和脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis,PFGE）分型,通过构建聚类树揭示不同血清型菌株的分子分型特征。结果 118株沙门菌分为25种血清型,前三位为肠炎沙门菌（45株,38.1%）、鼠伤寒沙门菌（26株,22.0%）、伦敦沙门菌（11株,9.3%）。其余22种血清型分别只包含1~3株菌。118株沙门菌通过PFGE分为71个PFGE带型,每个带型分别包含1~19株菌。45株肠炎沙门菌分为8个PFGE带型,相似度为75.0%~100.0%,在聚类树上形成一个簇;26株鼠伤寒沙门菌分为21个PFGE带型,相似度为48.0%~100.0%,在聚类树上形成两个簇;11株伦敦沙门菌分为8个PFGE带型,相似度为80.0%~100.0%,在聚类树上形成一个簇。结论 肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌是上海市宝山区腹泻病人沙门菌优势血清型,但近年伦敦沙门菌有增多的趋势。肠炎沙门菌在本地区传播流行过程中的遗传变异相对比较保守,鼠伤寒沙门菌基因型多态性大,而且存在两个克隆。     

急性有机磷农药中毒致心律失常分析与治疗

临床观察发现,急性有机磷农药中毒由于病情重、变化快,并发症多,可导致死亡,针对发病机制不同阶段给予不同治疗.我们自2003年1月～2007年2月共诊治了15例急性有机磷农药中毒患者,除1例因反跳呼吸衰竭死亡,其它全部痊愈.现报告如下.     

青浦区水产品中副溶血性弧菌污染状况与分子分型特征

目的了解副溶血性弧菌在青浦区部分市售水产品中的污染情况及分子分型。方法于不同季度,分别从酒店、农贸市场和大型超市采取鱼类、虾和贝类等标本,参照GB 4789.7,采用稀释培养计数(MPN)法进行副溶血性弧菌定量检测,并完成分离菌株毒力基因和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型的检测。结果 144份水产品中共检出副溶血性弧菌68份,阳性率为47.00%,虾类、贝类和鱼类中副溶血性弧菌几何平均数分别为465.2、291.0、146.1MPN/g;所检出菌株均不携带TDH和TRH 2种毒力基因,68株副溶血性弧菌PFGE共分为63种带型,呈现明显多态性。结论青浦区市售水产品中副溶血性弧菌污染较严重,应采取有效措施防止由水产品引起的副溶血性弧菌食源性疾病,该地区菌株间遗传同源关系较远。     

SICU环境与临床标本耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因分型

目的了解上海某三级综合医院外科重症监护病房(SICU)环境及临床标本耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的基因特征。方法收集2012年1-7月SICU患者标本中的MRSA,以及同期SICU环境标本中分离到的MRSA,对菌株进行常用药物的MIC检测、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和SCCmec分型。结果 PFGE共得到7个不同型别,以E型为主要型别,24株占50.0%,包括源自临床感染标本17株和环境标本7株;SCCmec分型为Ⅱ型17株占35.4%、Ⅲ型27株占56.2%、Ⅳ型2株占4.2%、Ⅴ型2株占4.2%,未检测到Ⅰ型菌株;药敏结果显示,Ⅱ型和Ⅲ型菌株对环丙沙星、克林霉素、红霉素、庆大霉素和青霉素耐药率为100.0%,Ⅱa型菌株对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶均敏感,Ⅲ型菌株对利福平的耐药率为4.3%;Ⅳ和Ⅴ型菌株对常见抗菌药物的耐药率较低。结论该医院的SICU临床菌株以SCCmecⅢ型和Ⅱ型为主,环境与患者之间存在明显的MRSA克隆同源。     

2008年-2010年上海市部分伤寒副伤寒沙门菌耐药分析及分子分型

目的:了解上海市2008年-2010年伤寒、副伤寒沙门菌的耐药及分子分型特点,初步掌握伤寒、副伤寒沙门菌的分子流行特点,为今后的防制工作提供科学依据。方法:采用WHO推荐的改良K-B纸片法,对18株伤寒、副伤寒沙门菌进行13种抗生素敏感性试验;运用脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)方法对18株伤寒、副伤寒沙门菌进行分子分型及聚类分析。结果:18株伤寒副伤寒沙门菌对利福平100%耐药,对奈啶酸的耐药率为44.4%,其中伤寒沙门菌对奈啶酸的耐药率为37.5%,5株甲型副伤寒沙门菌对奈啶酸100%耐药,乙型副伤寒对奈啶酸无耐药株。所有菌株对其他11种抗生素均敏感;18株伤寒、副伤寒沙门菌共产生16种PGFE带型,有3株甲型副伤寒沙门菌表现为同一PFGE型别。结论:2008年-2010年伤寒、副伤寒沙门菌对抗生素的敏感性较高;甲型副伤寒沙门菌之间有较高的同源性,伤寒沙门菌的PFGE带型比较分散。     

2005-2014年上海市O139群霍乱弧菌的分子特征和耐药性研究

目的 分析2005-2014年上海市O139群霍乱弧菌的分子特征和耐药性。方法 以聚合酶链反应(PCR)方法检测86株O139群霍乱弧菌的霍乱毒素基因(ctxA)、溶血素基因(hlyA)、毒素协调菌毛基因(tcpA)、调控蛋白基因(toxR)和编码霍乱毒素基因的CTX基因组基因(zot、ace)。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)方法对O139群霍乱弧菌菌株进行分子分型。采用WHO推荐的改良K-B纸片法,对O139群霍乱弧菌菌株进行11种抗菌药物(头孢曲松、强力霉素、诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、丁胺卡那霉素、四环素、氯霉素、萘啶酸、氨苄西林、庆大霉素)敏感试验。结果 患者来源O139群霍乱弧菌菌株93.2%(41/44)为产毒株,水产来源菌株58.3%(21/36)为产毒株,6株水体来源菌株均为非产毒株。PFGE分析将O139群霍乱弧菌分为35个型别。MLST分析将O139群霍乱弧菌分为9个ST型,其中流行菌型为ST 69型,非产毒株以ST 162型为主。86株O139群霍乱弧菌经药物敏感试验分析显示O139群霍乱弧菌产毒株的耐药情况比非产毒株严重。O139群霍乱弧菌产毒株对强力霉素、复方新诺明、四环素、萘啶酸、氨苄西林、庆大霉素的耐药率高。O139群霍乱弧菌非产毒株对萘啶酸耐药严重。结论 上海市患者和水产来源O139群霍乱弧菌构成以产毒株为主。PFGE分型提示水产为霍乱疫情的主要传染源。O139群霍乱弧菌产毒株高度克隆化,流行菌型为ST 69型,耐药情况严重。