急性胰腺炎合并感染患者的病原菌分布及耐药性

目的分析急性胰腺炎(AP)患者合并感染的病原菌分布及耐药特征,以指导临床合理使用抗菌药物。方法回顾性收集2016—2018年AP合并感染患者感染病原菌及其耐药情况,将AP按疾病严重程度分为重症急性胰腺炎(SAP)组与非SAP组,比较两组患者感染病原菌分布及多重耐药菌(MDRO)检出的差异。结果最终纳入262例AP合并感染患者,其中混合感染患者144例(54.96%)。共分离出病原菌291株,其中革兰阴性菌207株(71.13%),革兰阳性菌84株(28.87%);居前三位的病原菌分别是大肠埃希菌(71株)、肺炎克雷伯菌(45株)及鲍曼不动杆菌(40株)。SAP组患者鲍曼不动杆菌感染率,MDRO感染率高于非SAP组(P0.05),胆源性AP患者较非胆源性AP患者更易发生MDRO感染(P0.05)。大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌对第三代头孢、氟喹诺酮类抗菌药物的耐药率均在50%以上,对亚胺培南的耐药率分别为9.86%和35.56%;鲍曼不动杆菌除对氨苄西林/舒巴坦、阿米卡星的耐药率35%外,对其他大部分抗菌药物的耐药率均60%;未检测出耐利奈唑胺、万古霉素、替加环素及替考拉宁的革兰阳性菌株。结论 AP患者细菌感染以革兰阴性菌为主,具有高度耐药性和多重耐药性,且MDRO感染对SAP患者的治疗构成严重威胁。     

淋病奈瑟球菌表面蛋白A基因疫苗的构建及其诱导小鼠的免疫应答

目的构建淋病奈瑟球菌表面蛋白A（NspA）基因疫苗，并接种小鼠，评价其诱导的体液和细胞免疫应答。方法将NspA基因插入到真核表达载体pcDNA3．1（＋）中，构建重组真核表达质粒pcDNA3．1（＋）／NspA，并经PCR、双酶切及测序鉴定。反转录一聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学法分别检测NspA基因转染细胞后mRNA和蛋白的表达。以pcDNA3．1（＋）／NspA重组质粒免疫45只雄性BALB／c小鼠，试管凝集法检测免疫小鼠抗体滴度，ELISA检测IFN-γ水平，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测脾淋巴细胞增殖。提取接种部位股四头肌总DNA，PCR检测BALB／c小鼠肌细胞内NspA基因。结果成功构建pcDNA3．1（＋）／NspA基因疫苗，能在真核细胞中转录和表达。pcDNA3．1（＋）／NspA免疫组的抗体滴度达1：640，pcDNA3．1（＋）和PBS免疫组均无特异性抗体检出。空载体pcDNA3．1（＋）组IFN-γ为（23．79±11．85）pg／mL，pcDNA3．1（＋）／NspA免疫组为（169．71±30．52）pg／mL（P〈0．01）；脾淋巴细胞增殖的刺激指数（SI）分别为1．05±0．30和1．94±0．74（P〈0．01）。并证实NspA基因可在小鼠肌细胞中稳定存在。结论构建淋病奈瑟球菌NspA基因疫苗，将其免疫BALB／c小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫应答，为进一步用于淋病预防奠定了基础。     

马尔尼菲青霉菌鉴定要点及该菌酵母相体外药敏分析

目的了解马尔尼菲青霉菌(PM)鉴定要点及该菌酵母相体外药敏结果,以指导临床合理用药。方法收集某院2009—2016年23例PM感染患者血或骨髓的分离株,观察其菌落形态,采用E-test法分析酵母相PM对伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、氟康唑的药物敏感性。结果 PM形态:组织标本瑞氏染色直接镜检,可见典型卵圆形或圆形有明显横隔的孢子,常位于巨噬细胞内;血培养标本革兰染色镜检,可见菌体两端钝圆略弯曲呈腊肠样,偶有分枝状,可见有横隔。PM为双相型真菌,28°C为菌丝相,产生红色色素扩散入培养基中;35°C为酵母相,并有各自典型的菌落形态特征。伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、氟康唑对酵母相(35°C)PM的最低抑菌浓度(MIC)范围分别为0.002~0.016、0.012~0.125、0.002~0.500、0.500~16.000μg/m L。结论 PM的特征性菌落形态,以及骨髓和外周血发现的真菌孢子对该菌有诊断价值。该菌对伊曲康唑敏感性最强,其次是伏立康唑、两性霉素B,而氟康唑敏感性相对较弱。     

湖南儿童抗生素使用前呼吸道感染的细菌病原学分析

[目的]了解湖南地区儿童抗生素使用前呼吸道感染的细菌分布特点,为本地区儿童呼吸道感染的临床诊疗提供病原学依据.[方法]以2012年3月到2014年12月在湖南长沙、湘潭、岳阳、常德、衡阳、邵阳以及郴州等12个哨点单位因急性呼吸道感染就诊且未使用抗生素的患儿为研究对象,采集鼻咽拭子标本进行细菌培养,结合临床资料进行统计分析.[结果]886例细菌检测样本中培养阳性188例(21.22％),其中以肺炎链球菌(8.24％)、卡他莫拉菌(3.05％)、流感嗜血杆菌(2.60％)多见.不同年龄组中,≤6个月组细菌检出率高于其他4组,差异有统计学意义;不同季节细菌检出率差异有统计学意义,以春季检出率最高,夏季最低.样本送检时间对细菌培养阳性率有一定影响,但无统计学差异.[结论]湖南地区儿童抗生素使用前呼吸道感染的最常见细菌为肺炎链球菌,其次为卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌.各种细菌在不同年龄、季节阳性检出率有差异.样本送检时间对细菌检出率无显著影响.     

2013—2017年某院呼吸道分离病原菌分布及耐药性分析

目的 分析某院呼吸道分离的病原菌分布及耐药性,为指导临床用药及院感监控提供理论依据。方法 对某院2013—2017年送检呼吸道标本进行细菌分离培养及鉴定,对阳性培养菌株开展药物敏感性试验,细菌分布及药敏数据分析采用WHONET 5.6软件进行统计。结果 分离革兰阴性菌前六位分别是肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、流感嗜血杆菌;革兰阳性菌前二位为肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌。排前四位的肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素耐药率为4.1%~11.6%,其中大肠埃希菌对喹诺酮类药物的耐药率明显高于其他三种肠杆菌,未发现对替加环素耐药的菌株。非发酵菌中鲍曼不动杆菌除对替加环素、头孢哌酮/舒巴坦较敏感外,对多种抗菌药物有较高的耐药性,其中对氨基糖苷类耐药率波动在45%左右,对碳青霉烯类的耐药率大于50%。铜绿假单胞菌除存在天然耐药外,其他抗菌药物的耐药率均低于鲍曼不动杆菌,其中对氨基糖苷类耐药率＜10%。肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素5年内的耐药率呈持续上升,差异有统计学意义(χ²=87.34,P<0.05)。肺炎链球菌对青霉素的耐药率为1.9%,未发现对万古霉素、利奈唑胺及替考拉宁耐药的金黄色葡萄球菌。结论 呼吸道标本检出菌主要为革兰阴性菌,对头孢菌素类耐药率高,对碳青霉烯类抗生素耐药率日趋严重。应规范抗菌药物的使用,控制多重耐药菌的流行与传播。     

衡阳地区支原体临床分离株对抗生素耐药性监测

目的比较四环素类、大环内酯类和喹诺酮类三类抗菌药物对解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)的抗菌作用,为临床用药提供参考依据。方法采用直接肉汤药盘法测定了临床标本中195株Uu和118株Mh对三类抗菌药物中的8种抗生素的敏感性。结果195株Uu对四环素、多西环素、米诺环素、罗红霉素、阿齐霉素、交沙霉素、氧氟沙星、司帕沙星的敏感率分别为21.0%、48.2%、39.5%、79.0%、88.7%、74.9%、28.2%和64.6%。118株Mh对四环素、多西环素、米诺环素、罗红霉素、阿齐霉素、交沙霉素、氧氟沙星、司帕沙星的敏感率分别为5.1%、33.9%、26.3%、0.0%、0.0%、89.8%、70.3%和64.4%。960例混合感染的Uu Mh,对交沙霉素最敏感(79.2%)。结论泌尿生殖道支原体的耐药性监测对指导临床治疗具有重要意义。     

pcDNA3．1（＋）／NspA真核表达载体的构建及鉴定

目的构建pcDNA3.1( )淋病奈瑟菌外膜蛋白—奈瑟菌表面蛋白A(Neisseria surface Protein A,NspA)基因真核表达载体,为研制淋病奈瑟菌核酸疫苗奠定基础。方法根据淋病奈瑟菌NspA基因序列,设计合成一对引物,用PCR方法从淋病奈瑟菌基因组DNA中扩增出NspA基因片段,将扩增的产物连接于测序载体pUCm-T上,并构建重组体pcDNA3.1( )/NspA,进行酶切、PCR及测序鉴定。结果NspA基因体外扩增产物大小约为525 bp。所构建的pcDNA3.1( )/NspA重组体经双酶切及PCR鉴定,与预期片断的大小相符;测序结果与GenBank中收录的NspA全长序列一致,表明pcDNA3.1( )/NspA真核表达载体构建正确。结论成功地构建了淋病奈瑟菌真核重组表达载体pcD-NA3.1( )/NspA,为NspA蛋白的功能研究和淋病奈瑟菌核酸疫苗的研制提供了物质基础。     

结核杆菌Edman株Ag85C基因的克隆表达与鉴定

目的克隆人结核杆菌Ag85C基因并在大肠杆菌中表达,研究其对结核病预防和治疗过程中的免疫保护作用。方法设计一对特异性引物,PCR扩增人结核杆菌Edman株Ag85C基因开放阅读框并定向克隆到原核表达载体pQE30,通过酶切、PCR和测序鉴定重组质粒,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的重组蛋白。结果构建了pQE30-Ag85C重组质粒;在大肠杆菌中表达了一分子量约30kDa的重组蛋白。结论重组质粒pQE30-Ag85C构建成功并在大肠杆菌中高效表达,为Ag85C保护性抗原位点分析和新型疫苗的研制奠定了基础。     

ST2928新型耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌引起的重症肺炎1例

目的 分析耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌（CR-HvKP）的分子特征和毒力,以加强临床工作者对该菌的认识。方法 对1株分离自重症肺炎患者呼吸道标本的CR-HvKP进行药敏试验,并研究其对碳青霉烯类的耐药机制,通过拉丝试验、毒力基因检测、毒力相关荚膜抗原基因检测、多位点序列分型、大蜡螟感染模型试验和患者临床表现分析该菌的分子及毒力特征。结果 CR-HvKP引起了患者严重的肺部感染,予以纤维支气管镜检查取肺泡灌洗液标本培养分离病原菌,根据其药敏结果及时更改抗菌药物后患者病情得到控制。该菌为多重耐药株,表达IMP-4型碳青霉烯酶,拉丝试验阴性,为ST2928型,prmpA₂毒力基因阳性,K54荚膜抗原基因阳性,在大蜡螟模型试验中表现出较高的体外毒力。结论 此次分离的ST2928型、K54荚膜抗原基因阳性并且产IMP-4型碳青霉烯酶的CR-HvKP系首次报告,CR-HvKP因其高耐药性和高毒力的结合可引起较为复杂和严重的感染,其分子特征呈多样性。