MicroRNA-539靶向调控E2F转录因子3抑制肝癌的发生与发展

目的 探讨肝癌组织中microRNA-539（miR-539）表达水平及其抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法 收集90例肝癌患者术后肝癌组织及癌旁组织标本,用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测组织中miR-539表达量。在PCL/PRF5、Huh7和QGY-7701肝癌细胞中转染miR-539 模拟物（mimics）,用Real-time PCR检测miR-539表达量。用MTT法检测miR-539对肝癌细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测miR-539对肝癌细胞凋亡的影响;用免疫印迹法检测miR-539对肝癌细胞中E2F转录因子3（E2F3）蛋白表达的影响。结果 肝癌组织中miR-539表达量显著低于癌旁组织（P<0.05）;miR-539表达量与肝癌患者性别、年龄及肝癌组织分化程度无关（P>0.05）;与肿瘤直径和淋巴结转移相关（P<0.05）。转染miR-539 mimics组肝癌细胞中miR-539表达量显著高于空白组和miR-539 NC组（P<0.05）。在QGY-7701细胞中,过表达miR-539能显著抑制细胞增殖（P<0.05）,降低E2F3蛋白的表达（P<0.05）,对细胞凋亡无明显作用（P>0.05）。结论 miR-539是肝癌发生中的抑癌因子,可能是通过靶向下调E2F3蛋白水平达到抑制癌细胞的增殖。     

淋病奈瑟球菌表面蛋白A基因疫苗的构建及其诱导小鼠的免疫应答

目的构建淋病奈瑟球菌表面蛋白A（NspA）基因疫苗，并接种小鼠，评价其诱导的体液和细胞免疫应答。方法将NspA基因插入到真核表达载体pcDNA3．1（＋）中，构建重组真核表达质粒pcDNA3．1（＋）／NspA，并经PCR、双酶切及测序鉴定。反转录一聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学法分别检测NspA基因转染细胞后mRNA和蛋白的表达。以pcDNA3．1（＋）／NspA重组质粒免疫45只雄性BALB／c小鼠，试管凝集法检测免疫小鼠抗体滴度，ELISA检测IFN-γ水平，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测脾淋巴细胞增殖。提取接种部位股四头肌总DNA，PCR检测BALB／c小鼠肌细胞内NspA基因。结果成功构建pcDNA3．1（＋）／NspA基因疫苗，能在真核细胞中转录和表达。pcDNA3．1（＋）／NspA免疫组的抗体滴度达1：640，pcDNA3．1（＋）和PBS免疫组均无特异性抗体检出。空载体pcDNA3．1（＋）组IFN-γ为（23．79±11．85）pg／mL，pcDNA3．1（＋）／NspA免疫组为（169．71±30．52）pg／mL（P〈0．01）；脾淋巴细胞增殖的刺激指数（SI）分别为1．05±0．30和1．94±0．74（P〈0．01）。并证实NspA基因可在小鼠肌细胞中稳定存在。结论构建淋病奈瑟球菌NspA基因疫苗，将其免疫BALB／c小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫应答，为进一步用于淋病预防奠定了基础。     

SV40LT基因重组腺病毒载体的包装、鉴定及用于转染日本血吸虫童虫细胞的研究

目的构建携带SV40LT基因的重组腺病毒表达载体,制备具有感染力的重组腺病毒,观察其转染日本血吸虫（Schistosoma japonicum,Sj）童虫细胞后的表达情况。方法采用体外连接法构建好的携带SV40LT基因的重组腺病毒质粒（AdHu5-SV40LT）转化Stbl2感受态菌,获得重组腺病毒质粒后,经Pac I酶切线性化后转染293A细胞,获得出重组腺病毒（AdHu5-SV40LT）。将重组腺病毒感染Sj童虫细胞,采用RT-PCR和免疫组织化学检测SV40LT基因的表达情况。结果重组腺病毒载体质粒可转染293A细胞并可在293A细胞内进行有效的复制;提取病毒DNA进行PCR检测证实含有SV40LT目的基因。以重组腺病毒能感染Sj童虫细胞,经RT-PCR和免疫组化检测有SV40LT基因在细胞中的表达。结论成功包装了具有感染能力的含SV40LT基因的重组腺病毒,感染Sj童虫细胞后目的基因有表达,为进一步探索日本血吸虫细胞永生化提供了实验依据。     

不同剂量环孢菌素A制备免疫缺陷小鼠模型的研究

目的 研究不同剂量环孢菌素A(CsA)对小鼠免疫功能的影响,为细胞免疫缺陷型动物模型的建立奠定基础.方法 实验设CsA高、中、低剂量组,溶液对照组和正常对照组.CsA高、中、低剂量组分别经腹腔注射CsA 40、25、10 mg/(kg·d),溶液对照组给予等容积的稀释液,正常对照组给予等容积生理盐水,隔天1次,共注射3次.观察以下指标:(1)CD4+T和CD8+T细胞亚群百分率;(2)小鼠脾脏、胸腺质量指数和病理变化;(3)小鼠肺组织的病理变化及小鼠死亡率.结果 与正常对照组和溶液对照组比较:(1)高、中剂量CsA组CD4+T细胞亚群百分率明显下降(P＜0.05或P＜0.01),高剂量组CD8+T细胞亚群百分率明显升高(P＜0.05);(2)CsA高、中剂量组胸腺指数明显下降(P＜0.01),胸腺萎缩、脂肪变性、中间有淋巴小结样结构,脾脏指数各组间前后均无明显改变;高、中、低剂量组脾脏均有代偿性的白髓增大、脾小体增大、巨噬细胞增多;(3)高、中、低剂量CsA肺脏有局灶性炎症改变、间质增生、肺泡纤维度增生;高剂量组的小鼠死亡率显著升高,达60％.结论 腹腔注射高、中剂量的CsA均可成功建立免疫缺陷型动物模型,但从效率和经济性考虑,中剂量CsA更适合用于模型的建立.     

丙泊酚复合雷米芬太尼在乳腺区段切除术中的应用

目的观察丙泊酚复合不同靶控浓度雷米芬太尼对乳腺区段切除手术麻醉效果和术后恢复的影响。方法 60例择期行乳腺区段切除手术的患者,随机均分为R1、R2、R3组,雷米芬太尼的靶控浓度分别为2、4、6ng/ml,丙泊酚靶控浓度为4μg/ml。记录丙泊酚用量、血流动力学、BIS值、术中肢动及术后恢复情况。结果 R2、R3组患者意识消失时间和喉罩置入时丙泊酚总用量明显少于R1组(P0.05)。喉罩置入前、后和切皮后R2、R3组的MAP、HR较R1组明显下降和减慢(P0.05);R1组术中肢动的反应和丙泊酚用量明显高于R2、R3组(P0.05);手术结束后自主呼吸恢复时间、呼之睁眼时间、拔除喉罩时间、定向力恢复时间、以及苏醒后VAS评分、恶心呕吐发生率三组间差异均无统计学意义。结论在乳腺区段切除手术中,靶控输注4μg/ml丙泊酚复合大于4ng/ml的雷米芬太尼可以取得满意的麻醉效果,且术后恢复迅速。     

自拟疏风利肺汤治疗咳嗽变异性哮喘的临床研究

目的 观察疏风利肺汤对咳嗽变异性哮喘（CVA）（风痰恋肺证）的临床疗效.方法 将100例患者随机分为两组,治疗组口服疏风利肺汤,对照组吸入沙美特罗氟替卡松粉吸入剂,两组疗程均为4周.结果 治疗组咳嗽改善情况优于对照组（P＜0.05）;中医症候方面治疗组疗效优于对照组（P＜0.05）;气道反应性比较,治疗组改善优于对照组（P＜0.05）;两组生活质量均较治疗前改善（P＜0.05）,组间比较,治疗组生活质量总分优于对照组（P＜0.05）.结论 疏风利肺汤治疗CVA患者（风痰恋肺证）疗效确切,能有效改善患者的临床症状、生活质量,且疗效优于对照组,并能降低气道反应性.     

12种抗菌药物体外抗表皮葡萄球菌的活性研究

用微量肉汤稀释法测定从慢性前列腺炎患者标本中分离的４９株表皮葡萄球菌的抗菌活性及β－内酰胺酶。结果显示：美满霉素、白霉素有较强的抗菌作用，ＭＩＣ５０分别为０．２５ｍｇ／Ｌ、１ｍｇ／Ｌ，ＭＩＣ９０分别为２ｍｇ／Ｌ、８ｍｇ／Ｌ。环丙沙星、氧氟沙星抗菌作用次之，ＭＩＣ５０分别为０．５ｍｇ／Ｌ、１ｍｇ／Ｌ，ＭＩＣ９０均为３２ｍｇ／Ｌ。氨苄青霉素、林可霉素、淋必治抗菌作用较弱，ＭＩＣ５０分别为４ｍｇ／Ｌ、８ｍｇ／Ｌ、１６ｍｇ／Ｌ，ＭＩＣ９０分别为３２ｍｇ／Ｌ、６４ｍｇ／Ｌ、３２ｍｇ／Ｌ。表皮葡萄球菌对交沙霉素、阿奇红霉素、头孢拉定、罗红霉素及菌必治有较高抵抗作用，耐药率分别达４２．８６％、５９．１８％、６３．２７％、６７．３５％及７５．５１％。４９株表皮葡萄球菌β－内酰胺酶阳性率为８１．６３％。研究表明表皮葡萄球菌的多重耐药性较多见，临床医师应根据药敏结果，选用有效的抗生素以控制表皮葡萄球菌的机会感染，防止耐药菌株产生     

外固定支架治疗胫腓骨下端粉碎性骨折(pilon骨折)的治疗体会

目的探索一种治疗胫腓骨下端累及踝关节的粉碎性骨折较为理想的方法。方法应用改良的Bastiani单臂多功能外固定支架治疗胫腓骨下端累及踝关节的粉碎性骨折(pilon骨折)23例,骨质缺损较大时取髂骨或人造骨植骨。结果术后随访10mo￣3.5年,平均1.5年,根据病人骨折愈合情况,踝关节的活动度,优良率为85.9%。结论应用外固定支架治疗pilon骨折具有复位理想、固定牢、手术操作简单、病人可以早期下床活动等优点,并且不需2次手术取出内固定物,尤其适用于严重的皮肤软组织损伤及缺损的病人。