第3～5周人胚肝的细胞特征和生长因子及其受体表达

背景：早期肝的发育与横隔间充质和原始心脏的发育在时间和空间上存在密切关系，来自原始心脏和横隔间充质的信号分子可诱导前肠内胚层细胞向肝细胞的特化，横隔间充质为肝芽的形成提供了一个适宜的环境，并可促进其生长和分化。但这一诱导过程的分子机制尚不清楚。 目的：利用发育第3～5周人胚标本，选择甲胎蛋白、细胞角蛋白19、c—Met作为肝干细胞的标记物，观察早期人胚胎的发育及肝干细胞的形态特征，以明确肝干细胞的特征和影响其增殖、分化的因素，为肝干细胞的基础研究和临床应用提供实验依据。 设计：开放性实验。 单位：潍坊医学院人体解剖学教研室。 材料：实验于2004-09／2005-01在成都医学院科研中心完成。选择2个月内流产的新鲜人胚胎标本20例，20min内用40g/L多聚甲醛固定，常规石蜡包埋、连续切片，苏木精-伊红染色，显微镜下观察，参照Jirasek的人胚发育分期标准，根据胚胎的长度、体节的数目及器官发育状况确定胚龄。 方法：选择胚龄第3-5周的标本，SABC法进行免疫组织化学染色。多克隆抗肝细胞生长因子、c—Met、胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体、转化生长因子β1、转化生长因子β受体1、转化生长因子β受体2抗体，单克隆抗增殖细胞核抗原、甲胎蛋白和细胞角蛋白19抗体，4℃孵育过夜，羊抗兔或羊抗鼠ⅠgG及SABC液室温下分别孵育2h，二氨基联苯胺显色。以磷酸盐缓冲液代替-抗作阴性对照。光学显微镜下观察、拍照。 主要观察指标：第3～5周人胚肝干细胞的形态特征及标记物的免疫组织化学染色，肝细胞生长因子、转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体在第3-5周人胚肝、原始心脏及横隔间充质细胞中的表达。 结果：①第3-5周人胚肝干细胞的形态特征及标记物的免疫组织化学染色观察：第3周末肝芽形成，第4周肝芽的细胞伸人横隔间充质内形成肝索，构成肝索的细胞具有与第3周末相同的形态特点。第5周时这些细胞数量明显增加，细胞体积有所增大，胞核嗜碱性稍减弱，胞质的嗜酸性增强，但细胞的形态仍均匀一致。第3～4周时肝索的细胞呈增殖细胞核抗原的反应阴性，5周时开始出现阳性反应，主要分布在细胞核，少数细胞的胞质为弱阳性。第3～5周时多数肝索细胞都为甲胎蛋白和c—Met阳性，甲胎蛋白阳性细胞的免疫反应沉淀物在胞核、胞质及细胞膜中均存在；c—Met阳性反应主要分布于细胞核，胞质亦可见较弱的阳性反应。而这些细胞为细胞角蛋白19阴性。②肝细胞生长因子、转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体在第3—5周人胚肝、原始心脏及横隔间充质细胞中的表达：发育第4周组成肝索的细胞表达c—Met，而不表达其他的因子或受体。第5周时，除了肝细胞生长因子以外的其他因子均在肝索细胞表达。转化生长因子β1及其受体转化生长因子β受体l、转化生长因子β受体2的免疫反应沉淀物主要存在于细胞质和细胞膜，胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体的阳性反应在细胞核、细胞质以及细细胞膜均可见。第3-5周时，肝芽或肝索周围的心肌细胞和间充质细胞呈肝细胞生长因子、转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ免疫反应阳性，阳性信号主要聚集在细胞质，少数胞核亦有阳性。 结论：①人胚胎发育的第3周末，前肠腹侧的部分内胚层细胞特化为肝干细胞。②发育第3-5周人胚肝的细胞为未分化的肝干细胞，若拟研究人胚肝干细胞，此时取材、并利用肝干细胞特异性的标记物，可得到具有双向分化潜能的肝干细胞。对于鼠胚肝于细胞的研究，也可利用人、鼠胚龄的对应关系，推算出其肝干细胞存在的时间、从而决定取材的时间点。③肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子Ⅰ、转化生长因子β1等生长因子促进早期人胚肝的发育。     

DEAD-box RNA解旋酶与疾病的研究进展

<正>DEAD-box家族蛋白是一类ATP酶(ATPase)活性依赖的RNA解旋酶,在进化上高度保守,广泛分布在真核生物体内。自20世纪80年代eIF4A(eukaryotic initiation factor 4A)被发现至今,不论是病毒的复制还是哺乳动物体内信号调控,DEADbox家族蛋白几乎涉及与RNA相关的一切生命活动~([1])。DEAD-box蛋白家族成员除了作为ATPase活性依赖性的RNA解旋酶外,还可以作为共激活转录因子调控细胞生理活动,甚至     

DDX3和酪蛋白激酶1ε在肌萎缩侧索硬化症转基因鼠海马中的表达

目的检测DDX3和酪蛋白激酶1ε(CK1ε)在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因鼠海马中的表达变化,揭示DDX3和CK1ε的表达改变与ALS发病的关系。方法 33只ALS转基因鼠和33只野生型鼠分别于发病不同时期取材,应用RT-PCR和Western blotting技术检测海马组织中DDX3和CK1ε的表达变化;通过免疫荧光双标染色技术观察DDX3和CK1ε阳性细胞的分布特点及其与神经元、星形胶质细胞等的共表达情况。结果与野生型鼠相比,ALS转基因鼠海马中DDX3 mRNA和蛋白在发病早期变化不明显,中期和晚期表达均明显降低;CK1εmRNA和蛋白则在发病早期、中期和晚期表达均降低。免疫荧光双标结果显示,在ALS鼠和野生型鼠海马齿状回区和CA区均可检测到DDX3和CK1ε阳性细胞。DDX3和CK1ε主要表达在神经元,在星形胶质细胞未见表达。与野生型鼠比较,ALS转基因鼠海马中DDX3和CK1ε免疫反应性明显降低。结论 DDX3和CK1εmRNA和蛋白在ALS转基因鼠海马中表达均降低,表明DDX3和CK1ε表达异常与ALS海马区病变密切相关。     

血管内皮生长因子及其受体和angiopoietin及其受体在人胚胎造血过程中的作用

背量：血管内皮生长因子家族及其受体在血管生成和新血管形成过程中具有重要作用。近来，有关血管内皮生长因子家族对血液发生的作用受到广泛关注。 目的：观察血管内皮生长因子A、血管内皮生长因子C及其受体和alI．giopoietin-1（ang-1）、angiopoietin-2（ang-2）及其受体在发育第3-12周人胚胎卵黄囊血岛、主动脉-生殖腺-中肾区的表达，以了解血管内皮生长因子和angiopoietin家族在血液发生过程中的作用。 设计：单一样本观察。 单位：潍坊医学院，形态实验中心和解剖学教研室。 对象：实验于2002-02／2004-08在潍坊医学院进行，收集流产的47例孕妇的受糟龄第3-12周人胚胎标本，孕妇知情同意。 方法：标本连续切片，每隔10张抽出2张切片，分别做苏木精一伊红染色和免疫组织化学染色。多克隆抗血管内皮生长因子C，fms样酪氨酸激酶，flt-4，ang-1，ang-2，Tie-2抗体以及单克隆抗血管内皮生长因子A，胎肝激酶l抗体4℃孵育过夜，羊抗鼠IgG及SABC液室温下分别孵育2h，DAB显色。分别以正常兔或鼠血清代替一抗作阴性对照。光学显微镜下观察、拍照。 主要观察指标：①血管内皮生长因子A和血管内皮生长因子C及其受体在发育第3-12周人胚胎卵黄囊血岛、主动脉-生殖腺-中肾区的时空表达。②ang-1和ang-2及其受体在发育第3-12周人胚胎卵黄囊血岛、主动脉-生殖腺-中肾区的时空表达。结果：①第21-25天人胚卵黄囊血岛血管内皮细胞和造血细胞强表达血管内皮生长因子A及其受体fms样酪氨酸激酶和胎肝激酶l、血管内皮生长因子C及其受体胎肝激酶4、ang-2及其受体Tie-2蛋白，弱表达ang-1蛋白。②背主动脉和中肾于发育第4周开始表达上述各种因子及其受体，免疫阳性反应物集中在大而圆、有核的造血细胞。阳性细胞的数量到第7周到达高峰。8周以后，阳性细胞数量显著减少，到12周，几乎所有的血细胞为免疫阴性反应。③生殖腺主要在第6-8周表达血管内皮生长因子A，fms样酪氨酸激酶，flt-4，ang-1,ang-2和Tie-2蛋白，但不表达血管内皮生长因子C和胎肝激酶l。④主动脉一生殖腺一中肾区的血管内皮细胞未检测到上述各因子的表达。 结论：人胚卵黄囊血岛造血细胞和内皮细胞以及背主动脉和中肾共表达多种与血管发生和血液发生相关的因子。人胚内造血发生于第4周。     

不同发育阶段大鼠睾丸中Calretinin的表达

目的：Calretinin（CALB2）是一种钙结合蛋白。前期研究表明,CALB2可表达于人睾丸组织,推测其参与睾丸功能的调节。本研究观察不同发育阶段大鼠睾丸中CALB2的表达水平,探讨其在调节雄激素生成中的作用。方法： 3～4周龄SD雄性大鼠作为性发育前组（相当于人类的青春期前,n=35）,16周龄SD鼠作为性成熟组（相当于人类的成年期,n=16）,12个月以上的作为老年组（相当于人类男子的中老年,n=10）。放射免疫法测定各组血清睾酮浓度;免疫组织化学法观察CALB2的定位表达;定量聚合酶链反应（qPCR）和蛋白质印迹法（Western Blot）分别检测睾丸中CALB2 mRNA和蛋白水平的表达。结果：CALB2表达定位于睾丸的间质细胞,细胞内定位于细胞质中。性发育前组大鼠血清睾酮水平最低,性成熟组最高,差异有统计学意义（P＜0.05）。性成熟组大鼠睾丸CALB2的表达水平较性发育前组和老年组均升高（P＜0.05）。结论：睾丸组织中,CALB2表达于间质细胞的细胞质;在不同发育阶段,睾丸间质细胞CALB2表达水平与血清睾酮水平呈正相关,表明CALB2参与调节雄激素生成。     

第3～12周人胚肝甲胎蛋白及细胞角蛋白1 9和c-Met的时空表达

背景:现阶段对于肝干细胞在胚胎肝发育过程中的形态学特征、时空分布、分化过程的报道很少.目的:以甲胎蛋白、细胞角蛋白19、c-Met作为标志物,观察其在不同发育阶段肝干细胞中的时空分布.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-06/2006-12在潍坊医学院中心实验室完成.材料:40例胚胎标本取自3个月内的流产胎儿,由潍坊医学院附属医院提供.方法:收集流产胚胎,30 min内制作切片,显微镜下根据胚层形成情况、体节数目及器官发育状况确定胎龄.选择胎龄第3～12周的标本切片,每隔10张抽出1张切片,行免疫组织化学染色.主要观察指标:第3～12周胚胎肝干细胞甲胎蛋白、c-Met、细胞角蛋白19的表达.结果:第3～5周甲胎蛋白、c-Met呈阳性反应,提示为肝干细胞;第10～12周甲胎蛋白、c-Met阳性细胞主要分布于汇管区周围,提示此时肝干细胞主要局限于汇管区周围的肝索内,与成年肝中卵圆细胞(成年肝干细胞)的分布一致.细胞角蛋白19阳性反应在第7周时开始出现;第10～11周时细胞角蛋白19阳性反应主要位于汇管区附近的肝索细胞和胆管板细胞及胆管上皮细胞;第12周时细胞角蛋白19阳性信号仪见于胆管板和胆管上皮细胞.此时所有的胆管板细胞及胆管上皮细胞均呈甲胎蛋白、c-Met和细胞角蛋白19阳性.结论:细胞角蛋白19在肝干细胞中无表达,仅在胆管上皮细胞及其祖细胞中有表达,可能不适合作为肝干细胞的标志物.所有的胆管板及胆管上皮细胞均呈甲胎蛋白、c-Met、细胞角蛋白19阳性反应,推测甲胎蛋白+/c-Met+/细胞角蛋白19+的细胞可能为胆管祖细胞.     

内毒素性休克与丘脑环核苷酸含量变化的观察

本试验观察到家兔内毒素性休克引起低血压时,其下丘脑前区cGMP明显升高,脑脊液中cGMP也有所升高。由此推测内毒素性休克引起低血压效应可能与下丘脑前区CGMP含量的升高有着密切的关系。     

留学生解剖英语教学中的几点体会

<正>为了适应医学高等教育国际化的趋势,我校2003年开始接收外国留学生。我校的《人体解剖学》是省级精品课程,我们在以学生为主体的教学理念指导下,无论在教学准备,还是实施过程中都注重     

COPD模型大鼠肺组织TGF-β1 mRNA的表达及意义

目的探讨转化生长因子良（TGF-β1）在长期吸烟所致慢性阻塞性肺疾病（COPD）病理变化中的作用。方法将大鼠随机分为对照组和模型组，分别分为1-6月组，每组6只。建立大鼠吸烟COPD模型。光镜下观察吸烟对大鼠肺组织结构的影响，RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA在肺组织中的表达。结果随吸烟时间延长，肺泡腔不规则扩大，肺泡间隔破裂，有的肺泡融合成肺大泡，以吸烟6月组最为明显，肺组织结构表明COPD模型建立成功。RT-PCR结果表明，TGF-β1mRNA在正常肺组织中呈微弱表达，随吸烟时间的延长，TGF-β1mRNA表达增多，5月组表达最多。结论长期吸烟可引起气道壁炎细胞浸润及肺组织形态学变化，导致COPD发生。TGF-β1，表达随吸烟月份增加逐渐增多，肺组织结构破坏与TGF-β1表达有相关性，表明TGF-β1在COPD的发生和发展过程中起重要作用。     

我校机能实验教学改革的现状与问题分析

医学实验课教学是医学教育的重要组成部分,对培养学生科学的思维方法、创新能力和严谨的科学作风有着重要作用。在此就我校机能实验教学改革取得的成绩、现状和面临的一些问题进行探讨,以期为进一步深化改革提供借鉴。