结核分枝杆菌模拟抗原的筛选及初步应用

目的 通过对甲期分泌抗原-6(ESAT-6)及培养基滤过蛋白-10(CFP-10)肽库的结核分枝杆菌模拟抗原的筛选,旨在建立一个临床鉴别诊断结核分枝杆菌感染的新方法.方法 基于蛋白ESAT-6和CFP 10的序列,随机设计合成一组1 9肽库,通过γ-干扰素释放试验筛选特异性结核分枝杆菌抗原模拟多肽,并研究确立其工作浓度.结果 经过多轮筛选获得3条特异性模拟多肽,分别是P1MG、P8NV、P11LD,灵敏度分别为93.3％、90.0％、80.0％,特异性均＞90.0％;工作浓度均为2 μg/ml;将3种模拟多肽等浓度混合作为刺激原,初步临床验证试验表明,其灵敏度为95.3％,特异性为96.2％.结论 基于蛋白ESAT-6和CFP-10的序列设计、筛选、制备的混合型模拟多肽抗原,有望建立一种临床结核分枝杆菌鉴别诊断的新方法.     

白三烯A4水解酶基因多态性与结核性脑膜炎易感性的研究

目的 探讨中国汉族人群中白三烯A4水解酶（LTA4H）基因多态性与结核性脑膜炎的相关性。 方法 应用SNaPshot技术检测48例结核性脑膜炎患者和70名健康对照者LTA4H基因中rs1978331,rs2247570,rs2660898,rs2660845多态位点的等位基因、基因型和单体型分布频率,采用SHEsis软件进行相关统计学分析。 结果 对照组与患者组rs1978331多态性位点C等位基因例数分别为83和40、频率分别为59.3%和41.7%,T等位基因例数分别为57和56、频率分别为40.7%和58.3%,差异有统计学意义（χ²=7.080,P=0.008）;rs1978331位点CC、CT和TT基因型在对照组例和患者组中的例数分别为12、33、25和20、16、12,分布频率分别为17.1%、47.1%、35.7%和41.7%、33.3%、25.0%,差异有统计学意义（χ²=8.670,P=0.013）;rs2660898位点AA、AC和CC基因型在对照组和患者组中的数分别为28、32、10和20、12、16,分布频率分别为40.0%、45.7%、14.3%和41.7%、25.0%、33.3%,差异有统计学意义（χ²=7.980,P=0.019）;对照组与患者组单体型CACT频率分别为26.3%和45.8%,差异有统计学意义（χ²=7.349,P=0.007）。 结论 LTA4H基因中rs1978331基因多态性位点等位基因、rs1978331和rs2660898基因多态性位点基因型、单倍体型CACT与中国汉族人群结核性脑膜炎的易感性存在相关性。     

ADA、γ-IFN和SA检测在鉴别结核性和癌性胸水中的价值

目的探讨结核性和恶性胸水中腺苷脱氨酶（ADA）的活性、γ-干扰素（γ-IFN）和唾液酸（sA）的水平及其临床意义。方法采用比色法、酶联免疫吸附法（ELISA）和酵素法分别检测116例结核性、65例恶性胸腔积液中ADA活性、γ-IFN和sA含量。结果结核组胸腔积液中ADA活性、γ-IFN含量都明显高于恶性组，其P值分别为P〈0．01和P〈0．001。恶性组SA含量明显高于结核组（P〈0．01）。结论检测胸水中ADA活性、γ-IFN和SA含量有助于结核性和恶性胸腔积液的鉴别。     

ADA、γ-IFN和PCR 3种诊断结核性胸腔积液方法的临床观察

[目的]分析腺苷脱氨酶(ADA)、γ-干扰素(γ-IFN)和定量PCR在结核性胸腔积液诊断中的意义.[方法]应用ADA、γ-干扰素和聚合酶链反应3种检测方法对我院116例结核性胸腔积液患者,65例癌性胸腔积液患者进行检测分析.[结果]结核组胸腔积液中ADA活性、γ-IFN含量都明显高于恶性组,其P值分别为P<0.01和P<0.001.结核性胸腔积液患者PCR阳性率明显高于癌性胸腔积液患者,P值<0.01.其中γ-干扰素指标尤为显著.[结论]γ-干扰素检测可以作为结核性胸腔积液诊断的重要参考指标.在临床实践中如果3种检测方法相互印证有助于结核性胸腔积液的诊断.     

γ 干扰素释放试验联合IL-6 检测对活动性 肺结核的诊断价值

目的 探讨γ- 干扰素释放试验（IGRA）联合白细胞介素-6（IL-6）检测对活动性肺结核 的诊断价值。方法 选取2018 年6 月—2019 年6 月同济大学附属上海市肺科医院收治的700 例结核病患 者作为研究对象,其中包含活动性肺结核患者587 例（A 组）和非活动性肺结核患者113 例（B 组）,另取 同期该院体检的100 例健康人群作为对照组。比较3 组IGRA 阳性率及血清IL-6 水平。采用ROC 曲线评 价IGRA、IL-6 对活动性肺结核的诊断效能。结果 3 组血清IL-6 水平及IGRA 阳性率比较,差异有统计 学意义（P <0.05）,A 组高于B 组及对照组（P <0.05）,且B 组高于对照组（P <0.05）。通过ROC 曲线分 析,IGRA 诊断活动性肺结核的敏感性、特异性分别为80.92%（95% CI ：77.74,158.66）和70.80%（95% CI ： 62.41,133.21）。IL-6 ≥ 20.24 ng/L 时,其敏感性、特异性分别为74.79%（95% CI：71.27,146.06）和83.19%（95% CI ：76.29,159.48）;两者联合诊断的敏感性、特异性分别为84.33%（95% CI ：81.39,165.71）和85.84%（95% CI ：79.41,165.25）。结论 IGRA、IL-6 对活动性肺结核具有较高的诊断价值,且两者联合的敏感性、特异 性更高,可用于临床中活动性肺结核的辅助诊断。     

多表位融合抗原检测结核分枝杆菌抗体的应用价值

目的应用由基因重组表达的结核分枝杆菌多表位融合抗原检测血清或血浆中的结核抗体,评价其在结核病快速诊断中的价值。方法用酶免法分别对361例结核病人和288例非结核病人的血清标本进行检测。结果肺结核患者结核抗体的阳性率显著高于非结核患者。结论本试剂盒的敏感性为70.4%,特异性为84.9%。即血清结核抗体的检测对结核病的诊断和鉴别具有一定的临床价值。     

上海市某结核病定点医院非结核分枝杆菌肺病的诊断时间及影响因素分析

目的分析上海市某结核病定点医院2020—2021年非结核分枝杆菌(NTM)肺病患者的病原学特征、诊断所需时间及其影响因素, 为进一步提高NTM肺病诊断效率, 精准制定治疗方案提供依据。方法依托上海市肺科医院结核病专病数据库, 获取2020年1月至2021年12月在本院结核科诊断的NTM病患者及其人口学、临床特征和细菌学数据开展回顾性研究。采用卡方检验、配对样本非参数检验以及logistic回归模型等方法, 分析影响NTM肺病细菌学诊断时间的相关因素。结果研究共纳入294例细菌学诊断的NTM肺病患者, 男147例, 女147例, 年龄中位数为61(46, 69)岁。其中227例(77.2%)患者合并有支气管扩张。细菌学检测结果显示, 鸟-胞内分枝杆菌复合群是NTM肺病的主要致病菌(56.1%), 其次为堪萨斯(19.0%)和脓肿分枝杆菌(15.3%), 而蟾蜍、玛尔摩等分枝杆菌合计占比仅3.1%。对标本类型分析发现, 痰液、肺泡灌洗液和穿刺液标本培养阳性率分别为87.4%、80.3%、61.5%。按同一患者配对分析发现, 痰液培养的阳性率明显高于涂片检查(87.1%比48.4%, P&l...     

ADA、IFNγ-、sIL-2R检测在鉴别结核性和癌性胸水中的价值

目的研究腺苷脱氨酶（ADA）、γ干扰素（IFN-γ）、可溶性白介素2受体（sIL-2R）对结核性胸水和癌性胸水鉴别诊断的价值。方法采用酶法和ELISA方法检测47例结核性胸水患者和47例癌性胸水患者胸水中ADA活性和IFNγ-、sIL-2R水平。结果结核性胸水组的ADA（72.3±21.7 U/L）、IFN-γ（481.3±257.1 pg/m l）和sIL-2R（611.0±184.4 pmol/L）都显著高于癌性胸水组（P〈0.01）;当以ADA≥46.8 U/L、IFNγ-≥209.0 pg/m l和sIL-2R≥491.5 pmol/L为临界值,三项指标对结核性胸水的敏感度分别为93.6%,87.2%,70.2%;特异度分别为91.5%,91.5%,78.7%。结论胸水中ADA、IFN-γ和sIL-2R对结核性胸水和癌性胸水的鉴别诊断都有较高的临床价值。     

恒温扩增荧光检测法检测结核分枝杆菌复合群的应用价值

目的: 评价恒温扩增荧光检测法检测痰样本中结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)的临床应用价值。方法: 选择上海市6家结核病定点医院作为研究现场,收集2020年1月至2020年11月各家医院肺科门诊初诊的1848例疑似肺结核患者痰样本,分别进行恒温扩增荧光检测法与传统的痰涂片、BACTEC MGIT 960液体培养(液体培养)及GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测。以液体培养为参照标准,分析比较恒温扩增荧光检测法、痰涂片及GeneXpert的检测效能。结果: 在1848例患者痰样本中,恒温扩增荧光检测法、痰涂片、液体培养和GeneXpert检测MTBC的检出率分别为16.7%(309/1848)、14.4%(266/1848)、25.4%(470/1848)和28.7%(530/1848)。以液体培养为参照标准,恒温扩增荧光检测法、痰涂片和GeneXpert检测的敏感度分别为58.94%(277/470)、52.77%(248/470)、80.43%(378/470);特异度分别为97.68%(1346/1378)、98.69%(1360/1378)、88.97%(1226/1378);一致率分别为87.82%(1623/1848)、87.01%(1608/1848)、86.80%(1604/1848),Kappa值分别为0.638、0.600、0.666。4种不同性状痰样本(黏液样痰、唾液样痰、干酪样痰和血样痰)中,除在唾液样痰中液体培养检出率最高[38.8%(59/152)]外,其余3种性状痰样(黏液样痰、干酪样痰和血样痰)均为GeneXpert检出率最高,分别为51.5%(308/598)、66.7%(28/42)和64.0%(16/25)。结论: 恒温扩增荧光检测法检测痰样本中MTBC具有良好的检测特异度,该方法和痰涂片及GeneXpert与液体培养检测结果一致性均一般,临床可以根据实验室硬件条件及患者情况选择开展多种方法联合检测,以提高肺结核的病原学诊断率。     

结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物敏感性的实验研究

目的 获得四种氟喹诺酮（FQ）对结核分枝杆菌的最小抑菌浓度（MIC）,评价PCR探针熔解曲线法（PMAA）检测结核分枝杆菌对氟喹诺酮药物耐药性的临床价值.方法 124例对氧氟沙星敏感的菌株和78例对氧氟沙星耐药的菌株,在96孔细菌培养板中,用Middlebrook 7H9液体培养基将药物进行连续倍比稀释后,加入5×10^-2 mg/ml菌液100 μl,用刃天青显色法测定MIC;并用PCR探针熔解曲线法（PMAA）检测结核分枝杆菌对氟喹诺酮（FQ）药物的耐药突变.结果 氧氟沙星折点浓度为2 μg/ml,加替沙星和莫西沙星对结核分枝杆菌的MIC90比氧氟沙星和左氧氟沙星要低4-8倍,具有比氧氟沙星和左氧氟沙星更好的抗结核分枝杆菌的活性.以罗氏比例法为金标准,PCR-PMAA检测敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和符合率分别为96.2％,97.6％,96.2％,97.6％和97.0％.结论 利用微量MIC方法较常规药敏方法可以获得更多的耐药信息.用PCR-PMAA法能高效快速的检出耐药突变菌株.两种方法结合应用,对临床肺结核疾病早期用药具有更好的指导价值.