Hes1在烟草诱导人支气管上皮细胞恶性转化过程中的作用

目的:探讨转录因子发状分裂相关增强子1(hairy and enhancer of split,Hes1)在香烟烟气凝集物(cigarette smoke condensate,CSC)诱导永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化中的作用。方法:CSC(1L空气中点燃1支香烟)慢性染毒BEP2D细胞至第70代,软琼脂集落形成实验检测CSC诱导的细胞恶性转化表型;采用RT-PCR和Western blot法检测各代细胞的Hes1表达;MTT法、细胞集落形成实验和流式细胞术检测Notch通路阻断剂DAPT或脂质体转染Hes1-siRNA对CSC染毒BEP2D细胞增殖与凋亡的影响。检测吸烟大鼠外周小气道组织中Hes1的表达;采用免疫组化法和RT-PCR法检测非小细胞肺癌组织及正常气道组织中Hes1的表达。结果:第70代BEP2D细胞具备恶性转化表型;Hes1在CSC染毒BEP2D细胞中的表达总体呈逐渐增高的趋势;DAPT和Hes1-siRNA均能通过下调Hes1显著抑制第70代BEP2D细胞的增殖,诱导其凋亡;Hes1在卷烟烟气暴露大鼠气道黏膜1月和6月组的表达较同期对照组显著增高;吸烟显著诱导肺癌组织和正常气道表达Hes1。结论:Hes1可能通过促进凋亡与增殖失衡,参与吸烟诱导的肺癌发生。     

信号传导及转录激活子3通路参与卷烟烟气凝集物诱导永生化人支气管上皮细胞的恶性转化北大核心CSCD

目的检测肺鳞癌组织、鳞状细胞不典型增生组织和癌旁组织中磷酸化信号传导及转录激活子3(p STAT3)蛋白的表达,比较其表达与吸烟的关系;探讨STAT3通路在烟草诱导细胞恶性转化过程中的作用。方法免疫组化法检测288例肺鳞癌组织、108例鳞状细胞不典型增生组织、112例癌旁组织中p STAT3蛋白的表达,比较其表达与吸烟的相关性。构建卷烟烟气凝集物(CSC)诱导第10,20,30,40,50,60及70代细胞(P10,P20,P30,P40,P50,P60及P70)永生化人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化模型。从血清抗性及锚着独立性等方面对CSC诱导各代BEP2D细胞的恶性转化特征进行鉴定。Western蛋白印迹法检测CSC诱导各代BEP2D细胞中p STAT3的表达。MTT法和流式细胞术分别检测JSI-124 0.25~10μmol·L^(-1)对P70细胞存活及凋亡的影响。JSI-124处理CSC诱导P70 24 h后检测存活蛋白表达的变化。结果 p STAT3蛋白在肺鳞癌组织中表达高于鳞状细胞不典型增生和癌旁组织(P<0.05);p STAT3在目前吸烟者中的表达均高于曾经吸烟者和从不吸烟者(P<0.05),且随着吸烟指数增加两者表达水平逐渐升高(P<0.01)。随着转化代数的增高,细胞血清抗性增加,锚着独立性增强,P30细胞以后尤为明显。p STAT3在正常对照组和乙醇对照组中弱表达,且两者之间无显著性差异;CSC诱导的各组BEP2D细胞中,p STAT3的表达均显著高于正常对照组和乙醇对照组(P<0.05),并随细胞代数的增高而增高。JSI-124抑制P70细胞增殖、促进P70细胞凋亡呈浓度及时间依赖性。JSI-124 1μmol·L^(-1)作用P70细胞24 h后,存活蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 STAT3信号通过调控存活蛋白表达抑制细胞凋亡,参与烟草诱导永生化人支气管上皮细胞的恶性转化。     

贫铀对人支气管上皮细胞DNA损伤及DMSO的保护作用

目的观察贫铀（DU）引起的细胞DNA损伤及二甲基亚砜（DMSO）的保护作用。方法以人支气管上皮细胞（BEAS-2B）为靶细胞，贫铀设置0、1．5,2．0mg/mL3个剂量，以0．5％的DMSO为保护剂，过氧化氢为阳性对照，采用单细胞凝胶电泳研究细胞产生的DNA损伤作用。结果BEAS-2B细胞经贫铀染毒后，可引起DNA链断裂，彗星尾部面积、尾长、尾部DNA含量、尾距随贫铀浓度增加而增加；0．5％的DMSO对贫铀诱发BEAS-2B细胞产生的DNA链断裂有明显的抑制作用。结论贫铀染毒能造成细胞的DNA损伤．DMSO对贫铀所致细胞的DNA损伤具有保护作用。     

用于氯霉素、克伦特罗和雌二醇三种兽药残留检测的高通量悬浮芯片技术研究

目的 建立一种氯霉素、克伦特罗和雌二醇(17-beta-estradiol,E2)的3种兽药残留的新型高通量悬浮芯片检测技术.方法 合成3种兽药的牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)结合物,并进行紫外和质谱鉴定.将3种蛋白结合物偶联于聚苯乙烯荧光微球上,在液相反应体系中3种小分子兽药抗原和微球上的结合物共同竞争液相中各自特异性的生物素化单抗,优化和筛选出微球上偶联BSA结合物和反应抗体的最适加入量.绘制出3种兽药残留检测的标准曲线;对不同浓度的干扰物和待测物分组,以此进行特异性检测和盲样测定.并用扫描电子显微镜(简称电镜)进行微球表面微观结构观察.结果 3种小分子兽药可与BSA成功偶联;3种结合物的加入量和抗体的加入量分别做了优化;悬浮芯片检测的标准曲线方程和方程相应的决定系数(R2)表现良好,R2>0.99;3种兽药悬浮芯片的检测区间分别为(40.00～6.25)×105ns/L,(50.00～7.81)×105ng/L和1.00×103～7.29×105ng/L;最低检出限为:40 ng/L、50 ng/L和1 μg/L;同时,悬浮芯片的特异度测试良好,与其他药物无明显交叉反应;对盲样测定的检测浓度值与实际浓度偏差在8.09%～17.03%,可认为偏差较小.电镜对微球表面微观结构的观察也直观地确证了蛋白在微球上的成功偶联.结论 高通量悬浮芯片技术操作简单,灵敏快速,成本低廉,为多种兽药残留的快速检测提供了新方法,具有广阔的应用和发展前景.     

艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549活性及凋亡的影响

目的观察艾烟冷凝物(PM10采取人体可吸入的艾烟部分)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)活性及凋亡的影响。方法体外培养A549细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、荧光显微镜来观察其对A549的细胞活性以及细胞凋亡的影响。结果 MTT法结果显示:与对照组相比,A549的细胞存活率随浓度和时间发生改变,具有明显的时间浓度依赖性;0.12g/L浓度的艾烟冷凝物作用于细胞12 h后可显著提高细胞存活率(P=0.005<0.01);荧光显微镜下观察发现艾烟冷凝物可以引起细胞发生凋亡,且具有浓度依赖性。结论 A549细胞随着艾烟冷凝物浓度的增加、刺激时间的增加而引起细胞活力逐渐下降,表明一定浓度的艾烟冷凝物和一定的刺激时间对细胞具有毒性作用;一定浓度的艾烟冷凝物在较短刺激时间内具有细胞增殖作用,故认为艾烟对细胞的增殖作用可能是艾烟发挥有效作用的重要因素之一;能够引起细胞的凋亡可能是毒性作用的重要因素之一。     

镍作业工人细胞免疫功能、血清硒和过氧化脂质含量的变化

９６名镍作业工人测定结果：非特异酯酶阳性细胞百分率（ＡＮＡＥ＋％）为７６．８％±８．０％，Ｔ细胞亚群ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８阳性细胞百分率（ＣＤ＋２％、ＣＤ＋４％、ＣＤ＋８％）及ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比值分别为６５．６％±１０．５％、５６．３％±１２．１％、３４．３％±８．２％和１．７６±０．６；酵母多糖刺激的外周血多形核白细胞化学发光（ＰＭＮ－ＣＬ）本底和峰值分别为４８±２３和３０７３±６８４ＣＰＳ／１０６ＰＭＮ；血清硒和丙二醛含量分别为１．２２±０．２３和４．７６±０．８８μｍｏｌ／Ｌ。与非镍作业的地区对照组比较，Ｔ细胞ＣＤ＋８％增高，ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比值下降，化学发光的本底值降低，峰值增加，血清Ｓｅ含量下降，丙二醛含量升高。分析镍作业工人工龄与后三项指标变化的关系，工龄大于２０年与小于１０年有统计学上明显差别。这些观察指标为镍作业人员医学观察增加新的监护指标提供依据。     

生物样品铀的放射化学分析的预处理

准确测量铀含量 ,在军事和民用部门都应用较广。我国目前运用较多的有固体荧光分析法、激光荧光分析法、电感耦合等离子体质谱仪 (ICP MS)等[1- 3 ],这些方法在样品的预处理方面均有相似的地方[1],而实际操作中 ,有些细节还有待完善。我们曾进行千余例生物样品铀含量的分析测量 ,这些样品既包括液态生物样品 ,又包括固态生物样品 ,在实际操作中 ,提出一些样品预处理方面的改进措施。1　对液态样品的常规处理1 1　尿样　对尿样的预处理通常用常规湿灰化处理即可 ,即用浓HNO3+H2 O2 ,即可得很好的处理效果 ,1ml尿量即可 ,最好3ml以上。1 2…     

富硒制剂对放射性肺炎早期效果的初步研究

为给防治放射性肺炎的药物研究提供实验依据，作者观察了富硒制剂对大鼠早期放射性肺炎的效果。方法雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠４８只分为对照组，单纯照射组，补硒照射组。γ射线照射，吸收剂量１５Ｇｙ，于０．５，１，２，３个月活杀取肺组织做光镜观察和肺组织ＲＮＡ提取，应用斑点杂交和图像分析技术测Ⅰ和Ⅲ型肺胶原ｍＲＮＡ含量。结果照射组大鼠肺损伤明显，而富硒制剂使肺充血、出血、渗出性变化及肺泡壁增厚程度减轻，且对肺Ⅰ（Ⅲ）型胶原ｍＲＮＡ合成有一定程度的抑制作用。结论富硒制剂对大鼠早期放射性肺炎有防治效果。