尾加压素Ⅱ增加培养心肌细胞c-fos和内皮素-1 mRNA表达

尾加压素 (urotensin ,U )是迄今所知心脏作用最强的正性变力物质 ,但 U 促心肌细胞肥大作用目前尚有争议。本文作者采用 Bradford法、MTT法 ,观察了 U 对培养的新生大鼠心肌细胞总蛋白合成及细胞活力的影响 ;应用半定量 RT- PCR法观察 U 对新生大鼠心肌细胞 c- fos和内皮素 - 1(ET- 1) m RNA表达的影响 ,以探索 U 促心肌细胞肥大的作用。结果显示 :1给予 10 - 7mol/ L U 作用心肌细胞 5 d后 ,细胞总蛋白质含量由对照组的 13 0± 15 μg/ m l增加至161± 14μg/ m l(P<0 .0 5 ,n=5 ) ;2分别给予 10 - 1 0 ,10 - 9,10 - 8,10 - 7和…     

信号传导及转录激活子3通路参与卷烟烟气凝集物诱导永生化人支气管上皮细胞的恶性转化北大核心CSCD

目的检测肺鳞癌组织、鳞状细胞不典型增生组织和癌旁组织中磷酸化信号传导及转录激活子3(p STAT3)蛋白的表达,比较其表达与吸烟的关系;探讨STAT3通路在烟草诱导细胞恶性转化过程中的作用。方法免疫组化法检测288例肺鳞癌组织、108例鳞状细胞不典型增生组织、112例癌旁组织中p STAT3蛋白的表达,比较其表达与吸烟的相关性。构建卷烟烟气凝集物(CSC)诱导第10,20,30,40,50,60及70代细胞(P10,P20,P30,P40,P50,P60及P70)永生化人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化模型。从血清抗性及锚着独立性等方面对CSC诱导各代BEP2D细胞的恶性转化特征进行鉴定。Western蛋白印迹法检测CSC诱导各代BEP2D细胞中p STAT3的表达。MTT法和流式细胞术分别检测JSI-124 0.25~10μmol·L^(-1)对P70细胞存活及凋亡的影响。JSI-124处理CSC诱导P70 24 h后检测存活蛋白表达的变化。结果 p STAT3蛋白在肺鳞癌组织中表达高于鳞状细胞不典型增生和癌旁组织(P<0.05);p STAT3在目前吸烟者中的表达均高于曾经吸烟者和从不吸烟者(P<0.05),且随着吸烟指数增加两者表达水平逐渐升高(P<0.01)。随着转化代数的增高,细胞血清抗性增加,锚着独立性增强,P30细胞以后尤为明显。p STAT3在正常对照组和乙醇对照组中弱表达,且两者之间无显著性差异;CSC诱导的各组BEP2D细胞中,p STAT3的表达均显著高于正常对照组和乙醇对照组(P<0.05),并随细胞代数的增高而增高。JSI-124抑制P70细胞增殖、促进P70细胞凋亡呈浓度及时间依赖性。JSI-124 1μmol·L^(-1)作用P70细胞24 h后,存活蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 STAT3信号通过调控存活蛋白表达抑制细胞凋亡,参与烟草诱导永生化人支气管上皮细胞的恶性转化。     

基于最小二乘法对艾烟浓度的光学浓度和PM10质量浓度的数据拟合

目的:基于最小二乘法对艾烟浓度检测中的光学浓度和PM10质量浓度进行数据拟合,实现数据间的折算。方法:以CSED-A气体染毒仪和HOPE-MED 8050系动式染毒柜进行光学浓度检测,以遮光率(%)表示;以P5L2C便携式微电脑粉尘仪检测艾烟中可吸入颗粒物PM10浓度,以质量浓度(mg/m~3)表示。采用P5L2C光散射式数字微电脑粉尘测试仪分别监测不同染毒柜染毒腔内不同遮光率水平的艾烟的质量浓度,监测时采样口原则上与鼠的高度一致,进行多个遮光率的多次质量-体积浓度的监测,每个浓度重复3次。采用最小二乘法,运用MATLAB分别对CSED-A气体染毒仪和HOPEMED 8050系列动式染毒柜进行曲线拟合,以实现数据间的折算。结果:CSED-A气体染毒仪的拟合公式f(t)=414.4403*t^2+263.8095*t-3.0725 r~2=85.8315;HOPE-MED 8050系列动式染毒柜的拟合公式f(t)=182.3730*t^2+141.2080*t+4.4667 r2=3.7984。结论:实现通过拟合公式对艾烟光学浓度和PM10质量浓度进行折算,对今后艾烟实验的进行起到指导作用。     

用于氯霉素、克伦特罗和雌二醇三种兽药残留检测的高通量悬浮芯片技术研究

目的 建立一种氯霉素、克伦特罗和雌二醇(17-beta-estradiol,E2)的3种兽药残留的新型高通量悬浮芯片检测技术.方法 合成3种兽药的牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)结合物,并进行紫外和质谱鉴定.将3种蛋白结合物偶联于聚苯乙烯荧光微球上,在液相反应体系中3种小分子兽药抗原和微球上的结合物共同竞争液相中各自特异性的生物素化单抗,优化和筛选出微球上偶联BSA结合物和反应抗体的最适加入量.绘制出3种兽药残留检测的标准曲线;对不同浓度的干扰物和待测物分组,以此进行特异性检测和盲样测定.并用扫描电子显微镜(简称电镜)进行微球表面微观结构观察.结果 3种小分子兽药可与BSA成功偶联;3种结合物的加入量和抗体的加入量分别做了优化;悬浮芯片检测的标准曲线方程和方程相应的决定系数(R2)表现良好,R2>0.99;3种兽药悬浮芯片的检测区间分别为(40.00～6.25)×105ns/L,(50.00～7.81)×105ng/L和1.00×103～7.29×105ng/L;最低检出限为:40 ng/L、50 ng/L和1 μg/L;同时,悬浮芯片的特异度测试良好,与其他药物无明显交叉反应;对盲样测定的检测浓度值与实际浓度偏差在8.09%～17.03%,可认为偏差较小.电镜对微球表面微观结构的观察也直观地确证了蛋白在微球上的成功偶联.结论 高通量悬浮芯片技术操作简单,灵敏快速,成本低廉,为多种兽药残留的快速检测提供了新方法,具有广阔的应用和发展前景.     

10-23脱氧核酶对新生大鼠心肌细胞ET-1mRNA表达的影响

目的:将体外筛选具有切割内皮素-1(endothelin-1,ET-1)mRNA的10-23脱氧核酶转染原代培养新生大鼠心肌细胞,观察其对心肌细胞ET-1 mRNA的影响.方法:体外转录ET-1全长RNA底物,设计并合成5条ET-1 10-23脱氧核酶(DZ1～DZ5),其5‘及3‘端各有2个核苷酸硫代修饰,体外切割ET-1 RNA底物,筛选有效脱氧核酶;5‘标记荧光素FAM的10-23脱氧核酶瞬间转染新生大鼠心肌细胞以观察对10-23脱氧核酶的摄取;采用半定量RT-PCR检测ET-1基因的表达.结果:DZ2、DZ3、DZ4及DZ5在体外均可切割RNA底物,其中DZ4两侧结合区结合自由能之差最大,其切割效率最高,达83.5%,而DZ3两侧结合区结合自由能之差最小,其切割效率亦最低(47.3%);瞬间转染新生大鼠心肌细胞24h,心肌细胞内可见10-23脱氧核酶的分布,半定量RT-PCR结果显示转染24h后的DZ4(0.2μmol/L)可减少血清诱导肥大心肌细胞ET-1mRNA及细胞总蛋白,降低细胞活力与蛋白质合成速率(P＜0.05).结论:本研究设计的10-23脱氧核酶能切割体外转录的ET-1全长RNA底物,转染心肌细胞后,可抑制ET-1 mRNA的表达,减缓血清诱导心肌细胞肥大,10-23脱氧核酶两侧结合区自由能的差值与切割效率有关.     

卷烟烟气对细胞线粒体氧化损伤的研究

目的研究卷烟烟气凝集物（cigarette smoke condensate，CSC）对人乳头状病毒永生化的人支气管上皮细胞（human papillomavirus-immortalized human bronchial epithelial cell line，BEP2D）线粒体的氧化损伤。方法采用分子探针2＇，7＇-二氯荧光黄双乙酸盐（2＇，7＇-dichlorofluorescein diacetate，DCFH—DA）和氢化乙啶（hydroethidine，HE）检测细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平；用荧光标记物MCB（Monochlorobimane）、壬基吖啶橙（nonyl acridine orange，NAO）、四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物（5，5＇，6，6＇ -tetrachloro-1，1＇，3，3＇ -tetrethyl benzimidalyl carbocyanine iodide，JC-1）检测细胞内还原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）及线粒体内膜心磷脂（cardiolipin，CL）、膜电位（mitochondrial membrane potential，△ψm）。结果CSC作用BEP2D细胞后，细胞内ROS显著增加，GSH及线粒体CL、△ψm水平明显下降，并呈现较好的剂量效应关系。结论CSC可造成细胞线粒体氧化损伤。     

贫铀诱发细胞超微结构改变及DMSO的保护作用

目的观察贫铀(DU)对体外培养的人支气管上皮细胞超微结构的影响及二甲基亚砜(DMSO)的保护作用。方法DU作用人支气管上皮细胞(BEAS-2B)24 h后,用荧光染色法检测细胞存活率、坏死率和凋亡率,用透射电子显微镜(TEM)观察细胞超微结构改变。结果荧光显微分析表明,DU作用后,存活细胞数明显减少,凋亡和坏死细胞数显著增高,而DMSO对DU诱发的细胞凋亡和坏死有明显的保护作用。TEM显示,正常细胞和DMSO对照细胞整体形态、核质比例、各种细胞器及细胞骨架均结构清晰;DU处理的细胞,无论细胞内、外有无贫铀颗粒,均见细胞不同程度的凋亡或坏死,正常细胞结构改变或消失,特别是细胞内或外有DU颗粒的细胞,膜性细胞器改变明显,其他细胞器也观察到结构不清或空泡化;DMSO+DU组,即使细胞内外有贫铀分布,各种细胞器结构的改变也明显减轻,观察到有些线粒体、内质网等膜性结构发生膨胀,但细胞整体结构仍较清晰。结论DU可诱发细胞凋亡和坏死,并导致细胞超微结构改变,DMSO对DU所致细胞损伤有明显的保护效果。     

烟草悬凝物诱导永生化人支气管上皮细胞恶性转化过程中p16基因甲基化改变的研究

目的:探讨永生化人支气管上皮细胞(HPV-18 immortalized human bronchial epithelial cells,BEP-2D)恶性转化过程中p16基因甲基化改变.方法:选取正常BEP-2D细胞及经过烟草悬凝物处理后的15周(week-15,W-15)、25周(W-25)、38周(W-38)和43周(W-43)的BEP-2D细胞作为研究对象,采用巢式MSP(Nested-methylation-specific PCR,Nested-MSP)检测各细胞株中p16基因的甲基化改变情况.结果:正常BEP-2D细胞p16基因未发生甲基化,而烟草悬凝物处理后的15周、25周、38周和43周的BEP-2D细胞p16基因发生甲基化.结论:p16基因甲基化改变可能发生在肺癌形成的早期,检测p16基因甲基化可以作为肺癌早期辅助诊断的生物标记物之一.