大鼠血栓调节蛋白基因的克隆及在原核细胞中的表达

目的研究大鼠血栓调节蛋白基因的扩增、克隆及在原核细胞中的表达。方法以大鼠基因组DNA为模板,进行PCR扩增,用pMD18-Tsimple vector进行T克隆并测序。经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,将目的基因克隆到pET-28a(+)表达载体质粒中,转化E.coliBL21(DE3)表达重组蛋白,通过SDS-PAGE分析表达产物。结果含有大鼠血栓调节蛋白基因的PCR产物约为1850bp。重组pMD18-Tsimple vector质粒和重组pET-28a(+)质粒经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后,有相应大小的目的片段,测序结果正确。经IPTG诱导,重组pET-28a(+)质粒在E.coliBL21(DE3)中有相对分子质量约为72000的融合蛋白表达。结论成功克隆了大鼠血栓调节蛋白基因,并成功表达了该基因编码的蛋白。     

血栓调节蛋白基因结构及突变研究进展

血栓调节蛋白是体内抗凝血系统中重要的辅因子。血栓调节蛋白与凝血酶结合活化蛋白C,在凝血和纤溶之间起着重要的联系作用。血栓调节蛋白生物活性的核心位于表皮生长因子4-6区。血栓调节蛋白基因突变与许多疾病具有相关性。A la25Thr突变与50岁以下男性患心肌梗死有关。M et388位改变与静脉血栓相关。A la455Val突变可能促使静脉疾病和脑梗死发生。血栓调节蛋白基因启动子G-33A突变与动脉粥样硬化显著相关。基因突变会对血栓调节蛋白的表达和生物活性产生影响,导致凝血相关的疾病发生。     

脑苷肌肽注射液对PC-12及SH-SY5Y细胞的保护作用

目的 比较不同浓度脑苷肌肽注射液对体外培养的大鼠嗜铬细胞瘤PC-12细胞及人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用.方法 通过噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率;应用ELISA法检测细胞培养液中神经元特异性烯醇化酶(NSE)和脑源性神经营养因子(BDNF)水平.结果 脑苷肌肽注射液在0.1～300.0 μg.mL-1(以多肽计)浓度范围内对0.000 34%过氧化氢(H2O2)诱导PC-12损伤有保护作用,最大效应(43.0±9.2)%,在0.1～30.0 μg.mL-1(以多肽计)浓度范围内对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤有保护作用,最大效应为(50.5±11.9)%.ELISA法检测发现,脑苷肌肽注射液可使两损伤细胞株培养液中NSE水平显著减少,且以SH-SY5Y更为显著;BDNF水平在两细胞株中均显著增加.结论 脑苷肌肽注射液对H2O2诱导的P-12及SH-SY5Y细胞的损伤均有保护作用,且以人源性SH-SY5Y细胞更为敏感;该过程伴有NSE水平降低,脑苷肌肽细胞保护作用机制可能与增加BDNF表达有关     

高效液相色谱法测定一点红中槲皮素的含量

目的建立高效液相色谱法测定一点红中槲皮素含量的方法。方法用Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相为甲醇-水-磷酸(55∶45∶0.4),检测波长为370 nm。结果槲皮素在0.041 6~0.416μg的范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 8),平均加样回收率为102.3%,RSD为1.18%(n=6)。结论此法用于测定一点红中槲皮素的含量快速、简便、准确,为评价一点红的内在质量提供了科学依据。     

长期服用别嘌醇缓释胶囊对高尿酸血症大鼠肾脏的影响

目的考察长期服用别嘌醇缓释胶囊对高尿酸血症大鼠肾脏改变的影响和机制。方法 90只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(10只),模型组(16只),别嘌醇缓释胶囊低、高(27、54 mg·kg~(-1)·d~(-1))剂量组(各16只),别嘌醇片低、高(32、64 mg·kg~(-1)·d~(-1))剂量组(各16只),采用腺嘌呤和乙胺丁醇连续灌胃3wk,3 wk后改为隔日1次,共12 wk造成大鼠高尿酸血症。在造模的同时,药物治疗组分别给予低、高剂量的别嘌醇缓释胶囊或别嘌醇片;在wk 12末,处死大鼠,取血和肾脏组织,检测血尿酸、肾脏功能及肾组织的TNF-α表达情况和观察肾脏形态、病理学变化。结果与正常对照组比较,模型组大鼠血尿酸、尿素氮含量和肾脏组织内TNF-α表达增加,肾脏含水量显著增加(P<0.05)。与模型组比较,别嘌醇缓释胶囊高剂量组显著降低大鼠血尿酸、血尿素氮含量和肾脏组织内TNF-α表达(P<0.05);低剂量组能显著降低肾组织含水量(P<0.05);肌酐含量和肾脏指数无明显差异(P>0.05)。与别嘌醇片高剂量组比较,别嘌醇缓释胶囊组降低肾脏指数和肾组织含水量有显著差异(P<0.05,P<0.01)。结论长期应用别嘌醇缓释胶囊治疗高尿酸血症能减缓肾脏的病理改变,其机制可能与其降低血尿酸水平的同时抑制TNF-α介导的炎症反应有关。     

别嘌醇缓释微丸胶囊对高尿酸血症大鼠血液系统的影响

目的 研究长期(3个月)灌服用别嘌醇缓释微丸胶囊(ASRC)治疗大鼠高尿酸血症时对血液系统的影响.方法雄性Wistar大鼠90只,随机分为正常对照组,模型组,别嘌醇缓释微丸胶囊低、高剂量组(给予别嘌醇缓释微丸胶囊27,54 mg.kg^-1.d^-1),别嘌醇低、高剂量组(给予别嘌醇32,64 mg.kg^-1.d^-1).除正常对照组10只,其余各组增加6只,采用腺嘌呤和乙胺丁醇连续灌胃3周,3周后改为隔日一次,共12周建立大鼠高尿酸血症模型.定期检测大鼠体质量变化;12周末自动生化仪检测血尿酸(UA)水平、外周血常规;骨髓涂片检测骨髓象;ELISA方法测定大鼠血清细胞因子白细胞介素(IL)-1β水平.取肾脏组织经PAS染色,光镜观察肾脏病理结构改变.结果与正常对照组比较,高尿酸血症模型组大鼠体质量明显降低、血尿酸水平显著增高;外周血常规中白细胞(WBC)计数和血小板(PLT)计数显著增高、红细胞(RBC)计数明显降低;血清IL-1β 水平明显增高;肾脏组织内炎性细胞浸润.与模型组比较,ASRC低剂量时升高RBC计数、降低WBC、PLT计数作用显著( P<0.05),有效降低血清IL-1β水平(P<0.01);ASRC高剂量可有效抑制大鼠的体质量下降、降低血尿酸水平和血清IL-1β水平(P<0.01),肾间质仅见少量的炎性细胞浸润.结论长期应用低剂量ASRC可有效抑制高尿酸血症大鼠外周血常规的异常改变,可能与抑制炎症反应、肾脏改变轻微有关;高剂量ASRC则更好降低血尿酸水平.提示临床应用时注意药物剂量选择.     

双嘧达莫缓释片处方工艺及其对释放度影响的研究

目的研制双嘧达莫缓释片并考察处方工艺对释放度的影响。方法采用单因素方法考察不同辅料对双嘧达莫缓释片释放度的影响,并通过正交实验设计,优化处方工艺。结果优选工艺为：以羟丙基甲基纤维素（用量为15%）、聚乙烯吡咯烷酮（用量为10%）为缓释骨架材料,采用酒石酸（用量为25%）为酸化剂,乳糖为填充剂。释放度研究结果表明,双嘧达莫缓释片释放度指标符合规定。结论处方工艺简便可行,易于操作,适合于工业化生产。     

前列地尔对大鼠体内羟苯磺酸钙的药动学影响

目的 评价前列地尔对健康大鼠体内羟苯磺酸钙的药动学影响.方法 24只大鼠,按照体质量随机分为试验组和对照组,试验组按87.8 mg· kg-1剂量灌胃给予羟苯磺酸钙,并按11.7 μg·kg-1剂量腹腔注射前列地尔,对照组按87.8 mg· kg-1剂量灌胃给予羟苯磺酸钙;采用HPLC法测定血药质量浓度,并用DAS 2.0软件计算药动学参数.结果试验组和对照组的主要药动学参数如下:AUCo-t为(210.73±50.71)、(201.79 ±45.29)μg·h·mL-1,MRTo-x为(10.25 ±0.96)、(8.89±1.07)h,t1/2为(7.16±0.84)、(6.01 ±1.22) h,tmax为(1.58±0.29)、(2.67±0.49) h,CL为(0.40±0.10)、(0.42±0.09)L·h-1·kg-1,Cmax为(22.48 ±4.07)、(21.96±4.70) μg· mL-1.试验组的MRT0-∞、t1/2、tmax与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 前列地尔可影响大鼠体内羟苯磺酸钙的代谢.     

HPLC法测定双嘧达莫缓释片的含量

目的建立高效液相色谱法测定双嘧达莫缓释片的含量。方法采用EclipseXDBC18(Agi-lent,4.6mm×150mm,5μm)色谱柱。流动相为甲醇:水:磷酸:二乙胺(275:225:0.3:0.1);流量:1.0mL/min;检测波长:283nm;进样量:20μL。结果双嘧达莫在0.16～1.6μg范围内线性关系良好(r=0.9995),平均回收率为100.63%,RSD=0.35%(n=9)。结论本方法简便易行,结果准确可靠,专属性强,适用于双嘧达莫缓释片含量的测定。     

水合氯醛和苯巴比妥钠对大鼠体内氨茶碱药代动力学的影响

目的观察麻醉剂量的水合氯醛和苯巴比妥钠对大鼠体内氨茶碱药代动力学的影响。方法将36只大鼠分为水合氯醛组、苯巴比妥钠组和对照组,均进行单次给药试验,采用高效液相色谱(HPLC)法测定茶碱在大鼠体内的血药浓度,以DAS 2.0软件计算主要药代动力学参数。结果水合氯醛组、苯巴比妥钠组和对照组的药代动力学参数中曲线下面积(AUC0-∞)为(386.503±38.002)、(140.704±13.634)和(414.497±33.909)mg.h-1.L-1,消除半衰期(t1/2)为(3.442±0.616)、(4.824±1.333)和(3.214±0.425)h,清除率(CL)为(0.056±0.006)、(0.149±0.013)和(0.050±0.004)L.h-1.kg-1,达峰质量浓度(Cmax)为(77.457±7.780)、(47.403±6.644)和(77.637±9.486)mg.L-1,达峰时间(Tmax)为(1.083±0.289)、(1.042±0.144)和(1.250±0.261)h,苯巴比妥钠组与对照组、水合氯醛组的AUC0-∞、t1/2、CL、Cmax、Tmax比较差异均有统计学意义(P<0.05),而水合氯醛组与对照组各项之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论苯巴比妥钠可显著影响大鼠体内氨茶碱的代谢,而水合氯醛对大鼠体内氨茶碱的代谢影响并不明显。