RNA干扰技术阻断EJ细胞中survivin基因的表达

目的:用真核转录载体pSilencer2.0构建针对survivin基因的重组真核转录载体,并转染膀胱肿瘤细胞系EJ,通过RNA干扰(RNAi)阻断EJ细胞中survivin基因的表达.方法:将合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与psilencer2.0线性质粒以T4DNA连接酶连接,重组质粒经酶切、DNA测序鉴定后,用脂质体法转染EJ细胞,通过RT-PCR、免疫印迹检测干扰效果.结果:酶切及测序证实设计合成的DNA已正确插入载体.RT-PCR、免疫印迹检测实验表明:pSilencer2.0-SVV1、pSilencer2.0-SVV2重组载体有效地阻断了EJ细胞中survivin基因的表达,survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P<0.01),其中pSilencer2.0-SVV2重组载体干扰效果更佳.结论:成功构建了针对survivin基因的真核转录载体pSilencer2.0-SVV1、pSilencer2.0-SVV2,两者均可有效地阻断膀胱癌细胞系EJ细胞中survivin基因的表达,pSilencer2.0-SVV2重组载体效果更佳,这为后继实验研究打下基础.     

硫喷妥钠调控miR 664 1 5p对氯化钴诱导的心肌细胞缺氧损伤的保护作用

【摘要】目的 研究硫喷妥钠对氯化钴（CoCl2）诱导的大鼠心肌细胞H9c2缺氧损伤的保护作用及潜在机制。方法 对H9c2细胞进行CoCl2处理建立缺氧损伤模型（模型组）,分别采用125、250、500 nmol/L的硫喷妥钠处理600 μmol/L CoC2的DMEM培养液培养H9c2细胞,分别记为药物1、2、3组,对照组为不含CoCl2的DMEM培养液培养H9c2细胞。CCK8法和流式细胞术分别检测细胞存活率和凋亡率,Western blot测定P21和Caspase 3蛋白水平,分光光度法测定H9c2细胞中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性,qRT PCR检测CoCl2诱导后H9c2细胞miR 664 1 5p的表达水平。结果 与对照组相比,模型组心肌细胞H9c2中MDA、P21和Caspase 3含量升高,细胞存活率降低,凋亡率升高,miR 664 1 5p含量和SOD活性均降低,差异均具有统计学意义（均P＜005）;与模型组相比,药物2组和药物3组H9c2细胞中MDA、P21和Caspase 3含量降低,细胞存活率升高,凋亡率降低,miR 664 1 5p含量和SOD活性均上升,差异均具有统计学意义（均P＜005）;过表达miR 6641 5p可抑制CoCl2诱导的H9c2细胞凋亡,提高细胞存活率;抑制miR 664 1 5p能减弱硫喷妥钠对CoCl2诱导的心肌细胞缺氧损伤的保护作用。结论硫喷妥钠通过miR 664 1 5p提高CoCl2诱导的大鼠心肌细胞H9c2存活率,抑制细胞凋亡,减轻细胞损伤。     

急症体外循环复苏研究进展

心肺脑复苏 (ＣＰＣＲ)发展至今 ,其过程已经程序化、规范化和社会化—标准ＣＰＣＲ ,但复苏后的存活率很低 ,无神经后遗症的生存者更少。本文综述体外循环 (ＣＰＢ)在ＣＰＣＲ中的应用及其研究现状和进展。1　急症体外循环在ＣＰＣＲ中的作用现代ＣＰＣＲ不仅是心脏的复苏 ,更重要的脑复苏 ,恢复病人的神经学功能为ＣＰＣＲ的最终目的。标准ＣＰＣＲ的对象为心脏原无严重器质性心脏病的心跳骤停 ,分为ＢＬＳ、ＡＬＳ和ＰＬＳ 3个阶段 ,具有固定的程序和规范 ,新的概念强调 :①重视院前急救 ;②盲目除颤 ,尽早除颤 ,同步或非同步除颤 ;③早…     

雷帕霉素对肾缺血再灌注大鼠肝脏功能和超微结构的保护作用

目的 探讨雷帕霉素对肾缺血再灌注大鼠肝脏功能和细胞形态的保护作用。方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组、手术组、药物组。大鼠肾损伤模型为切除右肾,分离左肾动脉,阻断血流2h,再灌注4h,测定血清BUN、Scr含量、sALT、sAST活性,光镜下观察肝组织细胞形态学变化。结果 与假手术组比较,手术组血清BUN、Scr含量、sALT、sAST活性显著升高(P<0.05);与手术组比较,药物组血清BUN、Scr含量、sALT、sAST活性显著降低(P<0.05)。手术组:光镜下肝脏淤血,细胞脂肪变性及灶性坏死,炎症细胞侵润;药物组:病变较手术组明显减轻,仅肝中央静脉扩张、淤血。结论 雷帕霉素对肾缺血再灌注大鼠肝脏功能和超微结构均有明显的保护作用。     

睾丸扭转61 例诊断与治疗的临床研究

目的：正确掌握睾丸扭转的临床特点,降低误诊率。方法：回顾性分析我院2007年1月至2013年7月收治的61例睾丸扭转患者的临床资料。结果：61例患者中,扭转超过24h者39例睾丸坏死予以切除。结论：加强医疗常识宣教,正确认识睾丸扭转,发病时到正规医院的专科医生就诊可减少误诊。     

RNAi靶向抑制suvivinn基因对膀胱癌EJ细胞凋亡和细胞周期的影响

用真核转录载体pSilencer 2.0.U6在膀胱癌细胞系EJ细胞内表达针对Survivin基因的短发卡状RNA(shRNA),以阻断细胞中Survivin基因的表达,观察Survivin基因沉默后对EJ细胞凋亡、细胞周期产生的影响.     

参附注射液对全麻病人催醒作用的临床研究

参附注射液为人参、附子两味中药的提取物混合而成的中药注射剂,临床上主要用于各类休克、心力衰竭等气虚阳脱危症。根据其组成,参附注射液尚具有改善神经系统的兴奋过程,缓解支气管平滑肌痉挛,提高跨膈压,从而增强呼吸驱动和呼吸中枢的功能。因此,本研究将参附注射液用于全麻苏醒过程,观察其是否具有催醒作用及剂量效应关系如何以及对血液动力学的影响。 资料与方法 受试对象 选择术前血压、心、肺、肝、肾功能正常,无水、电解质、酸碱平衡失调,ASAⅠ～Ⅱ级,全麻时间 3～4 h的择期普外科手术病人,手术结束时无自主呼吸或自主呼吸     

RNAi沉默survivin基因表达对膀胱癌EJ细胞增殖的影响

目的 通过RNA干扰(RNAi)阻断EJ细胞中survivin基因的表达,研究survivin基因沉默后对细胞生长和细胞凋亡的影响.方法 将合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSilencer2.0线性质粒以T4 DNA连接酶连接,重组质粒经酶切、DNA测序鉴定后,用脂质体法转染EJ细胞,通过RT-PCR、免疫印迹检测干扰效果.MTT法检测细胞生长的影响,流式细胞仪检测转染后EJ细胞的凋亡变化.结果 酶切及测序证实设计合成的DNA片段已正确插入载体.RT-PCR、免疫印迹检测实验表明:pSilencer2.0-SVV1、pSilencer2.0-SVV2重组载体均能有效地阻断EJ细胞中survivin基因的表达,使survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P<0.01),后者抑制效果更佳.转染后的EJ细胞生长速度明显变慢.转染pSilencer2.0-SVV2实验组细胞的凋亡增加了17.0%.结论 重组真核载体能有效抑制EJ细胞的survivin表达,抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡.     

自制水囊扩张器后腹腔入路腹腔镜手术治疗肾囊肿103例效果观察

目的探讨后腹腔入路腹腔镜手术治疗肾囊肿的方法和疗效。方法 103例肾囊肿患者于全麻下行经后腹腔肾囊肿去顶术。结果 103例手术均成功。手术时间25～65 min;术中出血(15±1.5)ml;术后住院时间3～7天。103例随访3～24个月无复发。结论经后腹腔镜途径行腹腔镜肾囊肿去顶术有创伤小、出血少、术后恢复快、疗效确切等优点,是治疗肾囊肿的理想方法。