健脾消癌方对结肠癌外泌体诱导HFL1活化成CAFs的影响 |
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引用本文: | 刘佳琴,罗吉,李勇敏,杨晓,谭小宁,罗燕,吕元,蒋益兰.健脾消癌方对结肠癌外泌体诱导HFL1活化成CAFs的影响[J].中国实验方剂学杂志,2020,26(22):40-46. |
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作者姓名: | 刘佳琴 罗吉 李勇敏 杨晓 谭小宁 罗燕 吕元 蒋益兰 |
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作者单位: | 1.湖南中医药大学 研究生院,长沙 410208;2.湖南省中医药研究院 附属医院,中医肿瘤学湖南省 重点实验室,抗肿瘤中药创新平台,长沙 410006;3.湖南中医药大学 第一附属医院,长沙 410007 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(81774287);中央引导地方科技发展专项(2017CT5029);湖南省科技创新计划项目(2017SK50403);湖南中医药大学研究生培养质量工程项目(2019CX10) |
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摘 要: | 目的:探讨健脾消癌方对人结肠癌细胞(HCT116)来源外泌体诱导正常人胚肺成纤维细胞(HFL1)向肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)活化的影响。方法:以13.1 g·kg~(-1)的健脾消癌方灌胃SD大鼠以制备含药血清,采取超高速离心法分别提取含10%无外泌体血清培养的HCT116细胞外泌体及含20%健脾消癌方含药血清培养的HCT116细胞外泌体,纳米颗粒跟踪分析仪(Zetaview)检测外泌体的粒径分布,蛋白免疫印迹法(Western blot)鉴定外泌体的标志蛋白凋亡转接基因2互作蛋白X(Alix),热休克蛋白70(HSP70),肿瘤易感基因101蛋白(TSG101),荧光显微镜观察HFL1对细胞膜染色试剂盒(PKH67)标记的外泌体的摄取情况;将HFL1细胞分6组:空白组,转化生长因子-β1(TGF-β1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体2 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体4 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体2 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体4 mg·L~(-1)组,均干预48 h,Western blot和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白和mRNA的表达水平。结果:Zetaview检测粒径分布主要集中在50~100 nm,结合标志蛋白Alix,HSP70和TSG101的表达证实其为外泌体,HFL1细胞与外泌体共孵育后,荧光显微镜下可看到大量外泌体被HFL1细胞所摄取;与空白组比较,TGF-β1组和TGF-β1联合HCT116外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA表达水平升高(P0.05);与TGF-β1联合HCT116外泌体组比较,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA水平下降(P0.01)。结论:人结肠癌细胞外泌体联合TGF-β1可诱导HFL1活化成CAFs,健脾消癌方可通过影响α-SMA的表达水平而降低HFL1的活化能力从而达到拮抗结肠癌肺转移的作用。
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关 键 词: | 结肠癌 外泌体 正常人胚肺成纤维细胞 肿瘤相关成纤维细胞 α-平滑肌肌动蛋白 健脾消癌方 |
收稿时间: | 2020/4/8 0:00:00 |
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