3种检测方法在携带鼠疫噬菌体现场样本中的联合应用

2008年6月青海省地方病预防控制所鼠疫菌专业实验室收到青海省天峻县疾病预防控制中心送交的6份疑似鼠疫样本。为及时判定疫情,同时用胶体金免疫层析法（RGICA）、鼠疫反向间接血凝试验（RIHA）和细菌分离培养法平行检测6株疑似鼠疫样本,结果均为阳性。在细菌分离培养过程中发现4号和6号样本携带鼠疫噬菌体,出现此类情况,     

赫氏培养基不同氨基氮含量对鼠疫菌生长的影响

目的探讨不同氨基氮含量对鼠疫菌生长的影响观察。方法同批次消化液不同含量（120mg/L、150mg/L、170mg/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L）氨基氮作为基础消化液制备的赫氏琼脂培养基（指100mL培养基内所含的氨基氮）进行活菌数实验,寻找出适宜鼠疫菌生长的最佳氨基氮。结果通过反复实验发现6种不同氨基氮含量对鼠疫菌生长影响中170mg/L含量的赫氏培养基优于其它5种氨基氮含量培养基,经统计学分析有差异（P〈0.05）。结论鼠疫菌生长的最佳氨基氮含量为170mg/L。     

基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌

目的 实现荧光定量PCR技术在鼠疫现场和基层的应用。方法 本试验将已建立的基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR方法应用于我国各鼠疫疫源地野生菌株的检测,进行特异性评价。选取分布于我国境内不同鼠疫疫源地野生鼠疫耶尔森氏菌株、鼠疫减毒菌株、耶尔森菌属近缘菌株假结核菌及小肠结肠炎菌进行荧光定量PCR检测。结果 55株鼠疫耶尔森氏菌及鼠疫减毒菌株扩增阳性,假结核耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌无阳性扩增,冻干试剂在室温25 ℃和37 ℃条件下可保存6个月,敏感性与冷冻保存无差异,核酸扩增诊断可在1 h内完成。结论 应用基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR方法对我国各鼠疫疫源地55株鼠疫耶尔森氏菌检测呈现高度特异性,本试验冻干试剂具有可室温保存、便于运输、检测结果精准、快速等特点,具有较好的鼠疫现场应用前景。     

Balb/c小鼠对鼠疫菌敏感性测定

鼠疫是自然疫源性疾病,也是危害人类最严重的烈性传染病.在对鼠疫菌鉴定和科研工作中,观察鼠疫菌对敏感动物的致病性及病理变化是不可或缺的项目之一,Balb/c小鼠作为鼠疫实验动物的报道至今少见,因此,作者就Balb/c小鼠对鼠疫菌敏感性进行了测定,现将结果报道如下.     

实验环境中野生型鼠疫噬菌体的生长表型特征

目的 观察野生型鼠疫噬菌体在不同实验培养环境中的生长表型特征，为后续噬菌体的生物学特性鉴定及其与宿主菌相互作用研究提供科学依据。方法 利用液体培养法、固体培养法和基于OmniLogTM微生物鉴定系统的微量液体培养法检测3株野生型鼠疫噬菌体的生长情况。结果 基于LB液体培养基的生长结果显示，鼠疫噬菌体476号经28℃和37℃作用20～24 h后生长状况优于37℃培养的鼠疫噬菌体087号和072204号，37℃培养的鼠疫噬菌体087号优于072204号。以鼠疫疫苗株EV76为宿主菌，鼠疫噬菌体476号在双层琼脂培养基上经28℃和37℃培养20～24 h后产生较为清晰的噬菌斑；鼠疫噬菌体087号和072204号经37℃培养20～24 h后在双层琼脂培养基上产生不透明的噬菌斑。基于OmniLog TM系统微量液体培养法的生长结果显示，3株鼠疫噬菌体经33℃裂解鼠疫疫苗株EV76时，通过96孔微量板曲线图显示第1列出现横线，且峰值不超过100，随着噬菌体数量的降低，稀释试验孔依次均出现与鼠疫疫苗株EV76相似的生长曲线，实验孔中四唑类染料颜色随着噬菌体数量的减少和宿主菌数量的增多而逐渐加深。由此...     

我国鼠疫菌毒力因子的比较与分析

目的 研究自不同生态型和不同鼠疫自然疫源地分离的鼠疫菌4种毒力因子的性状特征。方法 常璺方法检查鼠疫菌毒力因子性状并比较在不同疫源地之间、不同生态型之间的差异。结果 1326株鼠疫菌中仅1株缺失FI、6株缺失PstI,Pgm和WW阳性分别为92.99%、76.47%。结论 自我国不同疫源地、平淡同生态型和不同年代分离的野生型鼠疫菌绝大多数能产生FI和PstI,且不同生态型和不同疫源地分离的菌株这两种毒力因子无明显差别,性状稳定,VW^-和Pgm^-菌株与生态型及疫源地有一定的关系。经长期人工培养传代后。4种毒力因子相比,VW因子较易丧失,该毒力因子具有更不稳定特点。     

青海省泽库县藏系绵羊鼠疫血清流行病学调查

目的对黄南州泽库县藏系绵羊鼠疫血清FI抗体进行检测,了解当地藏系绵羊鼠疫流行特征及流行病学意义。方法应用鼠疫间接血凝试验(indirect hemagglutination test,IHA)和鼠疫胶体金纸上色谱(gold immunochromatography assay,GICA)两种方法检测藏系绵羊血清和旱獭血清。结果应用IHA和GICA方法分别对所采集的305份藏系绵羊血清及200份旱獭血清进行检测,其中藏系绵羊血清检出鼠疫FI抗体阳性血清14份,旱獭血清检测结果均为阴性。结论泽库县存在藏系绵羊鼠疫的流行,应加强藏系绵羊鼠疫的监测,尤其旱獭鼠疫流行地区,更应该引起重视。     

从土壤样本中分离鼠疫噬菌体方法的建立

目的建立由土壤环境中分离鼠疫噬菌体的方法。方法采用点滴法和双层琼脂平皿法分离模拟土壤中的鼠疫噬菌体。结果分别加入5、50、500、1 000μl鼠疫噬菌体的模拟土壤样本,通过点滴法分离噬菌体结果显示,过滤液在稀释前均出现明显的噬菌斑,高压灭菌的模拟土壤样本中鼠疫噬菌体的最小检出量为30 PFU噬菌体颗粒;通过双层琼脂平皿法检测模拟土样中鼠疫噬菌体的结果显示,4个模拟土壤样本在双层琼脂平皿上均出现明显的噬菌斑,且不同浓度模拟土壤样本过滤前后鼠疫噬菌体的效价都会降低两个数量级以上。结论采集的环境样本中野生型鼠疫噬菌体含量很少时,可通过富集提高鼠疫噬菌体的分离率。双层琼脂平板法检测鼠疫噬菌体,既能检测出噬菌体,又能较准确地测定其效价。     

青海省近年来鼠疫防控形势分析

目的分析青海省近年来鼠疫监测结果,掌握现阶段青海省鼠疫流行态势,为今后鼠疫防控工作提供科学依据。方法收集青海省近年来的鼠疫监测、鼠疫疫源地调查及人间鼠疫病例数据,应用描述性流行病学方法进行分析。结果近年来,青海省共发生人间鼠疫一起,动物间鼠疫疫情时有发生,主要宿主(旱獭)分布密度明显升高,平均密度达0.09只/hm2;检出鼠疫FI阳性血清45份,鼠疫反向血凝实验阳性材料9份;分离鼠疫菌11株,主要分布在海西州和玉树州。结论近年来,青海省动物鼠疫每年均有发生,局部地区仍处于活跃状态,且部分区域有向人口密集区扩散的趋势,鼠疫防治总体形势较为严峻。     

青藏高原野生型鼠疫噬菌体对鼠疫诊断噬菌体耐受株的特异性裂解

目的研究青藏高原野生型鼠疫噬菌体对鼠疫诊断噬菌体耐受株的特异性。方法 18株野生型鼠疫噬菌体通过富集、分纯后,利用双层琼脂平板法检测其对实验室诱导的3株鼠疫诊断噬菌体耐受株的特异性裂解能力。结果分离自青藏高原鼠疫疫源地的18株野生型鼠疫噬菌体对典型鼠疫弱毒菌EV 76和0614F均能完全裂解,对R-0614F-10代菌株不完全裂解,对R-0614F-38代、R-0614F-43代不裂解,这与鼠疫诊断噬菌体Yep-phi对R-0614F-10代、R-0614F-38代、R-0614F-43代的裂解能力一致。选取3株野生型鼠疫噬菌体作用于鼠疫诊断噬菌体耐受株R-0614F-12代,形成的噬菌斑大小不一致,直径为2~10 mm,边缘不整齐,中心有再生菌生长。结论 18株野生型鼠疫噬菌体对3株鼠疫诊断噬菌体耐受株裂解作用的特异性可能与鼠疫菌细胞壁受体结构和菌株基因组序列发生改变有关。