大鼠神经干细胞与“癫痫样细胞”体外共培养后的分化发育

背景：在癫痫微环境神经干细胞能否被诱导分化为异常放电的“癫痫神经元”？癫痫微环境包括两种情况：一是“无镁”细胞外液，二是与癫痫细胞共培养。其中前者比后者的致癫痫作用强。 目的：模型模拟体内癫痫微环境，将大鼠海马神经干细胞和正常海马神经元以及“癫痫神经元”体外共培养，观察干细胞的分化发育情况。 设计：重复测量观察。 单位：哈尔滨医科大学附属第一医院。 材料：实验于2005—08／2007—04在哈尔滨医科大学病原学教研室及药理学教研室完成，选用150只新生Wistar大鼠，雌雄不拘，由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心提供，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。兔抗鼠突触素抗体购自美国LabVision公司。携带增强型绿色荧光蛋白标记基因的血清型2型腺相关病毒购自北京本元正阳公司。Axopatch 200B放大器为美国Axon公司产品。5111A示波器为美国Tektronix公司产品。 方法：①分离大鼠海马神经元，采用“无镁”外液处理神经元建立“癫痫神经元”模型。常规方法培养大鼠海马神经干细胞，将绿色荧光蛋白标记的神经干细胞分别与正常海马神经元、“癫痫神经元”共培养14d。②应用膜片钳记录与两种神经元共培养后细胞突触后电位；利用免疫荧光检测神经千细胞突触素抗体染色情况；将神经干细胞分化的神经元放入“无镁”外液，应用膜片钳记录其突触后电位。 主要观察指标：①海马神经干细胞与两种神经元共培养14d后突触后电位、突触素抗体染色结果。②分化后神经元在“无镁”外液中突触后电位及“癫痫样放电”情况。 结果：①神经干细胞与正常海马神经元共培养后，膜片钳记录到60％（6／10）神经干细胞14次，5min兴奋性突触后电位；与“癫痫神经元”共培养后记录到12次，5min兴奋性突触后电位。②神经干细胞分别与正常海马神经元及“癫痫神经元”共培养后，免疫荧光检测均显示80％（12／15）表达绿色荧光蛋白的干细胞突触素抗体染色阳性。③60％（9／15）干细胞分化的神经元在“无镁”外液中出现14次，5min时程约10s的兴奋性突触后电位，未记录到“癫痫样放电”。 结论大鼠海马神经干细胞与“癫痫神经元”体外共培养后可形成功能性突触，未转变成“癫痫神经元”。     

累及眼部的晚期鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤恶变患者诱导化疗疗效观察

目的　探讨诱导化疗对累及眼部的晚期鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤恶变的疗效。方法　回顾性分析北京同仁医院2012年10月~2017年1月共11例诱导化疗治疗累及眼部的晚期鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤恶变临床资料和随访结果。11例患者中，男9例，女2例，年龄42~62岁，平均年龄50岁。其中9例原发，2例复发；中晚期局部肿瘤患者5例（T3-4aN0M0），非常晚期局部肿瘤（T4bN0M0）患者6例。肿瘤均侵及眶壁或眶内，6例患者出现眼眶部肿胀、溢泪、突眼、复视等眼部症状。Kaplan-Meier法进行生存分析。结果  自入院随访至2018年3月，全部患者随访9~54个月，4例患者生存，7例患者死于肿瘤局部扩大或转移。诱导化疗对3例患者有效，眼部症状有明显改善，2例部分缓解，1例为完全缓解；8例患者疾病稳定。11例患者中位生存时间为22个月，局部中晚期肿瘤患者中位生存时间为23个月，局部非常晚期肿瘤患者中位生存时间为16个月。所有患者1、2年生存率分别为90%和14.1%，诱导化疗有效患者的1、2年生存率为100%和50%。结论　晚期鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤恶变患者的预后较差，局部中晚期患者的预后稍好于局部非常晚期患者。诱导化疗对部分晚期鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤恶变患者有效，对诱导化疗敏感的患者生存预后更好且眼部功能得到保护。     

抗心律失常药物靶点——IKr/HERG通道的调控机制研究

目的探讨快速延迟整流钾电流（IKr／HERG）在缺血性心律失常发生过程中的调控作用及机制。方法新西兰兔12只，随机分为对照组和缺血组，采用酶解法分离单个心室肌细胞，应用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞IKr／HERG变化趋势；应用Western blot技术，检测转染小RNA（miRNA）后人乳腺癌（SKBr3）细胞IKr／HERG通道蛋白表达量的改变。结果IKr／HERG在实验电压＋60mV下，缺血组（2．25±0．31）pA／pF明显低于对照组（3．81±0．64）pA／pF；miRNA转染进入SKBr3细胞后，细胞膜IKr／HERG通道蛋白表达量降低，仅是对照组的10％。结论miRNA调控IKr／HERG通道蛋白的表达，进而抑制IKr／HERG，参与缺血性心律失常的发生与发展。     

颈动脉体瘤家系琥珀酸脱氢酶D亚单位基因截短体R38X质粒构建和体外功能验证

目的　构建并验证琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase,SDH）亚单位SDHD基因截短体R38X的质粒。方法　分析家族型颈动脉体瘤家系基因,进行SDHD 基因外显子俘获“二代”测序分析。体外构建SDHD基因截短体并研究在293T细胞中的表达水平。结果　SDHD基因在家族性颈动脉体瘤中存在R38X突变,截短体在293T细胞中能良好表达,可抑制全长SDHD的转录。结论　SDHD基因突变截短体R38X能抑制表达,具体机制还需深入研究。     

三氧化二砷联合用药治疗乳腺癌的研究进展

乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤之一。药物治疗和放射疗法是乳腺癌临床治疗的主要手段,但仍存在副作用大,肿瘤易耐药等问题。三氧化二砷是治疗急性早幼粒细胞白血病的一线用药,其也可联合多种药物对乳腺癌等实体瘤产生良好疗效,并在一定程度上缓解临床治疗弊端。本文综述三氧化二砷联合化疗药、激素类药、营养补充剂类药、中药等多种药物或放射疗法对乳腺癌的研究进展,为乳腺癌联合用药研究提供新思路。     

肩难产2例

目的为避免肩难产的发生提供科学依据。方法报道2例肩难产发生的过程,与正常产相比。结果脐带过短,影响胎头旋转,导致肩难产。结论广大临产医师应提高对此病的认识,提高治愈率。     

血管化肋软骨结合纤毛化内皮内壁的人工气管重建

目的：探讨血管化肋软骨结合纤毛化内皮内壁合成人工气管重建气管长段及特殊缺损的可行性,建立与天然气管的生理结构、功能更接近的人工气管模型。方法以8例新西兰白兔为动物实验模型,I期颈部双层带血供筋膜包埋培养自体肋软骨和鼻中隔黏膜,II期人工气管原位移植,术后定期评估生理、呼吸及病理学等指标。结果8例实验兔II期术后平均存活时间21.9 d,死亡原因为呼吸困难。人工气管组织解剖可见瘢痕增生,无塌陷,有弹性和硬度。组织病理可见肋软骨和气管环软骨在组织学上有较高相似度;肋软骨在带血供筋膜包裹培养下均未被吸收,仍可见肋软骨组织;鼻中隔黏膜在体内加压及带血供筋膜营养下继续分化,HE染色切片下可见人工气管内壁覆有上皮样组织。结论肋软骨可作为制备人工气管塑形材料;包裹肋软骨的带血供筋膜可提供充足的血供,弥补了游离培养肋软骨致其吸收的缺陷;鼻中隔黏膜在体内加压及带血供筋膜的营养下,有望模拟气管纤毛上皮,从而发挥其与气管内壁相似的生物学特性。     

缺血性心律失常相关微小RNA在大鼠心脏的表达变化

目的 筛查缺血预适应大鼠心脏微小RNA(microRNA,或miRNA)的表达变化,寻找与缺血性心律失常相关的微小RNA.方法 SD大鼠随即分为假手术组和缺血预适应组(IP),每组3只.应用手术套管法建立在体大鼠心肌缺血预适应模型(5min缺血、5min再灌,三个循环).建模4h后取材提取RNA,应用微小RNA芯片技术检测IP组非缺血再灌注区(a)、IP组缺血再灌注区(b)和假手术组(c)心肌组织小RNA的表达情况.结果 同假手术组相比,缺血再灌区心肌有4个miRNA上调,5个miRNA下调;缺血预适应组非缺血再灌区有23个miRNA上调,包括三个肌肉特异表达的miRNA(mir-1、mir-133和mir-206),另有9个miRNA表达下调.结论 在心肌缺血预适应过程中,心肌微小RNA的表达发生明显变化,这些微小RNA可能对缺血预适应介导的抗心律失常起重要调节作用,为缺血性心律失常机制研究提供了新思路.     

甲醇对豚鼠单个心室肌细胞动作电位的影响

目的　研究甲醇对正常豚鼠心室肌细胞跨膜动作电位影响 ,旨在探讨甲醇对心肌细胞的电生理作用。方法　酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞 ,应用全细胞膜片钳技术记录甲醇对豚鼠单个心室肌细胞动作电位的影响。结果　应用 0 .2 %甲醇使豚鼠单个心室肌细胞动作电位复极 5 0 %时程 (APD50 )从给药前 (12 92 .6 8± 2 98.0 3)ms缩短到 (75 0 .2 5± 6 8.0 5 )ms (n =6 ,P <0 .0 5 ) ;动作电位复极 90 %时程 (APD90 )从给药前 (132 8.13± 2 89.91)ms缩短到(783.2 5± 6 3.4 4 )ms (n =6 ,P <0 .0 5 ) ;动作电位幅度 (APA)从给药前 (12 6 .35± 3.2 0 )mV减少到 (113.2 0± 6 .0 8)mV(n =6 ,P <0 .0 5 )。结论　甲醇降低动作电位幅度 ,缩短动作电位时程 ,影响心肌正常工作 ,可能与它对心肌细胞钾通道的作用有关。     

即刻种植与延期种植修复单颗前牙缺失的效果分析

目的对比分析即刻种植与延期种植修复单颗前牙缺失的效果。方法选取2018年5月-2019年5月在沈阳市口腔医院进行单颗前牙缺失种植修复治疗的患者200例,依据种植修复时间的不同分为对照组和观察组各100例。对照组采用延期种植修复,观察组采取即刻种植修复。比较两组的整体修复效果。结果观察组种植成功率为98%,高于对照组的93%,但差异无统计学意义(P>0.05)。观察组修复后不同时间点种植义齿修复美学效果评分和牙周袋深度,以及术后总并发症发生率、1年后主观满意度各项评分均优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论即刻种植与延期种植修复单颗前牙缺失的效果接近,并且即刻种植修复的义齿美观效果更好,患者满意度较高。