抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）的单克隆抗体，并对其特性进行系统地鉴定。方法以活的ＲＳＶＬｏｎｇ株滴鼻（ＴＣＩＤ５０为１×１０－６，取１００ＴＣＩＤ５００１２５ｍｌ进行）加ＲＳＶ感染Ｈｅｐ２细胞（ＣＰＥ达～）腹腔注射免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠，用细胞融合技术制备能稳定分泌抗ＲＳＶ的单克隆抗体细胞株。结果细胞融合一次成功，融合率为９６％，抗ＲＳＶ抗体阳性孔率为６５％。鉴定１株杂交瘤细胞Ｆ３株，染色体数为９８条，抗体亚类属ＩｇＧ１，对ＲＳＶ抗原特异；在无补体存在的情况下其腹水抗体中和效价为１∶１２８，且具融合抑制活性，腹水融合抑制效价为１∶６４。结论Ｆ３株单克隆抗体为抗ＲＳＶＦ蛋白的ＭｃＡｂ。     

86例鼻咽癌放疗前后EB病毒VCA－IgA抗体检测报道

８６例鼻咽癌放疗前后ＥＢ病毒ＶＣＡ－ＩｇＡ抗体检测报道李瑞珠，毕克菊，汪红俊，周爱华，李群Ｅ８病毒与鼻咽癌之间的免疫血清学关系以及ＥＢ病毒核壳抗原特异性免疫球蛋白Ａ（ＶＣＡ－ＩｇＡ）在鼻咽癌早期诊断的价值已被肯定［１，２，４，６，７］。本文对８６例鼻...     

从Hep-2细胞克隆hVEGF165/VEGF121基因及序列分析

目的 从Hep-2(喉鳞癌细胞)克隆hVEGF165、hVEGF121cDNA并重组到克隆载体中，用于下一步构建表达VEGF165、VEGF121的腺病毒载体。方法 设计和合成引物，提取Hep-2细胞的总mRNA，进行逆转录～聚合酶链反应(RT-PCR)，扩增出两个目的cDNA，并将其重组到pGEM-T Easy载体中送测序。结果 从Hep-2细胞的总mRNA中反转录扩增得到588bp和456bp的片段，经重组送测序证实两基因分别与GenBank中的［GI：19909064]及[GI：6631028]提供序列完全一致。结论 从Hep-2细胞我们成功获得VEGF165、VEGF121的cDNA并构建其克隆载体可供进一步研究。     

重组腺病毒方法的改建

目的对构建重组腺病毒的AdEasy载体系统的操作过程予以改进，使其更加简便、高效。方法将腺病毒骨架载体pAdEasy-1用电穿孔法转化大肠埃希菌BJ5183，获得含pAdEasy-1的大肠埃希菌BJ5183／p菌株。氯化钙法制备大肠埃希菌BJ5183／p感受态细胞，并转化含绿色荧光蛋白的穿梭载体，通过同源重组获得重组腺病毒质粒。以限制性内切酶PacⅠ酶切，得到重组腺病毒DNA分子，转染293细胞。结果293细胞出现细胞病变，荧光显微镜观察有绿色荧光。结论成功获得一种以AdEasy系统为基础的简便、高效构建重组腺病毒的新方法。     

A亚型人呼吸道合胞病毒G基因的克隆、真核表达

目的克隆A亚型人呼吸道合胞病毒（HRSV）G基因,构建G基因的真核表达载体,并进行表达和鉴定。方法自行设计引物,利用RT-PCR技术,从感染HRSV的HEp-2细胞中获得G基因片段,克隆到pGEM-Teasy载体,经核酸序列分析,进一步亚克隆到真核表达载体pcDNA3．1（＋）,酶切鉴定后,脂质体法转染COS-7细胞,RT-PCR和Western blotting鉴定基因转录和蛋白表达。结果真核表达载体pcDNA3．1（＋）G的限制性内切酶分析结果与预期一致,基因序列分析显示没有发生无义突变。转染COS-7细胞后,RT-PCR检测到G基因有转录,Western blotting分析观察到G蛋白特异性的表达条带。结论成功克隆A亚型HRSVG基因,并在真核细胞中获得表达。     

从Hep-2细胞克隆hFGF-2 cDNA及序列分析

目的 从Hep-2细胞(人喉鳞癌细胞)克隆人的FGF-2cDNA,用于下一步构建携带hFGF-2cDNA的非复制型腺病毒载体。方法 设计和合成引物,提取Hep-2细胞的总mRNA,通过RT-PCR扩增出目的cDNA,然后将其重组到pGEM-T Easy载体中送测序分析。结果 经基因测序分析表明,从Hep-2细胞克隆的hFGF-2基因序列与已报告的序列,除在ATG后的第24位碱基发生无意突变外(由G-A),其他序列则完全一致。结论 从Hep-2细胞的总mRNA中成功克隆出hFGF-2的基因片段。     

斑点-ELISA检测AFP

目的 探讨硝酸纤维素膜为固相载体的酶免疫测定法检测甲胎蛋白(AFP).方法 以硝酸纤维素膜代替常规ELISA中的固相载体聚苯乙烯板,其余步骤按ELISA方法操作.结果 以AFP标准品作试验,进行方法学探索,测出最佳包被抗体浓度为100 mg.L-1,酶标抗体稀释度为1∶4 000.不同来源不同孔径的硝酸纤维素膜无差异;同时发现包被过程中的封闭处理能减少非特异性反应;保存试验证明包被抗体的硝酸纤维素膜至少可保存2周.结论 该法具有特异性强、重复性好、灵敏度高的特点,通过与常规ELISA检测血清标本AFP含量值的比较,表明该法可半定量测定AFP的含量,尤其适用于标本的初步筛选.