人源抗VEGFR-2／As2O3-PEG-PLA隐形纳米粒的构建及质量控制研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）纳米新剂型的制备和质量控制。方法以聚乙醇化聚乳酸（PEG‐PLA）为载体材料,W／O／W型超声乳化制备As2O3纳米粒,同时偶联具有肝癌靶向作用的VEGFR‐2,最终得到人源抗VEGFR‐2／As2O3‐PEG‐PLA纳米粒。对其粒径分布、Zata电位、载药量和包封率进行测定,通过透射电镜（TEM）观察其表观形态,同时考察其体外释药和稳定性。选择24只肝癌裸鼠,随机分为VEGFR‐2／As2O3‐PEG‐PLA组及As2O3‐PEG‐PLA组,通过尾静脉注射纳米粒,高效液相色谱法测定As2O3在两组裸鼠体内的分布;免疫组化及蛋白质印迹法（Westernblot）检测血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达量。结果本实验制得的As2O3纳米制剂VEGFR‐2／As2O3‐PEG‐PLA粒径为（141．9±13．2）nm,Zata电位为（10．2±1．1）mV;经TEM观察呈圆形或椭圆形颗,粒状、大小较一致,分散性较好;载药量为（5．51±1．83）％,包封率为（62．12±5．98）％。体外释放发现其具有缓释效果,半数释放时间t1／2分别为10h;初步稳定性考察结果发现该制剂稳定性良好。与As2O3‐PEG‐PLA组比较,VEGFR‐2／As2O3‐PEG‐PLA组中肿瘤、肝组织的As2O3浓度较高,心、血液、肾组织的As2O3浓度较低（P＜0．05）,且肿瘤组织中VEGFR‐2阳性率及蛋白表达较低。结论以PEG‐PLA为载体材料制备得到As2O3纳米制剂,且偶联具有肝癌靶向作用的VEGFR‐2,最终得到粒径分布均匀,包封率和载药量高,稳定性良好的纳米制剂,且初步证实在肝癌裸鼠体内具有良好的靶向作用。     

肝癌术中丝裂霉素纤维蛋白胶局部缓释化疗的应用效果研究

目的探讨肝癌术中丝裂霉素纤维蛋白胶局部缓释化疗的应用效果。方法选取2007年7月—2009年6月我院收治的具有手术指征的肝癌患者30例,随机分为观察组和对照组,每组15例。对照组患者行单纯手术治疗,观察组患者在瘤体切除后的手术创面喷涂丝裂霉素纤维蛋白胶2.5 ml进行局部缓释化疗。观察两组患者术前及术后1个月、3个月、6个月、1年肝功能指标,血清甲胎蛋白(AFP)水平及凝血酶原时间(PT);记录两组患者中位无瘤生存期,计算1、2、3年无瘤生存率;建立Cox风险回归模型分析肝癌术后复发的影响因素。结果两组患者术前肝功能指标、血清AFP水平及PT比较,差异均无统计学意义(P>0.05);两组术后1个月、3个月、6个月、1年血清AFP水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05),两组肝功能指标、PT比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。对照组中位无瘤生存期为15.5个月〔95%CI(13.9,17.6)〕,观察组为21.3个月〔95%CI(2.4,28.2)〕,两组比较差异有统计学意义(χ2=6.190,P<0.05);对照组1、2、3年无瘤生存率分别为62.2%、40.4%及12.7%,观察组分别为81.3%、54.6%及30.7%,两组比较差异均有统计学意义(χ2值分别为4.013、4.267、4.826,P<0.05)。Cox风险回归模型显示,术中缓释化疗、肿瘤结节数目对Cox风险回归模型的影响有统计学意义(P<0.05)。结论肝癌术中应用丝裂霉素纤维蛋白胶局部缓释化疗可明显延长患者无瘤生存期,降低术后血清AFP水平,对肝功能无明显影响。     

纳米血管生成素-2小干扰RNA质粒制备及功能研究

[目的]制备血管生成素-2小干扰RNA(Ang-2siRNA)质粒纳米微粒,并观察其基因转染能力和基因沉默效果.[方法]应用分子克隆的方法构建Ang-2siRNA质粒,将其与聚乳酸、O羧甲基壳聚糖用水/油/水(W/O/W)双乳化溶剂蒸发法制备纳米微球,扫描电镜观察其形态和粒径.然后转染原代人脐带静脉内皮细胞,观察纳米Ang-2siRNA微粒干扰Ang-2基因表达的效果及其细胞保护功能.[结果]扫描电镜观察到Ang2siRNA纳米微球呈球形和椭球形,粒径150～200 nm,大小分布均匀,包封完整,分散性良好.有较强转基因能力,良好的RNA干扰效果和血管内皮细胞保护功能.[结论]成功制备纳米Ang-2siRNA微粒,并证实其载基因能力和RNA干扰效果,对血管内皮细胞损伤因素有良好保护作用,为进一步研究心肌梗死的血管修复机制奠定了坚实的基础.     

bcl-xL纳米微粒的制备及其对大鼠心肌细胞的高效转染

目的:制备包载含人类抗凋亡基因bcl-xL的纳米微粒,评价其转染大鼠心肌细胞的能力. 方法:用超声双乳化蒸发法制备包载bcl-xL的纳米微粒,扫描电镜观察纳米的形态和大小,DNase I消化酶试验检测其抗核酸酶能力;转染体外培养的大鼠心肌细胞后RT-PCR和Western-blot法检测基因表达. 结果:制备的纳米微粒直径约200～260 nm,包封完好,性能稳定并对基因有缓释作用;转染1 wk后bcl-xL表达高于对照组(P<0.05). 结论:成功制备包载真核表达质粒的纳米微粒,并能够高效转染大鼠心肌细胞. 纳米微粒是心肌细胞转染较理想的基因载体之一.     

腹腔镜下肝部分切除术10例报告

目的探讨腹腔镜下肝部分切除的方法和临床应用。方法经临床筛选的Ⅱ～Ⅵ肝段病灶需行切除的患者10例，其中3例边缘型小肝癌行完全腹腔镜下病灶切除；2例血管瘤、5例左肝内胆管结石患者在腹腔镜辅助下，结合腹壁小切口，应用常规切肝器械行左半肝切除1例，Ⅵ肝段切除1例，左肝外侧叶切除5例，同时行胆囊切除及胆道探查5例。结果10例患者均成功地在腹腔镜下施行了肝部分切除术，无中转开腹及延长腹壁小切口，手术时间30～180min，术中出血世20～300mL，术后住院4～9d，未发现并发症。结论经过临床选择的病例，腹腔镜辅助肝部分切除是安全可靠的微创方法，对肝脏边缘型小病灶行完全腹腔镜下病灶切除更具微创意义。     

FTC-CD133纳米微粒抑制肝癌干细胞耐药性的研究

目的 制备包裹乳腺癌耐药蛋白（BCRP/ABCG2）多药转运体的特异抑制剂FTC且连接CD133抗体的纳米微粒,并评价其特性和治疗作用。方法 运用复乳蒸发法制备以聚乳酸-聚乙醇酸（PLGA）为载体的包封FTC的载药纳米微粒,通过碳化二亚胺法在其表面连接CD133抗体,得到纳米微粒FTC-PLGA-NP-C;分析制备得到的纳米微粒的粒径分布、FTC包封率、载药量和纳米微粒的抗体连接效率;CD+133免疫磁珠法分选出CD+133 SP细胞,MTT法检测CD+133 SP细胞的增殖能力,Western blotting检测SP细胞中ABCG2的表达;荧光显微镜下观察FTC-PLGA-NP-C与CD+133 SP细胞的结合效率;将CD+133 SP细胞加入不同浓度的FTC-PLGA-NP-C纳米微粒,Western blotting检测其ABCG2的表达;以同体积PBS为对照,在CD+133 SP细胞中加入FTC-PLGA-NP-C纳米微粒,同时加入阿霉素,HPLC检测孵育不同时间后细胞内阿霉素的浓度。裸鼠腋下荷瘤,成瘤后尾静脉注射FTC-PLGA-NP-C或者0.9%氯化钠溶液,48 h后再由尾静脉注射阿霉素,测量瘤体直径,并采用高效液相色谱法检测裸鼠肿瘤组织中阿霉素的浓度。结果 FTC-PLGA-NP-C呈规则球形,粒径分布为60～120 nm,载药量为11.27%,包封率为37.18%,与CD+133 SP细胞有较好的结合能力;Western blotting检测显示ABCG2在CD+133 SP细胞中表达,且随着FTC-PLGA-NP-C纳米微粒剂量的增加,ABCG2的表达量逐渐降低,到4 mg/ml FTC-PLGA-NP-C时已几乎检测不到ABCG2的表达。从24 h开始,PBS中CD+133 SP细胞内阿霉素浓度很快下降至1 μg/ml及以下;而FTC-PLGA-NP-C中CD+133 SP细胞内阿霉素浓度一直维持在2～3 μg/ml。生理盐水组小鼠瘤体直径为（1.845±0.076）cm,高于FTC-PLGA-NP-C组的（1.238±0.072）cm（t=5.802,P＜0.001）;生理盐水组瘤内阿霉素浓度为（2.005±0.154）μg/ml,低于FTC-PLGA-NP-C组的（3.853±0.261）μg/ml（t=6.088,P＜0.001）。结论 制备的载药纳米微粒FTC-PLGA-NP-C可较好地靶向肝癌干细胞,并抑制其耐药蛋白ABCG2的表达,降低肿瘤细胞对常规治疗药物的耐药性,提高化疗药物的治疗效果。     

三氧化二砷聚乙二醇-聚乳酸偶联人源抗血管内皮细胞生长因子受体2隐形纳米粒的抗肝癌机制探讨

目的 探讨以聚乙二醇-聚乳酸（PEG-PLA）为载体材料包载的三氧化二砷（As2O3）,同时偶联人源抗血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR-2）的隐形纳米粒的抗肝癌机制。方法 以PEG-PLA为载体材料,W/O/W型超声乳化制备As2O3纳米粒,同时偶联具有肝癌靶向作用的VEGFR-2,得到人源抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA纳米粒,同时以相同方法制作香豆素6（C6）-PEG-PLA及抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA纳米粒。测定纳米粒粒径分布、Zata电位;MTT法计算As2O3、As2O3-PEG-PLA及抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA对Bel 7402肝癌细胞IC50值;采用流式细胞实验和激光共聚焦显微镜实验检测人肝癌Bel 7402细胞摄取C6-PEG-PLA及抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA纳米粒的速度和强度;将18只肝癌裸鼠采用随机数字表法分为3组,每组分别经尾静脉注射As2O3、As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA溶液,给药后12 h处死小鼠,取肿瘤、脾、心、肺、肝、肾等组织,测试其中As2O3浓度;再将另24只肝癌裸鼠采用随机数字表法分为4组,每组分别经尾静脉注射As2O3、As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA及0.9%氯化钠溶液,给药后第17 d,处死小鼠,计算肿瘤抑制率。结果 抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA平均粒径为（141.9±13.2）nm（PDI=0.23）,呈正态分布,Zata电位为（10.2±1.1）mV。As2O3、As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA的IC50值分别为（1.53±0.22）μmol/L,（2.30±0.18）μmol/L和（1.80±0.22）μmol/L。不同剂型IC50值比较,差异有统计学意义（F=4.503,P=0.018）。不同时间点人肝癌Bel 7402细胞摄取抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA的速度均高于C6-PEG-PLA,差异有统计学意义（t=2.012,P=0.045;t=2.231,P=0.035;t=2.311,P=0.022）。As2O3组不同组织As2O3含量比较,差异有统计学意义（F=5.568,P=0.018）;As2O3-PEG-PLA组不同组织As2O3含量比较,差异有统计学意义（F=4.659,P=0.034）;抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA组不同组织As2O3含量比较,差异有统计学意义（F=5.001,P=0.022）。对照组、As2O3组、As2O3-PEG-PLA组和抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA组肿瘤抑制率分别为32.6%、45.9%、66.2%和87.9%。4组肿瘤抑制率比较,差异有统计学意义（χ2=4.189,P=0.018）。结论 以PEG-PLA为载体材料制备得到As2O3纳米制剂,且偶联具有肝癌靶向作用的VEGFR-2,用于肝癌的治疗,可显著提高As2O3的生物利用度,为构建As2O3肝癌靶向纳米递送系统提供了理论依据。     

完全腹腔镜下成人Ⅰ型先天性胆管扩张症根治术

目的探讨完全腹腔镜下成人Ⅰ型先天性胆管扩张症根治术的可行性及临床应用效果。方法对南昌大学第二附属医院肝胆外科2010年3月～2011年2月收治的12例成人Ⅰ型先天性胆管扩张症患者的临床资料进行回顾性分析。结果 1例手术因囊肿分离困难而中转开腹,其余11例手术均顺利完成,手术时间(241.3±52.1)min,术中出血量为(215.7±57.4)mL,术后1例患者发生腹腔出血,再次开腹手术止血,其余10例患者术后恢复良好,未发生胆漏等并发症,平均住院时间(7.4±1.8)d。结论完全腹腔镜下成人Ⅰ型先天性胆管扩张症根治术是一种复杂的手术,对有经验的术者来说是可行的,具有创伤小、恢复快、腹壁美观等优点。     

纤维蛋白胶的临床应用进展

纤维蛋白胶(Fibrin Glue,简称FG)是一种生物蛋白制剂,最早应用于伤口止血。近20年来,随着手术要求的不断提高,FG也逐渐应用于促进伤口愈合、封闭组织缺损、防止组织粘连,甚至作为某些药物的缓释载体试用于临床。其使用方法不断改进,应用范围不断拓展。本文就FC的临床应用作一综述。