血液实验教学中血浆制备的条件优化及储存时间对实验效果的影响

目的：对生理学血液实验教学中富血小板血浆（platelet-richplasma,PRP）及少血小板血浆（platelet-poorplasma,PPP）制备条件进行优化,并明确血浆储存时间对实验效果的影响。方法：比较家兔麻醉状态下不同采血方法、家兔有无麻醉、采血后血液置于不同材质的试管以及不同离心参数等因素对PRP及PPP凝血时间以及得率的影响;并且测定储存时间对制备的血浆凝固时间的影响。结果：（1）家兔麻醉状态下,三种采血法（头皮针颈动脉采血、颈动脉放血、心脏采血）无明显差异;（2）采用心脏采血方法,在家兔清醒状态下采血所得PRP凝固时间比麻醉状态下的时间更短（P﹤0.001）;（3）玻璃离心管作为容器所得PRP和PPP的凝固时间分别较塑料离心管的短（P﹤0.001）,且塑料离心管所得PPP得率高于玻璃采血管（P﹤0.01）;（4）三种离心参数制备PRP,以Aghaloo法PRP的凝固时间最长（P﹤0.001）,本科室传统离心法与Landesberg法的凝固时间无统计学差异;Land-esberg法和Aghaloo法的PRP得率无差异,但较本科室传统离心法高（P﹤0.001）;（5）PRP和PPP于-20℃储存1-360d后,对血浆凝固时间无明显影响。结论：PRP的制备以家兔在清醒状态下、心脏采血、采用玻璃离心管、以Landesberg法离心,血浆得率高、凝固时间短;PPP的制备采用塑料离心管,以1500×g离心30min,血浆得率高、凝固时间长。将所得血浆分装,-20℃保存,血小板活性可保持一年。     

佛甲草对佐剂性关节炎大鼠氧化应激的影响

目的：研究佛甲草醇提物对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用并探讨其对氧自由基的影响。方法：采用弗氏完全佐剂免疫诱导大鼠佐剂性关节炎动物模型;观察不同浓度佛甲草提取物对佐剂性关节炎（AA）大鼠的慢性足肿胀度、血清中一氧化氮（NO）含量及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性的影响。结果：与模型组相比,高、低剂量的佛甲草醇提物均能抑制大鼠慢性足肿胀,降低大鼠的血清NO水平,并使GSH-Px的含量增加。结论：佛甲草醇提物对大鼠佐剂性关节炎有治疗作用,其作用可能与其恢复抗氧化物酶活性,提高自由基的清除能力有关。     

佛甲草对实验性肝纤维化大鼠脂质过氧化的影响

目的:探讨佛甲草提取液(SLT)对实验性肝纤维化大鼠脂质过氧化的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(Col,0.1 mg·kg-1)、SLT低剂量组(SLT,4 g·kg-1)、SLT高剂量组(SLT,8 g·kg-1)。采用50%的CCl4花生油溶液灌服制备大鼠肝纤维化模型,期间给予灌服SLT(4,8 g·kg-1)、Col(0.1 mg·kg-1)进行干预,共9周。9周后处死大鼠取固定部位肝组织及血清标本,光镜下观察肝细胞结构和肝纤维化程度,分光光度法检测肝组织匀浆、血清中丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的变化。结果:光镜下可见模型组大鼠肝细胞严重变性、坏死,胶原纤维明显增加;肝组织、血清中MDA含量增高,SOD、GSH-Px活力显著下降。SLT预防给药明显改善大鼠肝细胞结构,减轻肝纤维化程度;明显降低肝纤维化大鼠肝脏及血清MDA含量,显著升高SOD、GSH-Px活性。结论:佛甲草提取液对大鼠肝纤维化有一定的防治作用,其机制可能与抗脂质过氧化损伤有关。     

酸敏感离子通道在大鼠脑干斜方体核和旁巨细胞外侧核的表达及间歇性缺氧对其表达的影响

目的 探讨酸敏感离子通道(ASICs)的3种亚型(ASIC1b、ASIC2a和ASIC3)在大鼠脑干斜方体核(Tz)和旁巨细胞外侧核(LPGi)的表达以及在间歇性缺氧情况下三者表达的变化.方法 制备间歇性缺氧大鼠模型,12 d后抽血进行血气分析,采用常规免疫组化法(SABC法),观察正常大鼠及间歇性缺氧大鼠脑干Tz和LPGi神经元ASIC1b、ASIC2a和ASIC3的表达.结果 正常大鼠脑干Tz和LPGi等神经核团,均可见到呈胞浆阳性的ASIC1b、ASIC2a和ASIC3表达的神经元.间歇性缺氧组大鼠,ASIC1b阳性神经元数密度(个/mm3)在Tz中减小(P＜0.05),在LPGi中变化不明显(P＞0.05),灰度值在Tz和LPGi中均无明显变化(P＞0.05);ASIC2a阳性神经元数密度(个/mm3)在Tz和LPGi中改变均不明显(P＞0.05),灰度值在Tz中增加(P＜0.05),在LPGi中改变不明显(P＞0.05);ASIC3阳性神经元数密度(个/mm3)在Tz中改变不明显(P＞0.05),在LPGi中减小(P＜0.05),灰度值在Tz和LPGi中改变均不明显(P＞0.05).结论 正常大鼠脑干Tz和LPGi等呼吸相关神经核团神经元均表达ASIC1b、ASIC2a和ASIC3等ASICs;间歇性缺氧大鼠不同部位不同亚型ASICs表达的变化有所不同,提示不同部位不同亚型ASICs在呼吸调节中的作用可能有所不同.     

医学机能学实验教学中心教学平台的搭建

为了提高教学质量,改善教学环境,培养高素质创新型医学人才,不断提高实验技术人员的技术,按照学校“十一五”建设发展规划提出的要求,我们应以“高起点、高水平、高效益”的标准建设实验教学中心;使之成为现代化的、综合性的、多功能的、开放性的、网络信息化的省级重点实验示范中心;所以搭建科学完善的机能学实验教学平台就显得尤为重要。     

乌蕨醇提取物对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:观察乌蕨醇提取物对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群、细胞因子水平及核转录因子-κB(NF-κB/P65、NF-κB/P50)蛋白表达的影响,进一步研究其抗肿瘤机制。方法:将60只雄性昆明小鼠随机分为6组,分别为正常对照组、模型组、环磷酰胺组(50mg/kg)、乌蕨低、中、高剂量组(2.5、5.0、10.0 g/kg),制备小鼠S180荷瘤模型,于造模第二天,各组分别给予乌蕨醇提取物灌胃、环磷酰胺腹腔注射,连续给药14 d后,采用流式细胞术分析荷瘤小鼠外周血CD3~+、CD4~+和CD8~+细胞在T淋巴细胞中的百分含量,并计算CD4~+/CD8~+比值;应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测荷瘤小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10);蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测肿瘤组织IL-10、IL-17、TNF-α及NF-κB/P65、NF-κB/P50的蛋白表达。结果:与模型组相比,乌蕨10.0、5.0、2.5 g/kg可显著提高荷瘤小鼠CD3~+淋巴细胞和CD4~+T淋巴细胞阳性率,显著降低中性粒细胞率、单核细胞百分比和CD8~+T淋巴细胞阳性率,显著升高CD4~+/CD8~+比值;升高血清IL-6及IL-10水平,显著提高肿瘤组织IL-10、IL-17、TNF-α、NF-κB/P65和NF-κB/P50蛋白的相对表达量。结论:乌蕨具有明显的体内抗肿瘤活性,其机制可能与激活NF-κB信号通路,升高荷瘤小鼠机体细胞因子水平、增强机体免疫功能有关。     

乌蕨的生物活性研究进展

乌蕨是一种民间中草药,有"万能解毒药"之美称,具有解毒、抗肝炎、抗肾衰竭和抗菌等生物活性作用。大量研究表明,乌蕨具有良好的抗氧化、抗酪氨酸酶及抗肿瘤等活性,这与其主要成分黄酮类化合物有关。本文对乌蕨的抗氧化、抗酪氨酸酶、抗肿瘤等作用进行了综述,以期更加全面和深入了解乌蕨的生物活性。     

染料木素对运动疲劳大鼠脏器指数及NO/NOS的影响

目的:探讨染料木素(Genistein,Gen)对运动疲劳大鼠脏器指数及NO/ NOS的影响。方法:雄性SD大鼠,随机分为对照组、运动疲劳模型组、低剂量(0.1μmol/kg)Gen组和高剂量(0.3μmol/kg)Gen组。运用强迫游泳法制备运动疲劳模型,皮下注射不同剂量Gen或溶剂处理,连续14 d。末次运动后取脾、胸腺、肾和脑进行脏器指数检测;于腹腔静脉取血,检测各组动血NO及NOS合成酶的含量。结果:与模型组相比,染料木素可显著上调大鼠脾、胸腺、肾和脑的脏器指数,同时染料木素可明显提高运动疲劳大鼠血清中的NO、tNOS和cNos含量,但对iNOS无明显影响。结论:Gen具有抑制运动疲劳导致的脏器损伤及提高NO含量和NOS活性的作用。     

酸敏感离子通道在大鼠岩神经节神经元的表达

目的：探讨酸敏感离子通道（acid-sensing ion channels,ASICs）的四种亚型即ASIC1a、ASIC1b、ASIC2a和ASIC3是否表达于大鼠岩神经节（petrosal ganglion）神经元。方法：采用常规免疫组化法（PV法）,观察正常大鼠岩神经节神经元是否表达ASIC1a、ASIC1b、ASIC2a和ASIC3。结果：在正常大鼠岩神经节神经元,可见ASIC1a、ASIC1b、ASIC2a和ASIC3表达;ASIC1a与ASIC2a,ASIC3与ASIC1b,ASIC3与ASIC1a,ASIC3与ASIC2a在岩神经节神经元上共表达。结论：正常生理情况下,大鼠岩神经节神经元均表达ASIC1a、ASIC1b、ASIC2a和ASIC3;ASICs亚型之间的共表达提示,在岩神经节可能存在ASICs异聚体的方式。