miRNA-143 靶向MACC1 抑制宫颈癌细胞侵袭

目的:探讨miRNA-143 对宫颈癌细胞侵袭能力的影响。方法:采用脂质体转染法瞬时转染miRNA-143 过表达和干扰质粒，Transwell 迁移实验检测miRNA-143 过表达和抑制后宫颈癌细胞侵袭能力的改变，生物信息学预测miRNA-143 的作用靶点。miRNA-143 过表达和抑制后Westernblot及双荧光素酶报告基因检测其靶点MACC1 表达，RT-qPCR检测20例患者宫颈癌和癌旁正常组织标本中miRNA-143 和MACC1 mRNA 的表达，分析20例患者宫颈癌组织中miRNA-143 和MACC1 mRNA 表达的相关性。结果:Transwell 迁移实验显示miRNA-143 过表达的宫颈癌细胞的侵袭能力降低，抑制miRNA-143 后侵袭能力增强。生物信息学预测显示miRNA-143 作用于MACC1 的3'-UTR ，Westernblot及双荧光素酶报告基因结果进一步证实miRNA-143 作用于MACC1 的3'-UTR 。RT-qPCR显示miRNA-143 过表达的MACC1 mRNA 表达下降，而抑制miRNA-143 后MACC1 mRNA 表达上升。抑制miRNA-143 表达的宫颈癌细胞中MACC1 被干扰后，宫颈癌细胞的侵袭能力显著被抑制。宫颈癌组织中miRNA-143表达水平显著低于正常宫颈上皮组织，MACC1 表达水平显著高于正常宫颈上皮组织，20例患者的宫颈癌组织中miRNA-143 与MACC1 mRNA 表达呈负相关。结论:miRNA-143 在宫颈癌中表达水平下降，并可能通过靶向MACC1 调节宫颈癌细胞的侵袭能力。      

FOXC2对结直肠癌细胞上皮-间质转化及侵袭能力的影响

目的：明确叉头框C2（FOXC2）在结直肠癌细胞侵袭迁移中的作用。方法采用逆转录病毒感染的方法建立FOXC2稳定过表达的结直肠癌细胞株（SW480／FOXC2）及空载体对照细胞株（SW480／pBabe）,显微镜下观察结直肠癌细胞形态改变。Western blot及免疫荧光法检测FOXC2过表达细胞株及对照细胞株中E‐cadherin、Vimentin、N‐cadherin的表达情况;Tr‐answ ell侵袭小室实验检测结直肠癌细胞迁移能力的改变。结果过表达后SW480细胞的形态发生了明显的变化,从原来典型的上皮细胞形状变成长梭形,类似于成纤维细胞的形态;Western Blot及免疫荧光检测结果显示,FOXC2过表达后上皮分子标志物E‐cadherin表达明显下调,而间质分子标志物Vimentin及N‐cadherin表达显著上调;Transwell侵袭实验结果显示,FOXC2过表达后结直肠癌细胞侵袭潜能明显增强。结论 FOXC2过表达能诱导结直肠癌细胞SW480发生上皮‐间质转化并增强其侵袭能力。     

miR-30b对结直肠癌细胞转移潜能的影响

  目的   明确miR-30b对结直肠癌细胞侵袭和迁移潜能的影响。   方法   RT-qPCR检测20对配对结直肠癌组织标本中miR-30b的表达;Transwell和划痕实验检测过表达和抑制miR-30b后结直肠癌细胞侵袭和迁移潜能的改变;应用生物信息学方法预测miR-30b的作用靶点;Western Blot及双荧光素酶报告基因实验验证过表达和抑制miR-30b后靶点Snail和EMT（epithelial mesenchymal transition）标志物的表达情况。   结果   癌组织中miR-30b表达水平明显低于正常肠黏膜组织;Transwell及划痕实验结果显示过表达miR-30b后结直肠癌细胞的侵袭迁移能力降低,抑制miR-30b后侵袭迁移能力增强;生物信息学预测结果显示miR-30b能够作用于Snail 3'-UTR,双荧光素酶检测结果进一步证实miR-30b能够作用于Snail 3'-UTR;Western Blot结果显示过表达miR-30b后Snail的表达下降,EMT标志物Vimentin表达下降和E-cadherin表达升高,而抑制miR-30b后结果相反。   结论   miR-30b在结直肠癌中表达水平下降,并通过靶向Snail调节结直肠癌细胞的侵袭和迁移。      

结肠癌组织中SATB1的表达及其临床意义

目的探讨SATB1异常表达与结肠癌发生、发展及预后的关系。方法分别用RT-PCR和Western blot法检测SATB1在25例结肠癌活检组织及相应癌旁正常组织中mRNA和蛋白表达水平;采用免疫组化检测58例结肠癌石蜡组织切片中SATB1的表达,分析其与结肠癌临床病理因素的关系及预后意义。结果 SATB1 mRNA和蛋白在92%(23/25)结肠癌活检组织中的表达水平高于其癌旁正常组织;58例结肠癌石蜡组织中,SATB1蛋白强阳性率为46.6%(27/58)。统计学分析结果显示,SATB1强阳性与结肠癌Dukes分期和远处转移密切相关,而与性别、年龄、病理分级、肿瘤大小、淋巴结转移无显著相关性。结论 SATB1在结肠癌中高表达,其表达水平与肿瘤进展相关,可作为预测结肠癌进展和转移的分子标记物。     

癌基因BMI-1对中心体复制的调节作用

【目的】探讨BMI-1在中心体扩增中的作用。【方法】通过磷酸钙转染法在细胞中高表达野生型、带有Myc-tag的Myc-BMI-1质粒及两个BMI-1的RNAi序列，Western blot检测BMI—1蛋白的表达，免疫荧光观察中心体数目的变化。【结果】首先检测了抗BMI-1抗体特异识别重组和内源性BMI-1蛋白：高表达BMI-1于HeLa和MCF-7细胞中导致中心体的扩增；在Cos7和U20S中因RNAi降低BMI—1翻译而抑制了中心体的扩增。【结论】癌基因BMI-1在中心体复制扩增的调节中起着重要的作用。     

PHLPP1在结直肠癌中的表达及意义

目的：探讨PHLPP1在结直肠癌中的表达规律及临床意义。方法采用免疫组织化学实验检测10例结直肠癌组织石蜡标本中PHLPP1蛋白水平的表达情况;同时运用western blot 实验和实时荧光定量PCR实验检测10对新鲜结直肠癌组织及配对的癌旁组织中PHLPP1蛋白和mRNA的表达情况;另外运用实时荧光定量PCR实验检测52例新鲜结直肠癌组织中PHLPP1 mRNA的表达水平,并分析PHLPP1的表达水平与临床病理参数之间的关系。结果 western blot实验、免疫组织化学实验及实时荧光定量PCR实验的结果显示PHLPP1在结直肠癌组织中的表达水平均明显低于配对的癌旁组织,并且PHLPP1在结直肠癌组织中mRNA的表达水平与结直肠癌的分化程度、Ducks分期、淋巴结转移和远处转移相关等临床病理参数之间呈负相关（ P＜0.05）。结论结直肠癌组织中PHLPP1的表达水平显著下调,并且其表达水平与分化程度、Dukes分期、淋巴结转移和远处转移等临床病理参数之间呈负相关, PHLPP1在结直肠癌的发生、发展和转移的过程中可能发挥类似抑癌基因的作用。     

核基质蛋白SAFB真核表达载体的构建及其鉴定

目的构建人SAFB基因真核表达载体,为SAFB基因功能研究提供研究基础。方法设计人SAFB特异性引物,提取人正常结直肠上皮组织总RNA,应用RT-PCR方法提取人SAFBcDNA,通过双酶切及测序鉴定,将SAFB克隆至pcDNA3.1（-）,构建人SAFB基因的真核表达载体pcDNA3.1（-）/SAFB,转染SW480细胞,用WesternBlot技术检测目的蛋白的表达。结果成功扩增人SAFB全长cDNA,双酶切鉴定和测序结果证实成功构建pcDNA3.1（-）/SAFB真核表达载体,转染细胞后,可检测出分子量约为140KD的目的蛋白。结论获得人SAFB基因全长cDNA并成功构建了SAFB真核表达载体,证实pcDNA3.1（-）/SAFB转染SW480细胞后可表达SAFB蛋白,为深入研究SAFB基因在肿瘤发生发展中的作用提供了基础。     

乳腺癌组织中着丝粒蛋白CENP-B的表达及意义

目的检测乳腺癌组织中着丝粒蛋白CENP-B的表达,探讨CENP-B的表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系及意义。方法分别用RT-PCR、Q-PCR和Western blot法检测4例乳腺癌活检组织及相应癌旁组织中CENP-B mRNA和蛋白表达水平的差异;采用免疫组化SP法检测CENP-B在53例乳腺癌石蜡组织切片中的表达,并采用SPSS 10.0软件分析其与乳腺癌的临床病理特征的关系。结果 CENP-B mRNA和蛋白在4例乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织;53例乳腺癌组织中CENP-B阳性率为90.6%(48/53),强阳性率为52.8%(28/53),CENP-B在乳腺肿瘤组织中的表达水平高于癌旁组织。统计分析结果发现CENP-B强阳性与临床分期、T分期密切相关。结论 CENP-B可能成为评价乳腺癌发生、发展的重要生物学指标。