CEACAM6介导上皮间质转化增强胰腺癌细胞侵袭能力和耐药性的研究

目的:研究CEACAM6对胰腺癌细胞株SW1990侵袭能力和耐药性的影响,并探讨上皮间质转化(EMT)在其中的作用?方法:筛选及鉴定过表达CEACAM6的稳定转染SW1990-CEACAM6细胞株,通过定量PCR和Western blot方法检测SW1990细胞株中EMT相关表型标志物的改变?通过Transwell实验检测过表达CEACAM6对SW1990细胞株侵袭的影响,MTT法检测耐药指数(RI)?结果:定量PCR及Western blot验证过表达CEACAM6细胞株SW1990-CEACAM6成功建立,其倾向于向间质细胞转化:波形蛋白(Vimentin)表达明显上调,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达下降?功能实验证实过表达CEACAM6具有促进SW1990胰腺癌细胞株侵袭作用,同时细胞株耐药性增强?结论:CEACAM6能够促进SW1990胰腺癌细胞株上皮间质转化,从而促进胰腺癌细胞的恶性转化?     

ORP8对结直肠癌DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 观察和分析氧化固醇结合蛋白相关蛋白8(ORP8)蛋白对人结直肠癌DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探究其影响机制.方法 通过在结直肠癌DLD-1细胞中转染ORP8表达质粒或特异性沉默siRNA上调和下调ORP8的表达,采用CCK-8、Transwell实验检测干扰或过表达ORP8对DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot检测了 ORP8对DLD-1细胞细胞外蛋白调节激酶(ERK1/2)的总蛋白及其磷酸化(p-ERK1/2)水平和上皮-间质转化(EMT)相关分子标志物蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达的影响.结果 干扰DLD-1细胞ORP8表达,细胞增殖、迁移和侵袭能力均升高(P＜0.01),EMT相关分子标志物中上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平下降,间质标志物Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平升高,ERK1/2蛋白的磷酸化水平也升高;相反,过表达ORP8,细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05),上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平升高,间质标志物Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平降低,p-ERK1/2水平也降低.结论 ORP8蛋白能够抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与阻断EMT和抑制ERK1/2磷酸化有关.     

DIAPH3与上皮和间质标记物在结直肠癌组织中的表达及意义

目的：探讨结直肠癌中Diaphanous相关成蛋白家族成员之一DIAPH3的表达与结直肠癌上皮间质转化的关系。方法用免疫组织化学法检测结直肠癌及应用荧光定量PCR检测结直肠癌细胞株SW620、SW480、HT29中DIAPH3、E－钙黏蛋白（E－cadherin）、细胞角蛋白（CK）及波形蛋白（vimentin）的表达。结果 DIAPH3、E－cadherin与CK在结直肠正常组织中表达高于癌组织（P＜0.05）,且与结直肠癌分化程度有关（P＜0.05）。 vi-mentin在结直肠癌中的表达高于正常组织（P＜0.05）,且与分化程度有关（P＜0.05）。 DIAPH3与E－cadherin、CK表达呈正相关,与vimentin表达呈负相关。结论 DIAPH3与结直肠癌分化与转移有关,其可能抑制结直肠癌转移及上皮间质转化的发生。     

AGEs通过JAK2/STAT3信号通路诱导结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及上皮间质转化

目的 观察糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响,并探讨其相关机制.方法 将结肠癌SW480细胞分为对照组、AGEs组(200 μg/mL AGEs)、AGEs(200 μg/mL)+AG490(50 μmol/L)组,CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期、凋亡,Transwell实验检测细胞体外侵袭能力,划痕实验检测细胞体外迁移能力.不同浓度(0、50、100、200 μg/mL) AGEs和200 μg/mL AGEs、50 μmol/L AG490单独处理及二者联合处理SW480细胞后,Western blot检测上皮间质转化相关分子标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及JAK2/STAT3信号通路相关分子的变化.结果 与对照组比较,AGEs能明显促进结肠癌SW480细胞的增殖,减少G1/S期阻滞,抑制凋亡,增强体外的侵袭、迁移能力(P＜0.05).与AGEs组比较,AGEs+ AG490组结肠癌SW480细胞增殖减少,G1/S期阻滞增加,凋亡增加,侵袭、迁移能力降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测结果显示,AGEs处理结肠癌SW480细胞后E-cadherin表达降低,N-cadherin、Vimentin、p-STAT3、p-JAK2表达升高,而AG490可逆转AGEs对结肠癌SW480细胞的作用.结论 AGEs能够通过JAK2/STAT3信号通路促进结肠癌SW480细胞的增殖,抑制凋亡,增强侵袭、迁移能力,促进上皮间质转化.     

锌指蛋白545对结直肠癌上皮间质转化和迁移侵袭的影响

目的探讨锌指蛋白545（ZNF545）对结直肠癌上皮间质转化（EMT）和迁移侵袭的影响。方法免疫印迹试验检测ZNF545在结直肠癌细胞系中的表达,并构建过表达和敲低ZNF545的细胞株;采用Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力,免疫印迹试验检测EMT相关分子标志物[E钙黏蛋白（E-cadherin）、磷酸化锌指转录因子（slug）]的表达;细胞免疫荧光检测ZNF545表达变化对结直肠癌细胞E-cadherin表达的影响。结果内源性ZNF545蛋白在SW480细胞中表达最高,在Lovo、Caco2细胞中的表达次之,在HCT116细胞中表达最低。过表达ZNF545可抑制HCT116细胞的迁移和侵袭能力（均P＜0.01）,抑制slug的表达（P＜0.01）,增加E-cadherin的表达（P＜0.01）;而敲低ZNF545的表达后,SW480细胞的迁移和侵袭能力明显增强（均P＜0.01）,可增加slug的表达（P＜0.01）,抑制E-cadherin的表达（P＜0.01）。在荧光显微镜下,过表达ZNF545可增加E-caherin表达;敲低ZNF545表达后抑制E-caherin表达。结论ZNF545通过参与结直肠癌EMT过程调控结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。     

慢病毒介导的FLOT2基因沉默影响结肠癌细胞生物学功能的影响及机制

目的 构建干扰FLOT2表达的慢病毒载体,探讨抑制FLOT2表达对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及机制。方法 通过qRT-PCR检测结直肠癌组织及人结肠癌LoVo、SW480及HT29细胞FLOT2的表达水平,Western blot检测结肠癌细胞FLOT2表达。将含FLOT2 siRNA的慢病毒载体转染结肠癌LoVo细胞和SW480细胞。采用qRT-PCR及Western blot检测转染后的细胞FLOT2表达。MTT法、流式细胞术、Transwell小室、Western blot分别检测细胞增殖能力、凋亡率、侵袭迁移能力及PCNA、cleaved caspase3、E-cadherin和Vimentin蛋白水平。结果结直肠癌组织FLOT2 mRNA表达水平明显高于癌旁组织,三个结肠癌细胞FLOT2 mRNA及蛋白水平均明显高于在正常结肠上皮细胞NCM460（P<0.05）。LoVo细胞和SW480细胞转染FLOT2 siRNA慢病毒载体后,FLOT2 mRNA及蛋白表达水平均明显降低,且可明显降低细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡,下调PCNA和Vimentin表达,上调cleaved caspase3和E-cadherin（P<0.05）。结论抑制FLOT2表达可明显降低结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡,其机制可能与调节PCNA、cleaved caspase3、E-cadherin和Vimentin表达有关。     

白首乌提取物C_(21)甾体苷对结直肠癌细胞株SW480的影响

目的:探讨白首乌提取物C_(21)甾体苷对人结直肠癌细胞株SW480生长、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:体外常规培养人结直肠癌细胞株SW480,以不同浓度的C_(21)甾体苷作用于细胞,分别培养24 h、48 h、72 h,采用溴化二甲噻唑二苯四氮法检测不同浓度的C_(21)甾体苷对人结直肠癌细胞株SW480生长的抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Transwell小室法检测细胞的侵袭和迁移能力。结果:C_(21)甾体苷以时间和浓度依赖性抑制人结直肠癌细胞株SW480的生长,促进人结直肠癌细胞株SW480凋亡,抑制人结直肠癌细胞株SW480的侵袭和迁移。结论:C_(21)甾体苷可抑制人结直肠癌细胞株SW480的生长,该抑制作用与诱导其凋亡及降低其侵袭和迁移能力有关。     

Lnc-CRCMSL在结直肠癌中的表达及对癌细胞生长的影响

目的探讨长链非编码RNA-CRCMSL(Lnc-CRCMSL)在结直肠癌组织和癌细胞中的表达及对癌细胞生长的影响。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测Lnc-CRCMSL在结肠癌组织和癌旁正常组织、正常结肠上皮细胞及结直肠癌细胞中的表达特点。建立SW480耐药株SW480/DDP,并通过基因干扰实验过表达其Lnc-CRCMSL水平,采用流式细胞术测定细胞的凋亡率,CCK-8测定细胞的增殖活力,划痕愈合实验测定细胞的迁移能力,Transwell测定细胞的侵袭能力,免疫蛋白印迹实验测定基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达。结果Lnc-CRCMSL在结直肠癌组织的表达低于癌旁正常组织,在Ⅱ期、Ⅲ期结直肠癌组织中的表达低于Ⅰ期,且在结直肠癌细胞中的表达量低于正常结肠上皮细胞(P＜0.05)。过表达Lnc-CRCMSL提高了SW480/DDP的凋亡率,抑制了SW480/DDP的增殖、迁移和侵袭活力(P＜0.05)。同时,过表达Lnc-CRCMSL降低了SW480/DDP的MMP2和MMP9表达水平(P＜0.05)。结论Lnc-CRCMSL在结直肠癌中表达异常,对结直肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭行为具有调控作用。     

转录因子FOXC1促进胶质瘤细胞系U87的侵袭能力

目的：探讨转录因子FOXC1对人脑胶质瘤细胞系U87侵袭的促进作用。方法：qPCR、Western blot检测胶质瘤细胞系U87、U251及正常星型胶质细胞中FOXC1 mRNA和蛋白表达水平。将FOXC1-siRNA转染至U87细胞中,分别用qPCR、Western blot检测FOXC1-siRNA的转染效率。细胞划痕实验和Transwell实验检测U87细胞转染FOXC1-siRNA后对细胞侵袭能力的影响,利用 Western blot检测U87细胞上皮间质化相关通路蛋白（Snail1、β-catenin、Twist1）、标记蛋白（N-cadherin、Vimentin、E-cadherin）表达水平。结果：U87细胞下调FOXC1表达后侵袭能力明显减弱,上皮间质化相关通路蛋白（Snail1、β-catenin、Twist1）表达水平下降,上皮细胞标记蛋白表达水平E-cadherin表达水平升高、间质细胞标记蛋白N-cadherin、Vimentin表达水平降低。结论：转录因子FOXC1通过上皮间质化促进胶质瘤细胞的侵袭。     

敲低lncRNA FOXCUT调控FOXC1基因对结直肠癌细胞增殖的影响

目的研究敲低长链非编码RNA(lncRNA)FOXCUT调控叉头框C1(FOXC1)基因对结直肠癌细胞增殖的影响。方法培养结肠癌细胞株HT29、SW480、LoVo及正常肠上皮细胞HIEC并检测lncRNA FOXCUT、FOXC1的表达水平;培养SW480细胞并转染lncRNA FOXCUT的siRNA、FOXC1质粒,检测细胞增殖活力OD490及lncRNA FOXCUT、FOXC1、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、c-myc基因(c-myc)的表达水平。结果 HT29、SW480、LoVo细胞中lncRNA FOXCUT、FOXC1的表达水平均高于HIEC细胞(P0.05),其中SW480细胞中lncRNA FOXCUT、FOXC1表达上调最显著;敲低lncRNA FOXCUT后,SW480细胞的OD490水平、lncRNA FOXCUT、FOXC1、cyclinD1、c-myc的表达水平均降低(P0.05);过表达FOXC1后,敲低lncRNA FOXCUT降低SW480细胞OD490水平及FOXC1、cyclinD1、c-myc表达的作用被逆转。结论敲低lncRNA FOXCUT抑制结直肠癌细胞增殖,该作用与抑制FOXC1表达有关。     

EMT在大肠癌细胞奥沙利铂耐药中的作用及分子机制研究

目的：探讨上皮‐间叶转化（EMT）在大肠癌耐药中的作用及分子机制。方法采用药物浓度递增的方法建立大肠癌LOVO细胞奥沙利铂（L‐OHP）耐药细胞株LOVO／L‐OHP,免疫荧光和蛋白质印迹法（Westernblot）检测LOVO和LOVO／L‐OHP细胞E‐cadherin和Vimentin表达;Westernblot检测核转录因子Snail、Twist表达;噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖。结果与LOVO细胞比较,LOVO／L‐OHP皮表型消失,细胞膜E‐cadherin表达减弱（22．63±3．25）％（P＜0．01）,获得间叶细胞表型,表达Vimentin（475．42±58．36）％（P＜0．01）。LOVO／L‐OHP细胞株Twist表达轻度增加（116．42±18．36）％（P＞0．05）,Snail表达显著增加（382．18±41．33）％（P＜0．01）。siSnail上调E‐cadherin表达（246．82±31．57）％（P＜0．01）,下调Vimentin表达（28．75±3．96）％（P＜0．01）;siSnail显著增强LOVO／L‐OHP细胞株L‐OHP化疗敏感性,对照组和siSnail组的IC50分别为23．75μg／mL和12．42μg／mL。结论EMT在大肠癌细胞L‐OHP耐药中可能起重要作用,抑制EMT可恢复耐药细胞化疗敏感性。     

PKC介导P38MAPK通路调控结直肠癌细胞MMP-9表达及侵袭的研究

目的 研究MAPK信号通路对结直肠癌SW480细胞MMP-9表达及细胞侵袭作用的影响。方法 观察蛋白激酶C激活剂TPA诱导下SW480细胞形态学的改变;蛋白免疫印迹法检测MMP-9、P38MAPK蛋白的表达,zymography法检测MMP-9蛋白的分泌,利用Transwell实验观察细胞侵袭能力。结果 显微镜下观察,随着TPA浓度的升高,细胞形态逐渐改变成针尖样;蛋白免疫印迹法显示,TPA处理下P38磷酸化增加,MMP-9蛋白表达和分泌增加,呈时间依赖性;并且肿瘤细胞侵袭能力随之增强;而通过预处理PKC抑制剂和P38抑制剂,可明显抑制TPA诱导的MMP-9表达和细胞侵袭能力。结论 在结直肠癌SW480细胞中PKC激动剂TPA通过激活P38MAPK信号通路调控MMP-9表达及细胞侵袭,为阻止结直肠癌侵袭转移研究提出多方位的作用靶点和新思路。     

BCAR3诱导乳腺癌上皮间质转化及与癌细胞迁移、侵袭的关系

目的:观察他莫昔芬耐药乳腺癌细胞BCAR3的表达与上皮间质转化(EMT)现象和乳腺癌的迁移侵袭的关系。探讨他莫昔芬耐药和乳腺癌细胞EMT现象的相关性。方法:以实时定量PCR和Western blot检测乳腺癌上皮样和间质样细胞系中BCAR3的表达;Western blot检测乳腺癌MCF-7、MCF-BCAR3和BT-549中介导EMT发生的转录因子Twist、上皮性标记基因E-钙黏素(E-cadherin)和间质性标记基因N-钙黏素(N-cadherin)表达的改变情况。Transwell侵袭实验检测乳腺癌MCF-7、MCF-BCAR3和BT-549侵袭转移能力。结果:BCAR3在乳腺癌上皮样细胞系中的表达明显低于间质样细胞系;E-cadherin蛋白在MCF-7细胞中的表达为阳性,Twist和N-cadherin表达为阴性;他莫昔芬耐药的细胞MCF-BCAR3 E-cadherin蛋白表达缺失,而Twist和N-cadherin表达阳性。BCAR3过度表达导致乳腺癌细胞MCF-7迁移和侵袭能力增强。结论:过度表达BCAR3增强乳腺癌细胞迁移和侵袭能力,并对他莫昔芬治疗产生耐药,可能与BCAR3诱导乳腺癌上皮间质转化有关。     

Kiss-1与结肠癌SW480细胞增殖的关系

目的以结肠癌细胞SW480为模型,初步探讨Kiss-1基因过表达与结肠癌细胞增殖的关系。方法采用脂质体转染的方法将Kiss-1/pEGFP-N1重组质粒转染至SW480细胞,上调结肠癌细胞中Kiss-1的表达水平,经G418筛选出稳定表达株;根据细胞分为3组：阴性对照组（转染pEGFP-N1空载体）、实验组（转染pEGFPN1-Kiss1）及空白对照组（未转染）。Western blot检测转染后细胞中Kiss-1表达量的变化;采用CCK8试验分析Kiss-1对SW480细胞增殖的抑制效果。结果成功将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480结肠癌细胞,western blot检测出阴性对照组和空白对照组中显示Kiss-1低表达,实验组Kiss-1表达量增加,CCK8试验表明实验组细胞增殖率明显低于对照组（P〈0.05）。结论 Kiss-1可抑制结肠癌细胞的增殖率。     

耐吉西他滨胰腺癌细胞株SW1990/GZ上皮间质转化现象的研究

目的:观察耐吉西他滨胰腺癌细胞株(SW1990/GZ)上皮间质转化的现象?方法:倒置显微镜下观察亲代SW1990细胞与SW1990/GZ细胞的形态差别;流式细胞仪检测细胞周期;免疫印迹法(Western blot)检测上皮间质转化相关蛋白表达;Transwell小室测定细胞侵袭迁移能力;通过表面特异抗原(CD44+?CD24+和CD133+)标记流式细胞仪检测肿瘤干细胞比例?结果:在形态学上,SW1990/GZ表现出明显的间质细胞特征,与亲代SW1990相比处于G1期的细胞无明显差异;SW1990/GZ细胞低表达上皮细胞标志物E-cadherin,而高表达间质细胞的标记物Vimentin;SW1990/GZ细胞侵袭和迁移能力明显增强(P < 0.01);与亲代细胞SW1990相比,SW1990/GZ细胞中CD44+CD24+细胞比例以及CD133+细胞比例分别提高了2倍和4倍以上(P < 0.01)?结论:SW1990耐吉西他滨细胞株(SW1990/GZ)发生了明显的上皮间质转化过程,肿瘤干细胞比例明显增多?     

E74样因子5过表达抑制结肠癌细胞生物学行为的体内外实验研究

  目的  探讨E74样因子5（ELF5）过表达对结直肠癌细胞的生长和侵袭能力以及裸鼠成瘤的影响。  方法  人结直肠癌SW480和 HT-29细胞分为5组:LV-GFP组,转染空载体LV-GFP慢病毒;LV-ELF5组,转染重组LV-ELF5慢病毒;shRNA-NC组,转染空载体shRNA-NC慢病毒;shRNA-ELF5组,转染重组shRNA-ELF5慢病毒;对照组,未转染任何载体。转染72 h后,取含有慢病毒的细胞上清液,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测各组细胞中ELF5 的mRNA表达水平;Western blot检测ELF5、凋亡相关的cleaved Caspase-3/Caspase-3和cleaved Caspase-9/Caspase-9、侵袭相关的E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达水平;CCK-8检测细胞活力;克隆形成实验检测克隆形成率;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭;TUNEL实验检测组织中细胞凋亡; 免疫组化检测组织中E-cadherin、N-cadherin的表达。 将20只BALB/c裸鼠分为4组,每组5只:LV-GFP组、shRNA-NC组、LV-ELF5组、shRNA-ELF5组,于裸鼠皮下注射含重组慢病毒的SW480细胞上清液,构建裸鼠成瘤模型,监测移植瘤体积变化。第30天取裸鼠移植瘤组织,测量肿瘤质量,Western blot检测移植瘤ELF5蛋白的表达,TUNEL染色检测移植瘤凋亡,免疫组化检测移植瘤中N-cadherin阳性表达。  结果  与对照组细胞比较,两个细胞系LV-GFP组和shRNA-NC组细胞的各指标差异无统计学意义。Western blot结果与RT-qPCR结果表明,两个细胞系LV-ELF5组的ELF5 mRNA和蛋白水平均上调（P<0.05,与LV-GFP组比较）,shRNA-ELF5组的ELF5 mRNA和蛋白水平均下调（P<0.05,与shRNA-NC组比较）,ELF5过表达体系和干扰体系构建成功。与LV-GFP组比较,LV-ELF5组降低了细胞活力和克隆形成率（P<0.05）,促进SW480细胞凋亡,并上调cleaved Caspase-3/Caspase-3和cleaved Caspase-9/Caspase-9蛋白表达（P<0.05）,抑制细胞侵袭,并上调E-cadherin蛋白表达,下调N-cadherin蛋白表达（P<0.05）;ELF5干扰后,细胞的上述表现呈相反趋势（P<0.05,shRNA-ELF5组与shRNA-NC组比较）。体内实验结果表明,ELF5过表达缩小裸鼠肿瘤体积和降低肿瘤质量（P<0.05）,促进组织中细胞凋亡（P<0.05）,ELF5蛋白表达增加,抑制N-cadherin蛋白表达（P< 0.05）。当EFL5表达抑制,上述实验结果呈相反趋势。  结论  体内外实验表明ELF5过表达可促进结直肠癌细胞凋亡,抑制结直肠癌细胞的生长和侵袭。     

靶向抑制存活素基因对大肠癌细胞SW80侵袭和转移的实验研究

目的 构建靶向存活素(survivin)基因的短发夹干扰RNA(shRNA)表达载体,导入人大肠癌细胞SW480中,研究靶向抑制survivin基因对SW480细胞侵袭和转移的影响.方法 根据siRNA设计原则,在survivin序列中选取设计含19个核苷酸(19 nt)的靶序列,间以9个核苷酸的茎环序列,两端分别加上对应的酶切位点,形成shRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo中,获得靶向抑制survivin基因的sihNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin;采用Lipofectamine 2000TM转染试剂将干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入到大肠癌细胞SW480中;用Western blotting从蛋白水平检测干扰效果;分别采用肿瘤侵袭粘附实验和明胶酶谱分析法检测pRNAT-U6.1/Neo-survivin对SW480细胞的侵袭和转移潜能的影响.结果 Survivin基因的蛋白表达均得到显著抑制;沉默SW480的survivin基因可以显著抑制SW480细胞的侵袭和转移潜能,而且survivin基因表达被抑制后,SW480细胞分泌基质金属蛋白酶明显减少.结论 Survivin基因可能在SW480的侵袭和转移潜能中起重要作用,沉默SW480的survivin基因可以显著抑制其侵袭、转移和基质金属蛋白酶分泌,因而survivin影响SW480的侵袭和转移可能与调控基质金属蛋白酶分泌密切相关.     

SNC73基因在结肠癌细胞中的表达及重组的研究

目的 观察上皮来源的肿瘤细胞SNC73（IgHα1）基因的表达,探讨其在上皮细胞中的重组机理。方法 采用逆转录聚合酶链分反（RT-PCR）和Western印迹杂交方法,分析经无血清培养基培养的大肠癌细胞系SW480中SNC73和重组激活基因（RAG1和RAG2）的表达,并对RT-PCR产物进行序列分析;利用免疫组织化学方法检测IgHα1、Igλ和Igκ在SW480中的表达。结果 SNC73、序列进行分析,发现SW480中表达的SNC73基因的恒定区序列与免疫球蛋白A1完全一致。对RAG1和RAG2RT-PCR产物的序列进行分析仪以及Western印迹杂交检测,表明其与前B淋巴细胞表达的完全相同。结论 上皮来源的肿瘤细胞表达免疫球蛋白A1,且轻链为κ：RAG1和RAG2在上皮来源的肿瘤细胞中的表达,提示上皮细胞中的免疫球蛋白A1的重组方式可能与淋巴细胞相同或相似。