miRNA-1靶向DDX5抑制食管癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨微小RNA(miR)-1对食管癌细胞株EC-109生长、侵袭及迁移的影响和其相关作用调控机制。方法:采用脂质体瞬时转染技术，对体外培养的EC-109细胞转染miR-1 mimics，分别采用CCK-8法和Transwell实验检测miRNA-1对食管癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响；生物信息学预测miR-1可能的靶基因，并用双荧光素酶报告基因和Western blot法验证其靶基因。结果:过表达miRNA-1后，CCK-8和Transwell实验结果显示食管癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力显著降低(P<0.05)；生物信息学分析显示DDX5可能是miR-1的靶基因；双荧光素酶报告基因结果显示miR-1与DDX5 mRNA 3' UTR相结合；Western blot结果显示高表达miR-1后，DDX5表达下降。结论:miRNA-1可能通过靶向负调控DDX5的表达抑制食管癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-30b对结直肠癌细胞转移潜能的影响

  目的   明确miR-30b对结直肠癌细胞侵袭和迁移潜能的影响。   方法   RT-qPCR检测20对配对结直肠癌组织标本中miR-30b的表达;Transwell和划痕实验检测过表达和抑制miR-30b后结直肠癌细胞侵袭和迁移潜能的改变;应用生物信息学方法预测miR-30b的作用靶点;Western Blot及双荧光素酶报告基因实验验证过表达和抑制miR-30b后靶点Snail和EMT（epithelial mesenchymal transition）标志物的表达情况。   结果   癌组织中miR-30b表达水平明显低于正常肠黏膜组织;Transwell及划痕实验结果显示过表达miR-30b后结直肠癌细胞的侵袭迁移能力降低,抑制miR-30b后侵袭迁移能力增强;生物信息学预测结果显示miR-30b能够作用于Snail 3'-UTR,双荧光素酶检测结果进一步证实miR-30b能够作用于Snail 3'-UTR;Western Blot结果显示过表达miR-30b后Snail的表达下降,EMT标志物Vimentin表达下降和E-cadherin表达升高,而抑制miR-30b后结果相反。   结论   miR-30b在结直肠癌中表达水平下降,并通过靶向Snail调节结直肠癌细胞的侵袭和迁移。      

miRNA-20a在膀胱癌中的表达及其机制研究

  目的  探讨miRNA-20a在膀胱癌组织中的表达及其机制。  方法  收集2014年1月至2015年1月昆明医科大学第二附属医院96例患者的组织标本,运用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）方法检测miRNA-20a在膀胱癌组织和癌旁组织中的表达;生物信息学方法预测miRNA-20a的靶基因并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证;qRT-PCR、Western blot以及细胞免疫荧光分别检测人膀胱癌细胞系T24和J82细胞转染miRNA-20a模拟物或阴性对照后对靶基因mRNA和蛋白表达的影响;CCK-8、Transwell侵袭小室和划痕实验检测过表达miRNA-20a后T24细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的改变。  结果  miRNA-20a在膀胱癌组织中高表达,且与肿瘤的病理分级、临床分期、转移以及复发密切相关（P＜0.001）;双荧光素酶报告基因实验证实miRNA-20a与人源性长寿保障基因2（Homo sapiens longevity assurance homologue 2,LASS2）的3'-UTR直接靶向结合;转染miRNA-20a模拟物可显著下调膀胱癌细胞中LASS2 mRNA和蛋白的表达（P＜0.01）,增强膀胱癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力（P＜0.01）。  结论  miRNA-20a在膀胱癌组织中高表达,且miRNA-20a可通过靶向抑制LASS2促进膀胱癌细胞的增殖、侵袭和迁移,与膀胱癌的发生发展相关。      

miR-623在膀胱癌中的表达及靶向Fascin1抑制膀胱癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-623在膀胱癌中的表达及通过靶向Fascin1对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR检测正常膀胱上皮组织、膀胱癌组织、正常永生化膀胱上皮细胞系(SV-HUC-1)和膀胱癌细胞系（T24、UMUC3）中miR-623的表达量;采用脂质体瞬时转染miR-623 mimics,划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-623过表达后膀胱癌细胞迁移、侵袭能力的改变;生物信息学预测miR-623的作用靶蛋白。miR-623过表达后Western blot及双荧光素酶报告基因检测其靶点的表达及结合情况;使用Fascin1特异性siRNA观察膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的变化,并同时转染miR-623 inhibitor进行恢复实验。结果:miR-623在膀胱癌中的表达水平显著低于在正常膀胱组织中的表达（P＜0.05）,在膀胱癌细胞系（T24、UMUC3）中的表达水平显著低于正常膀胱细胞系(SV-HUC-1)（P＜0.05）;miR-623过表达显著抑制T24和UMUC3细胞的迁移和侵袭能力。生物信息学预测Fascin1为miR-623的靶基因,在T24和UMUC3细胞中过表达miR-623,能够显著降低Fascin1的蛋白水平;荧光素酶报告基因分析结果证实miR-623作用于Fascin1的3'-UTR。下调Fascin1表达能够抑制膀胱癌T24和UMUC3细胞的迁移和侵袭能力,同时抑制miR-623的表达能够提高细胞的迁移和侵袭能力。结论:miR-623在膀胱癌中表达水平降低,是一个抑癌因子;并可能通过靶向Fascin1调节膀胱癌的侵袭和转移能力。     

miR-21调控程序性细胞死亡4基因的表达对宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨miR-21调控程序性细胞死亡4基因的表达对宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其 机制。方法:qPCR检测miR-21和PDCD4在宫颈癌组织中的表达情况；双荧光素酶实验检测miR-21和PDCD4之间的调控作用；细胞集落实验检测抑制miR-21对宫颈癌细胞增殖能力的影响情况，Transwell侵袭实验检测对宫颈癌细胞侵袭能力的影响情况。结果:与癌旁正常组织相比，miR-21在宫颈癌组织中的表达上调，PDCD4在宫颈癌组织中表达下调；双荧光素酶实验检测miR-21和PDCD4之间的调控关系，miR-21可直接调控PDCD4蛋白的表达及活性情况；抑制miR-21的表达后可以抑制宫颈癌细胞的增殖能力；抑制miR-21的表达水平后，宫颈癌细胞的侵袭能力得到一定程度的抑制。结论:miR-21可以调控PDCD4的表达影响宫颈癌细胞的增殖和侵袭能力。     

miR-1246通过靶向GSK3β促进食管癌转移的机制

目的:探讨miRNA-1246(miR-1246)促进食管癌细胞转移的作用及其机制.方法:Realtime-PCR法检测miR-1246在癌旁组织、食管癌组织、正常食管上皮和食管癌细胞系中的表达差异.Transwell侵袭实验观察转染miR-1246 mimics或inhibitors对食管癌细胞EC109转移能力的影响;裸鼠尾静脉转移实验观察稳定表达miR-1246对食管癌转移能力的影响;生物信息学分析miR-1246的候选靶基因为GSK3β,荧光素酶报告基因实验检测过表达miR-1246后EC109细胞中野生型和突变型GSK3β的荧光素酶活性.Westernblot检测miR-1246对GSK3β蛋白表达的影响.结果:食管癌组织中的miR-1246表达显著高于癌旁组织（P<0.05);多个食管癌细胞中miR-1246的表达比正常食管上皮细胞Het-1A明显增高（P<0.05).与阴性对照相比,miR-1246 mimics显著促进EC109细胞的侵袭能力（P<0.05).反之,miR-1246 inhibitors明显抑制EC109细胞的侵袭能力（P<0.05);体内实验发现稳定过表达miR-1246明显升高EC109细胞的肺转移能力.荧光素酶报告基因结果证实miR-1246能够抑制GSK3β的3'-UTR区荧光素酶活性;转染miR-1246后,EC109细胞中的GSK3β蛋白水平明显低于对照组;miR-1246过表达显著抑制GSK3β-wt,而不能抑制GSK3β-mut的蛋白表达.结论:miR-1246能够通过靶向GSK3β促进食管癌转移,抑制miR-1246的表达或增加GSK3β的表达可能是抑制食管癌转移的有效手段.     

miR-944靶向调控 S100PBP基因促进宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制探讨

目的:探讨微小RNA-944（microRNA-944,miR-944）对宫颈癌细胞迁移和侵袭的影响,并对其作用机制进行初步研究。方法:收集90例宫颈癌组织和40例正常宫颈组织,采用实时定量荧光PCR（Real-time PCR）试验检测宫颈组织样本和宫颈癌细胞中miR-944表达水平;在CaSki和HeLa细胞中,采用脂质体转染技术,抑制或者增加miR-944表达后,利用细胞增殖试验、细胞划痕试验和细胞侵袭试验分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化情况;采用双荧光素酶报告基因试验检测miR-944对S100PBP基因的调控作用。结果:在宫颈癌组织中,miR-944表达水平显著高于正常宫颈组织（P<0.05）;miR-944在不同宫颈癌细胞中的表达水平,存在显著差异（P<0.05）。在CaSki细胞中,降低miR-944表达显著抑制了细胞迁移和侵袭能力（P均<0.05）;在HeLa细胞中,增加miR-944表达显著增强了细胞迁移和侵袭能力（P均<0.05）;miR-944表达对宫颈癌细胞增殖无影响（P>0.05）。抑制miR-944表达能够显著增强含有S100PBP基因3'-非翻译区（3'-UTR）的报告质粒的荧光素酶活性（P<0.05）,增加miR-944表达能够显著降低含有S100PBP基因3'-UTR的报告质粒的荧光素酶活性（P<0.05）。结论:在宫颈癌组织中,miR-944呈高表达状态;miR-944能够促进宫颈癌细胞的迁移和侵袭;miR-944可靶向调节S100PBP基因表达,这可能是miR-944促进宫颈癌细胞迁移和侵袭的内在机制。     

miR-137 通过靶向Wnt5a 调控宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭

[摘要] 目的: 探讨miR-137 在宫颈癌组织和细胞中的表达及其对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用及其机制。方法: 选用2017 年1 月至2018 年3 月东莞市人民医院妇产科32 例手术切除的宫颈癌组织及对应的癌旁组织标本,以及宫颈癌细胞系C33A、HeLa、SiHa 及宫颈上皮永生化细胞株H8,用RT-PCR 法检测宫颈癌组织和细胞系中miR-137 的表达水平。将miR-137mimics、miR-137 NC质粒转染到C33A和HeLa 细胞,用CCK-8 法、Transwell 迁移及侵袭实验观察上调miR-137 表达对C33A和HeLa 细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。用荧光素酶报告基因及WB实验检测miR-137 和Wnt5a 在宫颈癌中的靶向调控关系。构建Wnt5a 过表达载体,观察同时过表达Wnt5a 和miR-137 对宫颈癌细胞系C33A和HeLa增殖、迁移和侵袭的影响。结果: 在宫颈癌组织和细胞系中miR-137 表达水平明显低于癌旁组织和H8 细胞（均P<0.05）。上调miR-137 表达能够显著抑制C33A和HeLa 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.05）。萤光素酶报告基因实验确定Wnt5a 与miR-137 的靶向关系。过表达Wnt5a 后,可以在一定程度上逆转miR-137 对宫颈癌细胞系C33A和HeLa 的增殖、迁移和侵袭能力。结论: miR-137 通过靶向Wnt5a 抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭,其可能是宫颈癌治疗的潜在靶点。     

miR-218-5p靶向下调LPAR3抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-218-5p通过调控LPAR3表达对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测人正常宫颈细胞H8和4种宫颈癌细胞（SiHa、HeLa、MS751和HT-3）中miR-218-5p和LPAR3的表达。以HeLa细胞为后续研究对象，分别构建过表达miR-218-5p和敲减LPAR3的HeLa细胞株，CCK-8法检测细胞存活情况，Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力，Western blot检测细胞增殖相关蛋白CyclinD1、迁移侵袭相关蛋白MMP2和MMP9的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-218-5p和LPAR3的靶向调控关系。结果:与人正常宫颈细胞H8相比，4种宫颈癌细胞miR-218-5p的表达显著下调，LPAR3的表达显著上调。过表达miR-218-5p或敲减LPAR3均可抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力，抑制CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白的表达。LPAR3是miR-218-5p的靶基因，miR-218-5p可负性调控LPAR3的表达。过表达LPAR3可逆转miR-218-5p对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论:miR-218-5p通过靶向下调LPAR3表达抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭，miR-218-5p/LPAR3分子轴有望成为宫颈癌的潜在治疗靶点。     

宫颈癌组织中miRNA-34c 的表达水平分析及其靶基因PLK4 的鉴定

目的:分析miRNA-34c 在宫颈癌组织中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法:利用荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测甘肃省妇幼保健医院34例宫颈癌和癌旁正常组织中miRNA-34c 表达水平。利用miRNA 靶基因预测数据库预测miRNA-34c 新的靶基因Polo 样激酶4（PLK 4）。 将含有PLK 4 的3‘UTR 片段荧光素酶载体分别与miRNA-34c 模拟物或阴性对照共转染HEK 293T 细胞,并检测其荧光素酶活性。在人宫颈癌细胞SiHa 细胞中分别转染miRNA-34c 模拟物或阴性对照,利用qRT-PCR法和Westernblot法分别检测靶基因的mRNA 和蛋白质的表达水平。结果:与癌旁正常组织相比,miRNA-34c 在宫颈癌组织中表达下调。在HEK 293T 细胞中,miRNA-34c 模拟物显著抑制荧光素酶的活性（P < 0.01）。 miRNA-34c 模拟物显著下调SiHa 细胞中PLK 4 的mRNA 和蛋白质的表达（P < 0.01）。 结论:miRNA-34c 在人宫颈癌组织中表达下调,且能与PLK 4 的3’UTR 结合并下调其mRNA 和蛋白质的表达。      

miR-148a 靶向HMGB3抑制非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭和增强顺铂抗肿瘤效应的机制研究

目的:探讨miR-148a靶向HMGB3抑制非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭的作用机制。方法:采用RT-qPCR和Western blot检测非小细胞肺癌组织和癌旁组织标本中miR-148a和HMGB3相对表达水平;以A549、H1299细胞为研究对象,Transwell和MTT法分别检测过表达miR-148a、敲低HMGB3和DDP干预对细胞迁移、侵袭及细胞活力的影响;TargetScan在线预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-148a与HMGB3的靶向关系;miR-148a过表达或敲减HMGB3并联合DDP,Transwell和MTT法检测细胞迁移、侵袭和细胞活力。结果:非小细胞癌组织中miRNA-148a表达明显下调（P<0.05）,HMGB3在mRNA和蛋白水平表达均明显上调（P<0.05）,miR-148a与HMGB3表达呈负相关（r=-0.856 8,P<0.000 1）;过表达miR-148a或敲低HMGB3能明显抑制细胞迁移和侵袭（P<0.05）,过表达miR-148a或敲低HMGB3联合DDP干预,细胞活力明显下降（P<0.05）;TargetScan在线预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot检测表明miR-148a能调控HMGB3表达。结论:miR-148a在非小细胞肺癌组织中表达下调,HMGB3是miR-148a的靶基因,过表达miR-148a能抑制HMGB3表达从而抑制非小细胞肺癌细胞A549、H1299迁移和侵袭并增强顺铂抗肿瘤效应。     

miR-138-5p通过靶向TCF3实现对胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移的调控

目的:探讨miR-138-5p 与T细胞因子3 基因（T cell factor 3, TCF3）的靶向关系及其对人胃癌细胞SGC-7901 侵袭和迁移能力的影响。方法：miR-138-5p 模拟物转染SGC-7901 细胞后,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-138-5p 和TCF3 mRNA的相对表达;生物信息学方法预测miR-138-5p 与TCF3 基因的靶向匹配关系,采用荧光素酶报告基因系统鉴定该关系。miR-138-5p 转染正常胃癌细胞和TCF3 高表达胃癌细胞后,Western blotting 检测TCF3、神经钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指转录因子（Slug）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达,Transwell 小室检测胃癌细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果：miR-138-5p 过表达抑制TCF3 mRNA的表达;生物信息学软件预测显示miR-138-5p 与TCF3 mRNA有靶向结合区域,miR-138-5p mimic 降低TCF3 野生型质粒的荧光素酶活性,不影响TCF3 突变型质粒的荧光素酶活性。miR-138-5p 抑制TCF3 蛋白表达,miR-138-5p 减弱TCF3 过表达对SGC-7901 细胞侵袭和迁移能力的促进作用,同时其下调N-cadherin、Vimentin 和Slug 蛋白表达、上调E-cadherin 蛋白表达。结论：miR-138-5p 抑制胃癌细胞SGC-7901 的侵袭和迁移,与直接靶向调控TCF3 的表达有关。     

miRNA-15a通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌的发展和转移

目的 :研究在卵巢癌发展转移进程中miRNA-15a的作用, 并探讨其作用机制。 方法 :收集锦州医科大学附属第一医院2012年5月至2015年6月32例卵巢癌患者的手术切除标本, 采用RT-PCR检测miRNA-15a表达。将培养的卵巢癌SKOV-3细胞分为转染miRNA-15a模拟物的实验组和转染无义miRNA的对照组, 采用CCK8、Transwell及流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡的变化, 采用Western blot法检测相关蛋白表达。通过生物信息学方法预测miRNA-15a靶基因, 采用双荧光素酶报告基因实验结合Western blot法验证miRNA-15a对靶基因的调控。检测Wnt3a与miRNA-15a模拟物共转染SKOV-3细胞后对细胞增殖和侵袭的影响。 结果 :与癌旁组织中的miRNA-15a相对表达量0.692±0.228相比, 显著低于卵巢癌组织中的0.911±0.209, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。与对照组细胞增殖能力相比, miRNA-15a过表达显著抑制实验组细胞增殖能力, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。与对照组189.667±14.742相比, miRNA-15a过表达显著抑制实验组的细胞侵袭能力96.667±13.614, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。miRNA-15a过表达实验组的细胞凋亡率27.400%±0.854%显著高于对照组细胞凋亡率6.933%±0.379%, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。miRNA-15a模拟物下调Wnt3a和β-catenin的表达, 抑制细胞周期蛋白(Cyclin D1)和血管内皮生长因子(vascu-lar endothelial growth factor, VEGF)的表达, 促进E-钙离子依赖的细胞黏附素(E-calcium-dependent adhesion, E-cad)的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果表明miRNA-15a靶向抑制Wnt3a表达。上调Wnt3a能显著降低miRNA-15a对卵巢癌细胞增殖、侵袭和对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用。结论:miRNA-15a通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-catenin信号通路的激活以抑制卵巢癌的发展和转移。      

miR-21靶向抑制RECK对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和放射敏感性作用

目的:探究miR-21对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡、侵袭以及放射敏感性的影响和潜在作用机制。方法:利用RT-qPCR方法检测宫颈癌组织和相邻非肿瘤组织、正常宫颈上皮细胞(H8)以及宫颈癌细胞系(HeLa、SiHa、ME180)中miR-21表达水平。通过CCK-8检测、Caspase3/7活细胞凋亡检测、伤口愈合试验...     

miRNA-409-3p表达水平对宫颈癌细胞增殖及顺铂化疗敏感性的影响

目的 探讨微小RNA-409-3p(miRNA-409-3p)表达水平对宫颈癌细胞增殖及顺铂化疗敏感性的影响。方法 将HeLa细胞分为正常对照组、NC对照组和miRNA-409-3p mimic组,RT-PCR法检测不同宫颈组织及转染miRNA-409-3p mimic后各组细胞中miRNA-409-3p mRNA的表达,CCK-8法检测细胞增殖率,Western blot法检测Fip200、LC3、Caspase-3蛋白的表达。结果 宫颈癌组织中miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平显著低于正常宫颈组织和癌旁组织(P＜0.05);通过转染miRNA-409-3p mimic后,miRNA-409-3p mimic组miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平较正常对照组显著上调(P＜0.05),NC对照组miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平较正常对照组无统计学差异(P＞0.05)。miRNA-409-3p mimic组HeLa细胞增殖率较正常对照组和NC对照组显著降低(P＜0.05)。给予顺铂干预后,miRNA-409-3p mimic组细胞增殖显著被抑制(P＜0.05);同时,miRNA-409-3p mimic组细胞中Fip200蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著低于正常对照组和NC对照组(P＜0.05)。结论 miRNA-409-3p在宫颈癌组织中低表达,可能与宫颈癌的发生发展有关,上调miRNA-409-3p水平可以抑制HeLa细胞增殖,增加HeLa细胞对顺铂的敏感性。