法医毒物分析实验教学多元化模式改革

法医毒物分析是法医学专业的主干课程之一,实践性强,应注重培养学生敏锐观察能力、实践探索能力及综合运用能力。在法医毒物分析实验教学中,引入仿真的案件现场、开放的实验平台和实验教具,营造一个立体化法医毒物分析实验教学模式,从而加深学生对毒物的认识,激发学生对案件的思考,完成理论知识到实践的转化。     

顶空气相色谱和气相色谱-质谱联用法检测血液中的二氯甲烷

  目的  建立血液中二氯甲烷的气相色谱-质谱（GC-MS）定性检测和顶空气相色谱（HS-GC）定量检测方法,为二氯甲烷中毒或致死案件的法医学鉴定和分析提供可靠依据。   方法  取0.5 mL血液,以氯仿为内标,加入到顶空瓶,经65 ℃加热后抽取瓶中气体用GC-MS进行定性方法学验证,用HS-GC进行定量方法学验证,并将该方法应用于案件鉴定。   结果  GC-MS定性验证:空白血液中无干扰,添加血样中二氯甲烷色谱峰特异且峰型良好,质谱特征碎片离子特异;方法检出限（LOD）为5 μg/mL。HS-GC定量验证:二氯甲烷与乙醇等常见挥发性化合物色谱峰分离良好,分离度均>1.5;方法定量限（LOQ）为20 μg/mL,在20～1000 μg/mL范围内线性关系良好,R>0.999;日内/日间精密度良好（RSD均<15%）,准确度高（相对误差δ<15%）。2例二氯甲烷致死案件死者血液中均检出二氯甲烷,质量浓度分别为470 μg/mL、915 μg/mL。   结论  该方法快速、稳定且结果可靠,可用于疑似二氯甲烷中毒或致死案件血液中二氯甲烷的法医毒物学定性定量分析。     

一个新荧光标记复合扩增体系的建立及其法医学应用

目的建立扩增片段小于250bp的STR基因座D11S4951、D7S3062、GATA168F06、D10S1426的荧光标记复合扩增体系并进行法医学实用性研究。方法利用荧光标记引物和传统的复合扩增方法,建立一个新的、使用ABI-310毛细管电泳仪进行荧光标记复合PCR扩增的复合扩增体系,对该体系的灵敏度和准确度、基因座的种属特异性,组织同一性及可重复性进行研究,并使用该系统对西南地区人群进行遗传学特征调查。结果成功建立了由D11S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426四个STR基因座组成的荧光标记复合扩增体系。本体系条件易于优化,成本低廉,效率较高,法医学应用性好。结论可以应用于个人识别和亲子鉴定,成为中国地区法医物证实践的良好补充。     

用荧光标记短串连重复复合扩增技术监测骨髓移植存活

目的探讨荧光标记短串联重复(STR)复合扩增技术监测骨髓移植存活的价值,为观测骨髓移植疗效提供可靠方法。方法用荧光标记引物对D12S391、D18S865、D20S161这3个STR位点进行PCR复合扩增,用ABI310遗传分析仪对扩增后产物进行分离和分型,并对56例移植后病人做移植物存活鉴定检测。结果有52例移植后病人的3个STR位点的分型完全表现供者源性,与受者移植前不同;4例表现为供/受体干细胞混合嵌合状态。结论荧光标记STR复合扩增体系特异性强,成本低,个体识别力高,检测灵敏、快速、简便,结合临床判断可作为骨髓移植效果评定的有力指标。     

HPLC-MS/MS分析盐酸头孢替安酯中未知杂质的结构

目的 采用高效液相色谱-串联质谱联用(HPLC-MS/MS)对盐酸头孢替安酯原料药中的杂质进行结构解析。 方法 盐酸头孢替安酯原料药经去离子水溶解,采用HPLC-MS/MS技术进行分析。色谱柱为Agilent SB-C₁₈柱(150 mm×2.1 mm,3.5 μm),流动相为0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B)(97:3),梯度洗脱,洗脱程序为[t(min)/B (%)]:0/3、5/3、15/20、20/40、30/60、40/80,流速0.3 mL/min,检测波长254 nm,柱温40℃;离子源为电喷雾离子源(ESI),正离子MRM模式扫描,电离电压4 kV,锥孔电压100 V,质量扫描范围(m/z)为50~1000,雾化气为氮气,雾化气压力40 psi,干燥气温度350℃,干燥气流速10 L/min。 结果 通过对盐酸头孢替安酯和有关物质的液相色谱图以及液相色谱峰对应的质谱图分析归纳,推测盐酸头孢替安酯样品中有关物质1为Δ3-异构体,并解析了有关物质2中的3个杂质的结构。 结论 本法可灵敏、快速、准确地分离鉴定盐酸头孢替安酯中的有关物质,对盐酸头孢替安酯的质量控制有指导意义。     

5-羟色胺受体基因多态性与海洛因依赖的关系

目的獉獉:探讨5-HT1A受体基因(5-HTR1A)-1019C/G、5-HT1B受体基因(5-HTR1B)-681G/C、5-HT6受体基因(5-HTR6)-267C/T的多态性与海洛因依赖易感性的关系。方法獉獉:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测70例海洛因依赖者(轻度依赖者、重度依赖者)和108例健康对照者的3个基因位点的基因型。结果獉獉:海洛因轻度依赖组和重度依赖组、依赖组和对照组之间3个位点的基因型和等位基因频率均无显著性差异。结论獉獉:没有证据表明5-HTR1A-1019C/G、5-HTR1B-681G/C和5-HTR6-267C/T的多态性与海洛因依赖易感性有关。     

LC-MS/MS检测小鼠脑组织中视黄酸

目的建立小鼠脑组织中视黄酸的LC-MS/MS分析方法。方法通过电喷雾离子化,采用多反应检测方式进行正离子检测,用于定量分析的检测离子为301.1→123.1。采用Agilent SB-C18(100 mm×2.1 mm,1.8μm)柱分离,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱进行分析。结果视黄酸与其他成分分离良好。在0.92~9.20 ng/g(R2=0.993 7)范围内线性关系良好;平均加样回收率分别为93.5%、96.7%、103.1%,RSD分别为8.7%、6.5%、5.9%(n=3);检测限为0.2 ng/g。结论视黄酸检出时间在10 min内,且脑组织中内源性物质无干扰,方法快速、准确、专属性好,适于脑组织中视黄酸检测。