HPLC同时测定生物样品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量

 目的建立同时测定血液、肝组织中新乌头碱(mesaconitine)、乌头碱(aconitine)、次乌头碱(hypaconitine)含量的HPLC分析方法。方法采用Welchrom C₁₈柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-0.03%四丁基氢氧化铵(用冰醋酸调至pH9.74)(58∶42)为流动相,流速为1.0mL·min^-1,检测波长为230nm。结果生物样品中新乌头碱在0.077～23mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9998),乌头碱在0.083～25mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9998),次乌头碱在0.08～24mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9996)。生物样品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的回收率不低于83.6%。生物样品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的日内精密度和日间精密度分别在5.1%和9.3%以内。结论本方法简便、灵敏、准确,适用于血液、肝组织中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的分析。     

氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮在大鼠体液及组织中的检测及分布

目的:建立生物检材中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的检测方法,考察氯胺酮和去甲氯胺酮在大鼠体内的分布。方法:用高效液相色谱法(HPLC)检测生物检材中的氯胺酮及去甲氯胺酮;以10 mg·kg-1剂量给大鼠灌胃(ig),分别于给药后10 min,45 min,2 h和8 h处死,测定体液和组织中氯胺酮及去甲氯胺酮的含量。结果:建立起生物检材中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的HPLC法。所建方法在0.05-25.0μg.g-1浓度范围内线性关系良好,r2=0.999,萃取回收率大于75%;肝和肾中氯胺酮和去甲氯胺酮含量最高,其次为:脾、尿液、肺、脑、血液、心和肌肉。结论:所建方法准确、灵敏,适用于组织中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的分析鉴定;肝和肾可作为毒物分析的组织检材。     

高效液相色谱法检测生物样品中五氯酚

目的　建立生物检材中五氯酚的高效液相色谱检测方法。方法　将鱼内脏组织匀浆 ,用有机溶剂萃取后 ,采用高效液相色谱仪检测。对高效液相色谱条件进行反复筛选 ,同时以空白添加实验考察回收率、线性范围、检测限。结果　建立了以乙醚为提取溶剂处理样品 ,采用 Hypersil ODS柱 (4 .6 m m i.d.× 15 0 m m,5μm) ,甲醇∶2 g/ L醋酸铵水溶液 (80∶ 2 0 )为流动相的高效液相色谱分析方法。30 5 nm进行检测 ,同时收集全光谱信息。按上述方法分析生物检材中的五氯酚 ,方法平均回收率为 76 % ,检测线性范围为 0 .0 4 2μg/ g～ 1.344μg/ g,相关性良好 (r=0 .9994 ) ,检测限为 0 .0 14μg/ g。运用该方法成功地从中毒鱼体中检出五氯酚。结论　所建立方法能便捷、准确地检测生物检材中五氯酚 ,为法医学中毒鉴定提供了新方法。     

冠状动脉粥样硬化性心脏病患者脂蛋白酯酶基因的单核苷酸多态性的初步研究

目的　探讨脂蛋白酯酶基因 (lipoprotein lipase,L PL)单核苷酸多态性 (single nucleotidepolymorphisms,SNP)与冠状动脉粥样硬化性心脏病 (简称冠心病 )的关系。方法　利用聚合酶链反应扩增110名健康人和 10 2例冠心病患者 L PL 基因第 6外显子和第 6内含子的片段 ,采用温度调控高效液相色谱技术对扩增的片段进行了筛查 ,对筛查到的杂合片段进行序列测定 ,并与正常序列进行对照分析。结果　在L PL 基因第 6内含子中发现了 3个尚未报道的 SNP(42 12 t/ c、45 0 9t/ c、45 76 a/ c)。它们的频率在被检测的冠心病患者和健康人群中存在差异 ,其中 42 12 t/ c、45 76 a/ c两组间差异显著 (P<0 .0 5 )。结论　补充了 L PL基因 SNPs的数据库信息。L PL基因 SNPs的研究可能对冠心病等复杂疾病机理的认识有重要价值     

三七皂苷R1、人参皂苷Rd对微循环及凝血作用的影响

目的研究三七皂苷R1(R1)和人参皂苷Rd(Rd)的活血化瘀作用,以证实二者为三七中的有效成分.方法显微电视放大系统定量观测R1和Rd对正常及去甲肾上腺素(NA)所致耳廓微循环障碍小鼠耳廓微循环的影响;血浆复钙试验测定R1和Rd的抗凝作用. 结果 R1和Rd能显著促进或改善正常及NA所致耳廓微循环障碍小鼠耳廓的微循环;亦可延长血浆复钙时间.结论 R1和Rd均能显著改善微循环并适度延长凝血时间,为三七中有效成分.     

用温度调控高效液相色谱探索基因组单核苷酸多态性的方法研究

目的　优化并评估一种新的探索基因组单核苷酸多态 (single nucleotide polymorphism,SNP)的温度调控高效液相色谱技术。方法　从洗脱方式、洗脱温度、检测器流通池规格、适应片段大小、检测灵敏度等方面 ,探讨适合探索基因组 SNP的温度调控高效液相色谱技术参数及实用价值。结果　找到在普通高效液相色谱仪上检测 SNP的具有普遍意义的色谱条件。 d NTP、PCR引物峰与被检测 PCR产物峰完全分离 ,纯合子和杂合子样本能有效区分。建立起在普通高效液相色谱仪上进行快速筛选突变型DNA的温度调控高效液相色谱法。结论　温度调控高效液相色谱法是一种高效、灵敏、操作简便、对较大片段具有普遍适用意义的探索基因组 SNP方法     

HPLC-MS/MS分析盐酸头孢替安酯中未知杂质的结构

目的 采用高效液相色谱-串联质谱联用(HPLC-MS/MS)对盐酸头孢替安酯原料药中的杂质进行结构解析。 方法 盐酸头孢替安酯原料药经去离子水溶解,采用HPLC-MS/MS技术进行分析。色谱柱为Agilent SB-C₁₈柱(150 mm×2.1 mm,3.5 μm),流动相为0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B)(97:3),梯度洗脱,洗脱程序为[t(min)/B (%)]:0/3、5/3、15/20、20/40、30/60、40/80,流速0.3 mL/min,检测波长254 nm,柱温40℃;离子源为电喷雾离子源(ESI),正离子MRM模式扫描,电离电压4 kV,锥孔电压100 V,质量扫描范围(m/z)为50~1000,雾化气为氮气,雾化气压力40 psi,干燥气温度350℃,干燥气流速10 L/min。 结果 通过对盐酸头孢替安酯和有关物质的液相色谱图以及液相色谱峰对应的质谱图分析归纳,推测盐酸头孢替安酯样品中有关物质1为Δ3-异构体,并解析了有关物质2中的3个杂质的结构。 结论 本法可灵敏、快速、准确地分离鉴定盐酸头孢替安酯中的有关物质,对盐酸头孢替安酯的质量控制有指导意义。     

HPLC同时测定血液与尿液中的泼尼松和泼尼松龙

目的 建立同时检测血、尿中泼尼松与泼尼松龙的方法.方法 采用HPLC法,乙酸乙酯为样品萃取剂,以倍他米松作为内标,色谱柱为Zorbax SB-Aq柱,流动相为甲醇-0.01 mol·L-1KH2PO4(57:43).结果 泼尼松、泼尼松龙在血和尿中的线性范围分别为0.05～40.00 μg·ml-1(r≥0.9997)和0.04～50.00 μg·ml-1(r≥0.9991);两者在血和尿中的检测限分别为0.012、0.008 μg·ml-1,平均方法回收率为92.9%～106.3%,日内、日间精密度≤7.8%,萃取回收率≥85.4%.结论 所建方法准确、灵敏、重复性好,可同时测定血、尿中的泼尼松与泼尼松龙.     

热休克蛋白90抑制剂对TNFα诱导肿瘤细胞凋亡和调控NF-κB信号通路的影响

目的探讨热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)抑制剂17-di methylamino-ethylaminogeldanamycin(17DMAG)对肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的肿瘤细胞凋亡的影响及其作用机理。方法采用乳酸脱氢酶释放实验检测不同剂量的17DMAG与TNFα共培养对子宫颈癌细胞株HeLa和卵巢癌细胞株SKOV3的细胞毒作用,吖啶橙/溴化乙锭双重染色后荧光显微镜下观察17DMAG和TNFα共同处理所导致的细胞形态学改变,并采用Western blot检测细胞凋亡相关分子半胱天冬酶-8(caspase-8)、半胱天冬酶-3(caspase-3)、多聚(ADP-核糖)聚合酶〔poly(ADP-ribose)polymerase,PARP〕和TNFα诱导的核因子-κB(NF-κB)信号通路信号分子receptor-interaction protein(RIP)、IκB kinaseβ(IKKβ)、inhibitor of IκB(IκBα)的变化。结果 17DMAG可增强TNFα对HeLa细胞和SKOV3细胞的杀伤作用,17DMAG可抑制TNFα诱导的NF-κB信...     

RP-HPLC测定人血液和尿液中的倍他米松

目的 采用HPLC法测定人血液和尿液中的倍他米松.方法 以乙酸乙酯为萃取剂、泼尼松为内标.用Welchrom C18 柱,甲醇-水(60:40)为流动相,检测波长240 nm.结果 倍他米松在血液和尿液中的线性范围为0.1～20μg·mL-1(r2>0.999);检测限均为0.02μg·mL-1;平均方法回收率为91%...