基于FXR探讨茵栀黄注射液利胆退黄的机制研究

目的:通过研究茵栀黄注射液对肝内胆汁淤积湿热证大鼠FXR、BSEP、NTCP蛋白和基因表达的影响,探讨茵栀黄注射液的作用靶点及机制。方法:51只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(7只)、模型组(7只)、茵栀黄注射液组(7只)、GW4064组(7只)、Guggulsterone组(7只)、茵栀黄+GW4064组(8只)、茵栀黄+Guggulsterone组(8只)共7组。造模干预后观察各组大鼠肝组织FXR、BSEP、NTCP蛋白和基因的表达。结果:茵栀黄注射液可以上调FXR蛋白和基因的表达,P0.05。FXR和BSEP在蛋白和基因表达量上存在显著相关,P0.05。结论:茵栀黄注射液通过干预FXR上调BSEP利胆退黄治疗肝内胆汁淤积。     

茵陈对肝内胆汁淤积湿热证大鼠利胆退黄作用机制的研究

目的通过研究茵陈对肝内胆汁淤积湿热证大鼠肝组织中胆盐输出泵(BSEP)基因表达的影响,从分子水平探讨茵陈利胆退黄的作用机制。方法 45只雄性SD大鼠随机分为3组:正常组、模型对照组和茵陈组。检测治疗后大鼠血清生化指标、肝脏组织病理的变化和肝脏BSEP的表达。结果治疗后茵陈组大鼠体质量增加明显高于模型对照组(P<0.05)。茵陈组大鼠血清TB、DB、ALT、AST、ALP、TBA浓度低于模型对照组(P<0.05);HE染色显示茵陈组大鼠肝脏的病理损害轻于模型对照组。免疫组织化学染色显示茵陈组大鼠比模型对照组有更多的BSEP阳性细胞。荧光定量RT-PCR法显示模型对照组大鼠肝组织中BSEP mRNA表达明显低于茵陈组(P<0.05)。结论茵陈能有效改善肝内胆汁淤积湿热证大鼠的肝功能、减轻病理损害,并能上调肝脏BSEP的表达。     

青藤碱通过免疫调节防护刀豆蛋白A诱导的大鼠急性免疫性肝损伤

【目的】探讨青藤碱对刀豆蛋白A(Con A)诱导的大鼠急性免疫性肝损伤的防护效果及可能机制。【方法】将49只雌性Wistar大鼠随机分为7组,即正常组,模型组,青藤碱60、90、120、150 mg/kg组,地塞米松磷酸钠(Dex)组,每组7只。除正常组外,其余各组均尾静脉注射16 mg/kg Con A建立肝损伤模型。Dex组、青藤碱不同剂量组分别于Con A注射前1 h给药1次,青藤碱各组在Con A注射3 h后另再给药1次。Con A注射8 h后,腹主动脉取血,摘取肝脏组织。采用全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)水平;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素10(IL-10)水平;采用苏木素—伊红(HE)染色观察肝组织病理改变。【结果】与正常组比较,模型组大鼠肝脾指数及ALT、AST、IL-2、IL-10水平均明显升高,ALB水平降低,差异均有统计学意义(P0.05),表明造模成功;与模型组比较,Dex组、青藤碱不同剂量组肝指数,ALT、AST、IL-2水平均明显降低,ALB、IL-10水平升高,差异有统计学意义(P0.05),且组织病理结果显示肝细胞坏死及炎细胞浸润程度明显减轻;与Dex组比较,青藤碱120 mg/kg组肝指数,ALT、AST、IL-2水平均明显降低,ALB、IL-10水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。【结论】青藤碱对Con A诱导大鼠急性免疫性肝损伤具有防治作用,抑制部分T淋巴细胞活化,调节IL-2、IL-10的分泌可能是其作用机制之一。     

利胆化瘀汤联合熊去氧胆酸治疗原发性胆汁性肝硬化临床疗效观察

目的:观察利胆化瘀汤联合熊去氧胆酸治疗原发性胆汁性肝硬化患者的临床疗效。方法:将60例原发性胆汁性肝硬化患者随机分为2组,每组30例。对照组口服熊去氧胆酸(UDCA),治疗组在对照组的基础上加服利胆化瘀方,比较两组患者治疗前后淤胆、免疫指标的变化。结果:两组患者治疗后4周TBI、GGT、ALP较治疗前下降(P0.05),但两组间比较无明显差异(P0.05);两组患者治疗后12周TBI、GGT、ALP较治疗前明显下降(P0.05),且治疗组疗效优于对照组(P0.05)。两组患者治疗后4周IgG、IgM较治疗前未见明显下降(P0.05),但治疗后12周IgG、IgM较治疗前下降(P0.05),且治疗组比对照组更明显(P0.05)。结论:利胆化瘀汤联合UDCA可明显改善原发性胆汁性肝硬化患者淤胆指标,疗效优于单用UDCA,可能与其调节免疫有关。     

半夏厚朴汤合乌贝散治疗良性食管溃疡62例

目的:探讨半夏厚朴汤合乌贝散联合雷贝拉唑治疗良性食管溃疡的疗效。方法:选取62例良性食管溃疡患者,随机分为对照(西医)组和治疗(中西医结合)组。对照组采用雷贝拉唑钠肠溶胶囊治疗,治疗组(中西药结合)采用雷贝拉唑钠肠溶胶囊加半夏厚朴汤合乌贝散(半夏、厚朴、紫苏、茯苓、生姜、乌贼骨、浙贝母,气滞血瘀型加泽兰、香附,肝胃郁热型加黄连、黄芩、山栀子,脾胃虚弱型加白术、砂仁)治疗,并观察两组患者疗效情况。结果:治疗组治愈25例,治愈率78.13%;总有效率93.75%;对照组治愈19例,治愈率63.33%;总有效率73.33%;治疗组明显优于对照组,差异有显著性意义P<0.05。结论:半夏厚朴汤合乌贝散治疗联合西医治疗良性食管溃疡较单独西医治疗疗效更好。     

茵栀黄注射液基于FXR调控MDR3治疗肝内胆汁淤积的作用机制

目的:通过研究茵栀黄注射液(Yinzhihuang injection,YZH)对人正常肝细胞系HL-7702细胞的法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR),多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance associated protein 3,MDR3)基因表达的影响,探讨茵栀黄注射液调控肝脏胆汁酸代谢的作用靶点及机制,为茵栀黄注射液治疗肝内胆汁淤积的临床应用提供实验依据。方法:不同浓度茵栀黄注射液干预HL-7702,采用细胞活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)探索茵栀黄注射液对HL-7702的活性影响,结合实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法确定茵栀黄注射液的理想干预浓度和时间;用GW4064(FXR激动剂)促进FXR基因的表达,分为茵栀黄注射液组,GW4064组,GW4064+茵栀黄注射液组,正常组,DMSO组;小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默FXR基因,分为siRNA组,siRNA+茵栀黄注射液组,正常组,阴性组。Real-time PCR法、蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测FXR,MDR3 mRNA及蛋白质的相对表达量,免疫荧光(IF)检测FXR蛋白的表达。结果:研究结果表明茵栀黄注射液对HL-7702的理想干预浓度1.08%,理想干预时间为15.47 h;茵栀黄注射液对HL-7702活性影响呈剂量依赖性;与正常组比较,GW4064组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01);与正常组比较,siRNA组抑制FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01);与GW4064组比较,GW4064组+茵栀黄注射液组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01);与siRNA组比较,siRNA+茵栀黄注射液组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01)。结论:茵栀黄注射液促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达,茵栀黄注射液通过FXR促进MDR3 mRNA和蛋白的表达来调控肝脏胆汁酸的代谢,本实验为其临床应用于治疗肝内胆汁淤积提供实验依据。     

肝硬化患者血清肝纤维化指标与糖代谢异常的关系

目的探讨肝硬化患者血清肝纤维化指标与糖代谢异常的关系。方法将91例肝硬化患者按口服葡萄糖耐量试验(OGTT)分为糖代谢正常组和异常组;用放射免疫法测定血浆胰岛素以及血清透明质酸()HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(4C)、Ⅲ型胶原氨端肽(PCⅢ);同步检测肝功能、凝血酶原活动度(PTA);计算胰岛素敏感性指数(ISI)。结果糖代谢异常组空腹及糖负荷后0.5～2h血糖明显升高(P值均<0.05),空腹及糖负荷后2～3h胰岛素显著增高(P<0.05);肝硬化糖代谢异常组肝纤维化四项指标升高均较糖代谢正常组更为明显,其中HA及PCⅢ水平两组的差异有统计学意义(均P<0.05);两组患者肝功能指标及ISI均有明显差异(P<0.05),肝硬化糖代谢异常组肝功能降低,组织胰岛素敏感性下降。结论肝硬化患者反复肝炎活动,肝功能进行性损害,可促进肝纤维化的进展,并导致糖代谢异常和胰岛素抵抗。     

Con A诱导急性免疫性肝损伤Wistar大鼠模型的构建

【目的】探讨刀豆蛋白A(Con A)诱导急性免疫性肝损伤Wistar大鼠模型的剂量和注射途径。【方法】(1)按不同剂量Con A尾静脉注射分组:将42只雌性Wistar大鼠随机分为A、B、C、D、E、N组,每组7只。N组为空白对照组,大鼠尾静脉注射生理盐水。A、B、C、D、E组大鼠尾静脉注射Con A,剂量分别为4、8、16、30、40 mg/kg。注射后第8 h,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)及细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-10、干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平,采用苏木素—伊红(HE)染色法观察肝组织病理变化。(2)按Con A不同注射途径分组:将21只Wistar大鼠随机分为正常对照组、腹腔注射组、尾静脉注射组,每组7只,尾静脉注射组和腹腔注射组分别经尾静脉和腹腔注射16 mg/kg Con A。注射后第8 h,检测血清ALT、AST、ALB水平。【结果】实验结束时Con A各剂量组大鼠非正常死亡数:A、B、C组0只,D组2只,E组7只。A、B组的肝组织可见少量点状坏死,炎性细胞浸润,小叶结构基本完整;C、D组可见明显的桥接样坏死。尾静脉注射组大鼠血清ALT、AST、ALB水平显著升高,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。【结论】尾静脉注射16 mg/kg Con A可成功诱导Wistar大鼠急性免疫性肝损伤模型。     

肠上皮干细胞标志分子在小鼠放射性肠炎中的表达

目的 探讨肠上皮干细胞标志分子Msil及Hesl在小鼠急性放射性肠炎(radiation enteritis,RE)模型中的表达情况.方法 40只雌性BALB/c小鼠采用β射线进行以300 cGy/min的速率一次性全腹部照射.选取30只小鼠于照射前(0 d)及照射后第3、5、7、14天每天处死6只,分离小肠,截取小肠中段进行定量PCR、Western印迹及免疫组织化学法测定Msil及Hesl的表达,比较两者的表达差异.结果 成功建立小鼠急性RE模型.定量PCR的结果显示,Msil和Hesl在第5天时表达的相对ΔCt值分别为15.17±0.47及15.83±0.24,Western印迹检测结果显示,Msil及Hesl于第5天表达的相对灰度分别为0.443±0.055和0.301±0.047,在RNA及蛋白质水平上两者均显著高于其他时间点(P值均＜0.05).免疫组织化学检测结果显示,Msil和Hesl于第5、7天时在肠隐窝中大量表达.结论 Msil及Hesl在RE的损伤修复前表达上调,提示肠干细胞的增殖与肠上皮修复有关.

Abstract：

Objective To investigate the expression of intestinal epithelial stem cell markers Msil and Hesl in mouse acute radiation enteritis (RE) model. Methods Forty female BALB/c mice were undergone one-time whole abdominal irradiation by 300 cGy/min β-ray. Thirty mice were selected before irradiation (Day 0) and every six mice were euthanized at day 3,5,7 and 14 after irradiation. The small intestinal were detached and the expression of Msil and Hesl were detected in middle part of small intestinal by quantitative RT-PCR, Western blots, and immunohistochemistry. Subsequently,the difference of Msil and Hesl expression was compared. Results The mouse acute RE model was successfully established. At the 5th day after radiation, the results of quantitative RT-PCR indicated that the relative ΔCt value of Msil and Hesl expression were 15. 17 ± 0. 47 and 15. 83 ± 0. 24respectively, the results of Western blot showed that the integrated intensity were 0. 443±0. 055 and 0. 301 + 0. 047 for Msil and Hesl. The expressions were significantly higher than other time points at RNA and protein levels (P<0. 05). The results of immunohistochemistry revealed that Msil and Hesl were highly expressed in intestinal crypts at 5th day and 7th day. Conclusions The expression of Msil and Hesl, upregulated before wound repair in RE model, indicates that intestinal epithelial repair is related to intestinal stem cell proliferation.     

青藤碱对小鼠骨髓间充质细胞iNOS/NO系统的影响

目的:探讨青藤碱对小鼠BMMSCs免疫调节能力的影响及其机制。方法:将青藤碱和/或小鼠BMMSCs加入混合淋巴细胞反应中,分为T-Cell组、T-Cell+ConA组、T-Cell+ConA+BMMSCs、T-Cell+ConA+Sino组和T-Cell+ConA+BMMSCs+Sino组。培养第3天,以CCK-8法检测各组T淋巴细胞增殖。ELISA法检测上清液中NO的浓度。以半定量PCR和Western blot法检测BMMSCs胞内iNOS的表达。结果:T-Cell+ConA+BMMSCs+Sino(0.01 mM、0.1 mM、1mM)组A值分别为0.49±0.02、0.33±0.02、0.25±0.04,低于T-Cell+ConA+BMMSCs组(0.68±0.03)(P<0.05)。T-Cell+ConA+BMMSCs+Sino(0.01mM、0.1mM和1mM)组NO浓度为2.39±0.94μmol·L-1、17.23±0.37μmol.L-1和29.13±6.08μmol·.L-1,均高于T-Cell+ConA+BMMSCs组(9.85±1.04μmol·L-1)(P<0.05)。相对T-Cell+ConA+BMMSCs组,T-Cell+ConA+BMMSCs+Sino(0.1mM和1mM)组iNOS mRNA和蛋白相对表达量为3.38±0.50、3.74±0.62和2.71±0.46、3.89±0.65(P<0.05)。结论:青藤碱能够增强小鼠BMMSCs的对淋巴细胞增殖的抑制作用,其作用机制可能和促进BMMSCs表达iNOS和分泌NO有关。