茵栀黄注射液基于FXR调控胆汁酸代谢的相关机制研究

目的通过研究茵栀黄注射液(Yinzhihuang injection,YZH)对肝内胆汁淤积湿热证大鼠和人正常肝细胞系(HL-7702)的法尼酯X受体(Farnesoid X receptor,FXR)基因表达的影响,探讨YZH的作用靶点及机制。方法 28只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(7只)、模型组(7只)、YZH组(7只)、GW4064组(7只),造模干预后观察大鼠肝脏组织病理和检测肝组织FXR的表达;不同浓度YZH干预HL-7702,观察细胞形态,确定YZH理想干预HL-7702的浓度。RT-qPCR法、免疫荧光法检测FXR基因的表达。结果 HE染色显示YZH组大鼠肝功能及肝脏病理损害明显低于模型组,YZH对HL-7702的理想干预浓度1.20%。YZH促进FXR基因的表达(P0.01)。结论 YZH能显著改善肝内胆汁淤积湿热证大鼠肝脏病理损害,YZH对HL-7702活性影响呈剂量依赖性,促进FXR基因的表达。     

强肌健力方对重症肌无力大鼠Th17/Treg平衡的影响

【目的】观察强肌健力方对实验性重症肌无力(MG)模型大鼠Th17/Treg平衡的影响。【方法】从70只雌性Lewis大鼠中随机选取7只作为正常组,余下63只给予皮下注射鼠源性AchR-α亚单位97-116多肽片段(R97-116)乳化剂复制MG大鼠模型。最终造模成功的大鼠30只,将其随机分为模型组(N=7),强肌健力方高剂量组(N=8)、中剂量组(N=7)、低剂量组(N=8)。强肌健力方高、中、低剂量组给予强肌健力方(剂量分别为23.4、15.6、7.8 g·kg-1·d-1)灌胃,正常组和模型组给予相同体积生理盐水灌胃,给药4周,期间每周2次观察、记录各组大鼠体质量及肌肉力量Lennon评分变化。给药结束后,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠脾脏组织维甲酸受体相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头蛋白p3(Foxp3)、白细胞介素17A(IL-17A)及转化生长因子β(TGF-β)蛋白表达水平。【结果】与模型组比较,强肌健力方各剂量组能够显著提高MG大鼠体质量(P 0.05)及降低Lennon评分(P 0.01),降低RORγt、IL-17A的表达水平(P 0.01),升高Foxp3、TGF-β的表达水平(P 0.05),且其作用与强肌健力方给药剂量呈正相关。【结论】强肌健力方可能通过影响Th17、Treg细胞转录蛋白及其相关细胞因子的表达,调节二者平衡,从而对MG大鼠产生治疗作用。     

黄芪葛根汤对高脂血症大鼠的降血脂作用机制研究

目的探讨黄芪葛根汤对高脂血症大鼠的降脂作用机制。方法将50 只SD 大鼠随机分为正常组、模 型组、阳性药组（阿托伐他汀钙片,5 mg·kg-1）及黄芪葛根汤低、高剂量组（5、10 g·kg-1）,每组10 只。采用高 脂饲料喂养大鼠复制高脂血症模型,模型复制的同时各给药组按照上述剂量灌胃给药,正常组和模型组给予等 量生理盐水灌胃,每天1 次,连续灌胃20 d。检测大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆 固醇（HDL-c）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）水平;采用HE 及油红染色观察大鼠肝脏病理变化;采用qPCR 及Western Blot 法检测小肠组织尼曼-匹克C1 型类蛋白1（NPC1L1）、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G5（ABCG5） 和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G8（ABCG8）mRNA 及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清 TC、TG、LDL-c 水平及小肠组织NPC1L1 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.01,P＜0.05）,HDL-c 水平 明显降低（P＜0.01）,肝细胞脂肪变性程度和脂滴积聚明显增加。与模型组比较,黄芪葛根汤低剂量组大鼠血 清TC、TG、LDL-c 水平与小肠组织NPC1L1 mRNA 及蛋白表达水平明显降低（P＜0.01,P＜0.05）,ABCG5、 ABCG8 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.01,P＜0.05）,肝细胞脂肪变性程度明显降低,脂滴积聚明显减 少。结论黄芪葛根汤对高脂血症大鼠具有明显降血脂作用,能降低肝细胞脂肪变性程度和减少肝细胞脂滴积 聚,可能与其下调小肠组织NPC1L1 的表达以抑制胆固醇的吸收,同时上调小肠组织ABCG5 及ABCG8 的表达 而增加胆固醇的排泄有关。     

胸腺髓质上皮细胞在中枢免疫耐受中的作用

胸腺是重要的中枢免疫耐受器官,也是T细胞分化、发育、成熟的场所,而胸腺髓质上皮(Medullary thymic epithelial cells,m TECs)在T细胞的阴性选择中占有重要作用,它通过表达组织限制性抗原(tissue-specific antigens,TSAs)消除自身反应性T细胞,而Aire在调控TSAs的表达,因此了解Aire调控TSAs的机制,以及m TECs在中枢免疫耐受中的作用能更有助于对自身免疫性疾病的认识。     

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征合并高血压病人的心电图表现分析

目的探讨阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAHS)合并高血压病人的心电图表现。方法收集2014年1月—2016年12月在广州中医药大学第一附属医院住院并明确诊断为OSAHS和高血压病病人,同时符合纳入与排除标准的66例中老年病人为OSAHS合并高血压组;选取同期60例非OSAHS的单纯高血压病人为单纯高血压组。两组病人均在入院24 h内行常规心电图检查。比较分析OSAHS合并高血压组与单纯高血压组的心电图异常结果(ST-T波改变、左室高电压及心律失常等),分析OSAHS合并高血压病人的心电图异常改变的原因。结果两组心电图总异常率差异具有统计学意义(78.79%与21.67%,P0.05);其中ST-T改变(45.45%与15.00%,P0.05)、左室高电压(15.15%与3.33%,P0.05)、心律失常(12.12%与1.67%,P0.05)差异均有统计学意义;并且在OSAHS不同等级比较中,高血压伴不同程度的OSAHS病人心电图异常率不同(P0.05),轻度、中度、重度OSAHS合并高血压病人两两组间比较均有统计学意义(P0.01)。结论 OSAHS合并高血压病人的心电图总异常率明显高于单纯高血压病人,并且在ST-T改变、左室高电压及心律失常发生率较单纯高血压组高,而且随着OSAHS严重程度加重,心电图发生异常的概率可能性更高,表明患OSAHS合并高血压人群的心脑血管疾病的危险性可能更高。     

青藤碱通过免疫调节防护刀豆蛋白A诱导的大鼠急性免疫性肝损伤

【目的】探讨青藤碱对刀豆蛋白A(Con A)诱导的大鼠急性免疫性肝损伤的防护效果及可能机制。【方法】将49只雌性Wistar大鼠随机分为7组,即正常组,模型组,青藤碱60、90、120、150 mg/kg组,地塞米松磷酸钠(Dex)组,每组7只。除正常组外,其余各组均尾静脉注射16 mg/kg Con A建立肝损伤模型。Dex组、青藤碱不同剂量组分别于Con A注射前1 h给药1次,青藤碱各组在Con A注射3 h后另再给药1次。Con A注射8 h后,腹主动脉取血,摘取肝脏组织。采用全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)水平;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素10(IL-10)水平;采用苏木素—伊红(HE)染色观察肝组织病理改变。【结果】与正常组比较,模型组大鼠肝脾指数及ALT、AST、IL-2、IL-10水平均明显升高,ALB水平降低,差异均有统计学意义(P0.05),表明造模成功;与模型组比较,Dex组、青藤碱不同剂量组肝指数,ALT、AST、IL-2水平均明显降低,ALB、IL-10水平升高,差异有统计学意义(P0.05),且组织病理结果显示肝细胞坏死及炎细胞浸润程度明显减轻;与Dex组比较,青藤碱120 mg/kg组肝指数,ALT、AST、IL-2水平均明显降低,ALB、IL-10水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。【结论】青藤碱对Con A诱导大鼠急性免疫性肝损伤具有防治作用,抑制部分T淋巴细胞活化,调节IL-2、IL-10的分泌可能是其作用机制之一。     

劳绍贤分型辨治慢性萎缩性胃炎经验

采用频次分析的方法,对劳绍贤教授2015年10月至2017年11月期间门诊治疗慢性萎缩性胃炎患者的证候及方药进行分析,以探讨其辨治慢性萎缩性胃炎思路。劳教授门诊治疗的慢性萎缩性胃炎患者以脾胃虚弱、胃阴不足为常见证型;其治疗以益气养阴为基本大法,重视疏肝理气,辅以清热解毒、活血散结,同时善用岭南道地药材。     

基于网络药理学探讨左金丸的作用机制

目的:探讨左金丸的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台、蛋白数据库、疾病数据库,查询左金丸有效化合物、相关靶蛋白和靶基因,构建成分-靶点网络图、靶点-疾病网络图和蛋白互作网络图,并对靶点蛋白进行基因本体生物学过程(GO-BP)和基因组百科全书(KEGG)通路分析和作图。结果:共获取槲皮黄酮、小檗碱等42个有效化合物,经分子在线对接平台筛选后,获取214个靶点、622种相关疾病、10个hub蛋白,包括白细胞介素-6、白细胞介素-10、基质金属蛋白酶-9等;GO-BP富集涉及转录调控、信号通路、物质反应、细胞凋亡等生物过程,KEGG分析涉及癌症、肝病、内分泌等相关信号通路。结论:左金丸作用靶点涉及癌症、肝病、代谢、心血管、炎症等疾病,与癌症尤为相关。     

茵栀黄注射液基于FXR调控MDR3治疗肝内胆汁淤积的作用机制

目的:通过研究茵栀黄注射液(Yinzhihuang injection,YZH)对人正常肝细胞系HL-7702细胞的法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR),多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance associated protein 3,MDR3)基因表达的影响,探讨茵栀黄注射液调控肝脏胆汁酸代谢的作用靶点及机制,为茵栀黄注射液治疗肝内胆汁淤积的临床应用提供实验依据。方法:不同浓度茵栀黄注射液干预HL-7702,采用细胞活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)探索茵栀黄注射液对HL-7702的活性影响,结合实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法确定茵栀黄注射液的理想干预浓度和时间;用GW4064(FXR激动剂)促进FXR基因的表达,分为茵栀黄注射液组,GW4064组,GW4064+茵栀黄注射液组,正常组,DMSO组;小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默FXR基因,分为siRNA组,siRNA+茵栀黄注射液组,正常组,阴性组。Real-time PCR法、蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测FXR,MDR3 mRNA及蛋白质的相对表达量,免疫荧光(IF)检测FXR蛋白的表达。结果:研究结果表明茵栀黄注射液对HL-7702的理想干预浓度1.08%,理想干预时间为15.47 h;茵栀黄注射液对HL-7702活性影响呈剂量依赖性;与正常组比较,GW4064组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01);与正常组比较,siRNA组抑制FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01);与GW4064组比较,GW4064组+茵栀黄注射液组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01);与siRNA组比较,siRNA+茵栀黄注射液组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01)。结论:茵栀黄注射液促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达,茵栀黄注射液通过FXR促进MDR3 mRNA和蛋白的表达来调控肝脏胆汁酸的代谢,本实验为其临床应用于治疗肝内胆汁淤积提供实验依据。     

Con A诱导急性免疫性肝损伤Wistar大鼠模型的构建

【目的】探讨刀豆蛋白A(Con A)诱导急性免疫性肝损伤Wistar大鼠模型的剂量和注射途径。【方法】(1)按不同剂量Con A尾静脉注射分组:将42只雌性Wistar大鼠随机分为A、B、C、D、E、N组,每组7只。N组为空白对照组,大鼠尾静脉注射生理盐水。A、B、C、D、E组大鼠尾静脉注射Con A,剂量分别为4、8、16、30、40 mg/kg。注射后第8 h,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)及细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-10、干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平,采用苏木素—伊红(HE)染色法观察肝组织病理变化。(2)按Con A不同注射途径分组:将21只Wistar大鼠随机分为正常对照组、腹腔注射组、尾静脉注射组,每组7只,尾静脉注射组和腹腔注射组分别经尾静脉和腹腔注射16 mg/kg Con A。注射后第8 h,检测血清ALT、AST、ALB水平。【结果】实验结束时Con A各剂量组大鼠非正常死亡数:A、B、C组0只,D组2只,E组7只。A、B组的肝组织可见少量点状坏死,炎性细胞浸润,小叶结构基本完整;C、D组可见明显的桥接样坏死。尾静脉注射组大鼠血清ALT、AST、ALB水平显著升高,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。【结论】尾静脉注射16 mg/kg Con A可成功诱导Wistar大鼠急性免疫性肝损伤模型。