血小板衍生膜微粒对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

本研究探讨血小板衍生膜微粒（platelet-derived membrane microparticles,PMP）对人脐静脉内皮细胞（hu-man umbilical vein endothelial cells,HUVEC）增殖和凋亡的影响。用不同浓度的凝血酶激活血小板释放出PMP,采用流式细胞术检测PMP的释放量,确定制备PMP时凝血酶的最佳应用浓度。以体外培养HUVEC为载体,通过噻唑蓝（MTT）实验和流式细胞术研究不同浓度的PMP对HUVEC增殖和凋亡的影响。结果表明,2、1.5、1.0和0.5U/ml凝血酶激活血小板后PMP的释放率分别为28.7、47.7、50.1和43.9%;HUVEC的增殖与PMP呈剂量依赖关系。在培养液中添加40μg/mlPMP时,HUVEC增殖是空白对照组的1.8±0.3倍;10μl/ml血管内皮细胞生长因子（VEGF）组的HUVEC增殖是空白对照组的1.9±0.5倍,两组之间无统计学差异,（p〉0.05）;PMP能抑制HUVEC的凋亡,40μg/mlPMP组的细胞凋亡率为（3.9±0.4）%,明显低于空白对照组的细胞凋亡率（9.4±0.5）%（p〈0.05）。VEGF（10μl/ml）对HUVEC细胞的凋亡无明显抑制作用,其凋亡率为（8.0±0.8）%。结论：用1U/ml的凝血酶刺激血小板释放的PMP较为均一,且释放量最大,可促进HUVEC细胞的增殖并抑制其凋亡。     

血小板衍生膜微粒对内皮细胞增殖及血管生成的影响

目的探讨血小板衍生膜微粒（PMP）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖和鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）血管生成的影响。方法在血小板悬液中加1.0U/ml的凝血酶,37℃下作用10min后,800g离心20min,取上清,17000g离心分离出PMP,采用BCA法测定PMP含量（以蛋白含量计）,将HUVEC与不同浓度的PMP和血管内皮细胞生长因子（VEGF）共同孵育培养24h后,采用MTT法测定细胞增殖;将20μl的PMP（40μg/ml）和VEGF（10μl/ml）分别接种于CAM上,孵育72h后,观察PMP对CAM血管生成的影响。结果HUVEC的增殖与PMPs呈剂量依赖关系,在培养液中添加40μg/mlPMP时,HUVEC增殖是空白对照组的（1.83±0.33）倍;而VEGF（10μl/ml）组HUVEC的增殖是空白对照组的（1.91±0.47）倍,两者相比差异无显著性（P〉0.05）。PMP组及VEGF组在接种点周围可见不同程度放射状密集生长的血管网,而对照组无特异性密集血管生成。PMP组及VEGF组的CAM血管分支点数分别为112.5±11.3、128.4±10.0,均显著高于空白对照组82.6±8.1。结论PMP可促进人脐静脉内皮细胞的增殖和CAM血管的生成。     

应用MALDI-TOF质谱技术检测多发性骨髓瘤Jak2基因单核苷酸多态性

本研究探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（MALDI—TOFMS）检测多发性骨髓瘤（MM）jak2基因的单核苷酸多态性（SNP）的实用性。用PCR扩增出含jak2基因2个SNP（C428T和C643T）位点的DNA片段作为模板,产物纯化后利用MALDI,TOFMS检测5例MM和5例健康对照者样本的jak2基因多态性。结果表明：C428T和C643T位点基因型在多发性骨髓瘤病例与健康对照组的分布无差异,均为T／T纯合子。结论：本实验建立的基于MALDI—TOFMS与引物延伸技术检测jak2基因多态性的方法是一个快速、准确和可靠的检测方法。     

弥漫大B细胞淋巴瘤血清VEGF和β2-MG蛋白与Bcl-6和Ki-67表达临床相关性分析

目的：探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma,DLBCL）患者治疗前血清B2微球蛋白（β2-mi—croglobnlin,β2-MG）和内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白表达与Bcl-6和Ki-67表达的临床相关性。方法：2011-09-08—2013-02-16江苏省肿瘤医院初治49例DLBCL患者行CHOP方案化疗,Luminex液相芯片法检测治疗前血清VEGF和B2-MG蛋白表达水平,常规免疫纽化法检测Bcl-6和Ki-67表达。结果：VEGF蛋白高表达合并Bcl-6高表达者多见于年龄〉60岁的老年患者,阳性率为53．8％（7／13）,P=0．048;合并Ki-67高表达者的各项临床特征间差异均无统计学意义,P〉0．05。VEGF蛋白高表达合并Ki-67高表达者能获得更佳的疗效,P=0．008;完全缓解（CR）患者阳性率为4／7,部分缓解（PR）患者阳性率为50．0％（8／16）。β2-MG蛋白高表达合并Bcl-6和Ki-67高表达与各项临床特征间差异无统计学意义,P〉0．05。结论：VEGF蛋白高表达合并Ki-67高表达与治疗疗效密切相关,两者同时高表达时DLBCL患者对cHOP治疗方案的敏感度高,治疗疗效好。β2-MG和VEGF蛋白表达结合临床常规免疫组化检测有望成为DLBCL临床诊断和治疗方案选择的新方法。     

ULK1在胃癌中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌组织中ULK1的表达及其临床意义。方法 收集2013年1月至2013年12月145例胃癌组织和50例癌旁组织。采用免疫组化SP法检测上述组织中ULK1的表达,分析其表达与临床病理特征和预后的关系。结果 胃癌组织和癌旁组织中ULK1的阳性表达率分别为80％（116／145）和16％（8／50）,差异有统计学意义（P＜0.05）。ULK1表达与胃癌浸润深度、分化程度、淋巴结侵犯、TNM分期和复发转移有关（P＜0.05）,与年龄、脉管侵犯、HER 2和p53无关（P＞0.05）。ULK1无表达、低表达和高表达组患者的中位生存时间分别为44.8个月（95％CI：40.5～49.2个月）、427个月（95％CI：39.9～45.6个月）和37.7个月（95％CI：33.0～42.4个月）,差异有统计学意义（P=0.007）。     

蛋白芯片法检测弥漫大B细胞淋巴瘤患者血清β2微球蛋白和血管内皮生长因子蛋白表达的临床意义

目的 探讨β2微球蛋白（β2-MG）和血管内皮生长因子（VEGF）在弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中的表达及意义.方法 Luminex液相芯片法检测初治49例DLBCL患者治疗前血清VEGF 和β2-MG蛋白表达水平的变化,分析二者与临床病理因素的关系.结果 49例DLBCL患者中,β2-MG 高表达37例,VEGF高表达23例.β2-MG和VEGF蛋白高表达与患者的性别、年龄、有无B组症状、临床分期、乳酸脱氢酶（LDH）的增高均无相关性（均P＞ 0.05）.β2-MG高表达与以CHOP方案为基础的全身化疗效果相关（P=0.037）.VEGF蛋白高表达与合并纵隔侵犯有相关趋势,但差异无统计学意义（P=0.067）.结论 蛋白芯片法检测β2-MG和VEGF蛋白表达水平有望成为DLBCL常规临床诊断和治疗方案选择的新方法.     

活化血浆凝固时间对血小板输注疗效评价的研究

本研究探讨活化血浆凝固时间(APCT)对评价血小板输注疗效的价值,用血小板聚集凝血因子分析仪检测了20例血液病患者血小板输注前后APCT的变化,并与血小板计数增加校正指数(CCI)和实际血小板回收率(PPR)进行了对比研究。结果表明:输注1小时、24小时后的APCT均明显缩短,APCT由血小板输注前的(103.7±11.3)秒分别缩短为输注后1小时、24小时的(60.0±9.7)秒、(68.5±9.8)秒,(P<0.01),而正常对照的APCT为(42.0±3.4)秒;按照CCI和PPR的判断标准(输注后1小时和24小时CCI分别为<7500和<5000,PPR分别为<30%和20%为输注无效),有2例为血小板输注无效,其输注1小时、24小时的CCI值分别为7415、2966和6913、4988,PPR值分别为28.0%、11.2%和25.2%、14.1%。1例PPR均达血小板输注无效标准,而CCI值均显示血小板输注有效;2例PPR均达血小板输注无效标准,而输注1小时的CCI值表示为血小板输注有效,24小时的CCI值表示为血小板输注无效。结论:APCT可以反映血小板数量和质量的变化,也能较全面的评估血小板的输注疗效。     

结直肠癌术后辅助化疗序贯免疫治疗的临床观察

［摘要］目的: 探讨经手术切除的ⅢB及ⅢC期结直肠癌患者术后辅助化疗联合免疫治疗的疗效。方法: 选择经手术切除的ⅢB期及ⅢC期结直肠癌患者31例(联合治疗组),采用XELOX方案(第1天静脉滴注奥沙利铂,130 mg/m2;第1~14天口服卡培他滨,1 000 mg/m2 ,2次/d,21 d为1个周期)术后辅助化疗,序贯免疫治疗［第2~5天粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM CSF）150 μg皮下注射,第6~19天 IL 2 100万IU皮下注射,21 d为1个周期］,6~8个周期。选择同期经手术切除的ⅢB期及ⅢC期结直肠癌患者21例(单纯化疗组),采用XELOX方案术后辅助化疗。比较两组患者治疗前后免疫功能的变化;密切随访,计算无病生存时间(disease free survival, DFS);记录治疗相关不良事件。 结果： 所有患者均可评价免疫功能及毒副反应。联合治疗组治疗后CD8+T细胞比例较治疗前明显降低(P<0.05);与单纯化疗组相比,联合治疗组治疗后CD8+T细胞比例明显降低(P<0.05),NK细胞比例、CD4+/CD8+比值明显增高(P<0.05)。联合治疗组和单纯化疗组中位DFS分别为23.17月和14.62月。两组毒副反应均以消化道反应和血液学毒性为主,无严重毒副反应发生,经对症治疗后均可恢复正常。两组患者均未发生治疗相关性临床死亡事件。结论： 标准术后辅助化疗联合序贯免疫治疗可进一步延长ⅢB及ⅢC期结直肠癌患者术后DFS,提高其免疫功能,且患者依从性良好。     

联合应用尼洛替尼和汉防己甲素逆转K562/A02细胞耐药与诱导凋亡的研究

本研究旨在探讨联合应用尼洛替尼(nilotinib)和汉防己甲素(tetrandrine,Tet)逆转K562/A02细胞耐药与诱导凋亡的相关性及其机制。应用MTT法检测细胞敏感性,计算尼洛替尼和Tet干预后的柔红霉素(DNR)的半数抑制浓度(IC50),用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,RT-PCR检测bax、survivin mRNA的表达及Western blot分析BAX、SURVIVIN蛋白的表达情况。结果表明:5 nmol/L尼洛替尼或1.0μml/L Tet单独作用48小时后,DNR对K562/A02细胞的IC50分别为(5.71±0.72)mg/L和(6.52±0.43)mg/L,两药联合应用时DNR对K562/A02细胞的IC50降为(3.12±0.13)mg/L。单用尼洛替尼或Tet均能增加经DNR作用的K562/A02细胞的凋亡率,两药联合作用时凋亡率增高更明显。单用5 nmol/L尼洛替尼或1.0μml/L Tet 48小时后可上调bax mRNA及其蛋白的表达,且两药联合作用时上调幅度明显。单用5 nmol/L尼洛替尼或1.0μml/LTet48小时后可下调survivin mR...