exosomes在肺癌细胞对顺铂敏感性降低过程中的作用研究

目的研究肺癌细胞分泌的exosomes在同源细胞对顺铂的敏感性调节过程中的可能作用。方法采用超速离心和Exoquick-TC结合的方法从肺癌细胞系A549和H1975的上清液中分离出exosomes,透射电子显微镜观察其形态,western blot检测其CD63蛋白表达;共聚焦显微镜观察细胞胞吞exosomes过程;分别提取顺铂处理肺癌细胞来源exosomes和未处理肺癌细胞来源exosomes,并使用2种exosomes分别处理肺癌细胞,采用CCK-8法检测上述获得的exosomes对肺癌细胞顺铂敏感性的影响。结果透射电子显微镜下观察肺腺癌细胞来源的exosomes具有特征性的盘状结构,直径30-100 nm,western blot结果显示exosomes富含CD63蛋白;显微镜下可观察到exosomes可进入细胞;同时经顺铂处理过肺癌细胞分泌的exosomes可降低同源细胞对顺铂的敏感性。结论减少exosomes的分泌和传递可能会增加顺铂化疗的疗效,这为肺癌的治疗提供了一种新的思路。     

ULK1在胃癌中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌组织中ULK1的表达及其临床意义。方法 收集2013年1月至2013年12月145例胃癌组织和50例癌旁组织。采用免疫组化SP法检测上述组织中ULK1的表达,分析其表达与临床病理特征和预后的关系。结果 胃癌组织和癌旁组织中ULK1的阳性表达率分别为80％（116／145）和16％（8／50）,差异有统计学意义（P＜0.05）。ULK1表达与胃癌浸润深度、分化程度、淋巴结侵犯、TNM分期和复发转移有关（P＜0.05）,与年龄、脉管侵犯、HER 2和p53无关（P＞0.05）。ULK1无表达、低表达和高表达组患者的中位生存时间分别为44.8个月（95％CI：40.5～49.2个月）、427个月（95％CI：39.9～45.6个月）和37.7个月（95％CI：33.0～42.4个月）,差异有统计学意义（P=0.007）。     

长链非编码RNA对胃癌发生发展和预后的影响及临床意义

2015年中国癌症总发病429.16万例,总死亡281.42万例,肺癌和胃癌依次排名前两位。近年来长链非编码RNA(LncRNAs)颇受关注,被视为肿瘤发生、发展的重要调控因子。长链非编码RNA在胃癌组织、细胞或胃液中表达异常,通过不同的作用机制影响肿瘤的增殖、进展和预后。早期诊断及预防复发和转移是成功治疗胃癌的关键。提倡"精准医疗",深入研究长链非编码RNA的作用机制具有重要临床意义。     

化疗后再使用EGFR-TKI治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究

  目的  表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)虽疗效显著,且安全性好,但最终都会发生耐药。EGFR-TKI耐药机制复杂,应对困难,本研究旨在探讨EGFR-TKI治疗晚期NSCLC获得性耐药的患者,化疗后再次应用EGFR-TKI的疗效。  方法  前瞻性对EGFR-TKI治疗晚期NSCLC长期获益后获得性耐药的27例患者,先化疗,后再次应用EGFR-TKI治疗,吉非替尼250 mg qd或厄洛替尼150 mg qd至疾病进展;依据RECIST标准评价疗效,比较再使用原EGFR-TKI与另一种EGFR-TKI的疗效。  结果  27例患者全为晚期肺腺癌,完全缓解(CR)为1例(3.7%)、部分缓解(PR)为8例(29.6%)、稳定(SD)为14例(51.9%)、进展(PD)为4例(14.8%),有效率(RR)为33.3%,疾病控制率(DCR)为85.2% (95% CI为62~94),mPFS为6个月。13例再用原EGFR-TKI (同药组) CR为1例(7.6%),PR为2例(15.4%)、SD为8例(61.5%),RR为23%,PD为2例(15.4%),DCR为86.4%,其mPFS为5个月;14例再用另一种EGFR-TKI (换药组) CR为0例,PR为6例(42.8%),SD为6例(42.8%),进展为2例(14.3%),RR为42.8%,其mPFS为9.5个月,DCR为85.7%,两组DCR比较无显著性差异(P>0.05),两组的mPFS比较有显著性差异(P < 0.05);mPFS换药组明显长于同药组。  结论  EGFR-TKI治疗晚期NSCLC长期获益后获得性耐药的患者,先化疗、后再次应用EGFR-TKI,大部分患者仍能取得一定疗效。      

非小细胞肺癌源性外泌体提取方法探讨

目的:比较3种提取非小细胞肺癌A549细胞培养上清中外泌体 (Exosomes) 的方法,为获得高质量的Exosomes提供参考?方法:分别采取超速离心法?进口ExoQuick-TC提取法?国产Ribo提取法提取A549细胞培养上清中的Exosomes?利用透射电镜进行形态学观察,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠法进行蛋白定量,Western blot检测Exosomes表面标志物 CD63表达?结果:3种方法均可提取到Exosomes,电镜下可观察到圆形膜性囊泡结构?进口ExoQuick-TC提取法及国产Ribo提取法提取样本浓度显著高于超速离心法(P < 0.05);3种方法提取样本均有Exosomes特异性标志蛋白 CD63表达,超速离心法CD63表达最高?结论:超速离心法?进口ExoQuick-TC提取法?国产Ribo提取法均可成功分离Exosomes,超速离心法获得的Exosomes纯度较高,应用试剂盒方法获得的Exosomes浓度高?     

外泌体在乳腺癌发病中的作用机制

研究表明外泌体可通过介导细胞间通讯参与乳腺癌的发生发展过程,促进肿瘤转移和耐药,影响肿瘤患者的治疗效果.外泌体与乳腺癌临床分期及预后的关系密切,在乳腺癌早期诊断和生物治疗中具有潜在的临床应用价值,可为乳腺癌的治疗提供新的希望.     

全血分离时间对肠癌患者血浆游离DNA浓度的影响

目的观察全血分离时间对肠癌患者血浆游离DNA浓度的影响。方法收集23例经病理确诊的晚期结直肠癌患者乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝血各6mL,分别于2、6h和30h分离全血并将分离后的血浆置于超低温冰箱保存,以绝对定量聚合酶链式反应（PCR）检测不同时间段分离的血浆游离DNA浓度,并比较其随时间发生的变化。结果 2h分离全血时,血浆游离DNA浓度的中位数为20.00ng/mL,平均数为63.59ng/mL（95%CI：30.26-96.92ng/mL）;6h分离全血时,血浆游离DNA浓度的中位数及平均数分别为12.56ng/mL和16.90ng/mL（95%CI：9.26-24.54ng/mL）;30h分离全血时,血浆游离DNA浓度的中位数及平均数分别为60.90ng/mL和90.64ng/mL（95%CI：59.01-122.27ng/mL）。2h和30h分离的血浆游离DNA浓度显著高于6h分离的浓度（P=0.003,P=0.000）,30h分离的血浆游离DNA浓度与2h分离的浓度比较,差异无统计学意义（P=0.218）。结论获取肿瘤患者全血后应尽快分离全血,延长分血时间可能导致游离DNA降解。     

贝伐珠单抗联合含铂化疗方案一线治疗晚期非鳞NSCLC疗效分析

目的观察贝伐珠单抗联合含铂化疗方案一线治疗晚期非鳞非小细胞肺癌的疗效和安全性。方法经病理证实的55例晚期非鳞非小细胞肺癌采用贝伐珠单抗联合化疗作为一线治疗。贝伐珠单抗按7.5 mg/kg剂量在化疗第1天给予,每21天重复,至不能耐受或疾病进展。联合的一线化疗方案包括：培美曲塞加铂类（顺铂、卡铂或奈达铂）（培美曲塞组,n=41）或紫杉类加卡铂（紫杉类组,n=14）。每治疗2周期进行CT或MRI检查评价疗效并记录不良反应。结果 55例患者中无完全缓解病例,部分缓解33例,疾病稳定20例,疾病进展2例。疾病总有效率60.0%（33/55）,疾病控制率96.4%（53/55）,中位PFS为7.2月（1.7-31.5月,95%CI：6.0～8.4）。紫杉类组的中位PFS有优于培美曲塞组的趋势（8.5月vs 6.5月）,但差异无统计学意义（P=0.058）。培美曲塞组中位治疗周期数少于紫杉类组（4周期vs 9周期,P=0.000）。以顺铂为基础化疗患者（n=21）的有效率高于以卡铂为基础化疗的患者（n=31）（81.0%vs 51.6%,χ2=4.65,P=0.031）。不良反应方面,有2例出现大咯血,1例出现3级高血压,1例出现亚急性多发性脑梗死而停药,其余不良反应均为1～2级,可耐受。贝伐珠单抗联合顺铂或卡铂组引起不良反应相似。结论贝伐珠单抗联合含铂化疗方案一线治疗晚期非鳞非小细胞肺癌患者耐受性较好。     

循环肿瘤细胞与个体化药物治疗

循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTC）已经被证实存在于肿瘤患者尤其是晚期患者的外周血中。近年来CTC的研究技术迅速发展并且在肿瘤个体化药物治疗方面显示出良好的发展前景。CTC的重要性在于它可以使基因表达／突变的检测变得切实可行,从而实现“实时”个体化药物治疗。本文主要介绍现有的CTC检测／收集技术及其在个体化药物治疗方面的作用。     

肺癌EGFR-TKI继发耐药的主要机制与应对策略

表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)是含有EGFR敏感突变的肺腺癌患者重要的靶向治疗药物,但几乎所有治疗有效的患者最终都会对EGFR-TKI治疗产生继发耐药.目前较公认的耐药机制主要包括T790M突变、MET扩增、PIK3CA突变、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因表达下调、Fas-核转录因子-κB激活等.近年针对以上耐药机制,诞生了一批克服EGFR-TKI继发耐药的新药物,这些药物大部分仍停留在细胞或动物实验阶段,但也有少数药物获得了比较肯定的临床结果.