基质金属蛋白酶组织抑制因子-1对小鼠肝脏肝脏巨噬细胞募集作用的研究

目的观察用脂质载体Lipidoid携带小干扰RNA(siRNA)的方式降低小鼠肝脏基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白的表达对肝脏巨噬细胞募集的影响。方法 8周龄雄性C57BL/6小鼠分别给予四氯化碳(CCl4)灌胃建立小鼠肝脏纤维化模型,造模同时尾静脉注射Lipidoid、Lipidoid/siRNA-TIMP-1。应用Masson染色评估各组小鼠肝脏纤维化程度;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测Lipidoid/siRNA-TIMP-1对小鼠肝脏组织TIMP-1蛋白以及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平的影响;通过F4/80染色,观察Lipidoid/siRNA-TIMP-1降低TIMP-1后对小鼠肝脏纤维化过程中巨噬细胞募集的影响。结果 Masson染色发现,CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型中,Lipidoid/siRNA-TIMP-1能够缓解肝脏纤维化程度;qRT-PCR和Western blotting显示Lipidoid/siRNA-TIMP-1治疗组较CCl4+Lipidoid对照组小鼠肝脏组织中TIMP-1蛋白表达降低(P0.05%),同时MCP-1蛋白的表达也受到抑制;F4/80染色结果提示,Lipidoid/siRNA-TIMP-1能够减少巨噬细胞在CCl4诱导的小鼠纤维化肝脏组织中的募集。结论 Lipidoid/siRNA-TIMP-1能够有效降低小鼠肝脏组织中TIMP-1的表达,影响巨噬细胞募集,发挥抗纤维化作用。     

转录因子Foxp3对RAW264.7细胞表型及免疫抑制相关基因的影响

目的 应用过表达转录因子Foxp3的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型,探讨转录因子Foxp3对RAW264.7细胞表型及免疫抑制相关基因的影响,从而为移植排斥提供新的细胞治疗措施奠定基础.方法 采用脂质体转染重组质粒pIRES2-EGFP/mFoxp3及空载质粒pIRES2-EGFP至小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞系,经G418筛选后,免疫荧光显微镜及流式细胞术检测GFP表达、RT-PCR检测Foxp3表达以鉴定表达效果;采用RT-PCR检测转染重组质粒pIRES2-EGFP/mFoxp3、空载质粒pIRES2-EGFP以及未转染质粒组的RAW264.7细胞表面分子CTLA-4、GITR及GITRL的表达水平;采用RT-qPCR的方法检测各组RAW264.7细胞iNOS及Arg1的表达水平.结果 成功建立稳定表达Foxp3的巨噬细胞RAW264.7细胞模型;与转染空载质粒pIRES2-EGFP和未转染质粒的RAW264.7细胞相比,转染重组质粒pIRES2-EGFP/mFoxp3的RAW264.7细胞的表面分子CTLA-4、GITR及GITRL 的mRNA表达水平明显升高（P〈0.01）,免疫抑制相关基因iNOS及Arg1的 mRNA表达水平也明显升高（P〈0.01）.结论 转录因子Foxp3能够使RAW264.7细胞表面分子及免疫抑制相关基因的表达水平明显升高,可能发挥抑制免疫应答的作用,从而在治疗移植排斥中发挥作用.     

铁和铁调素在四氯化碳肝纤维化小鼠模型中的表达

目的利用四氯化碳(CCl_4)肝纤维化小鼠模型,动态观察小鼠肝纤维化发生发展过程中血清铁、肝脏组织铁的变化及血清铁调素(hepcidin)对铁代谢的影响,为临床抗肝纤维化治疗提供实验依据。方法利用8周龄的C57BL/6品系雄性小鼠分别给予CCl_4一周2次灌胃建立不同时期的肝纤维化模型,通过HE及Masson染色观察各组小鼠肝脏炎症、肝损伤及纤维化程度,并通过检测小鼠血清铁调素、血清铁、肝脏组织铁、膜铁转运蛋白的表达来评价小鼠肝纤维化过程中铁调素对铁代谢的影响。结果 CCl_4肝纤维化模型小鼠随造模时间的延长,纤维化程度逐渐加重,血清铁调素的表达呈递增趋势;血清铁及肝脏组织铁均呈先增加后降低的趋势,但两者出现峰值的时间点不同,且在CCl_4灌胃第6周仍高于正常对照组。血清膜铁转运蛋白随时间变化趋势与肝脏组织铁相似。结论在CCl_4诱导的肝纤维化小鼠模型中,随纤维化程度逐渐加重,血清铁调素的表达逐渐增加;血清铁、肝脏组织铁及膜铁转运蛋白的表达呈先增加后降低趋势,与铁调素调控体内铁代谢、维持铁稳态密切相关,同时也证实了肝纤维化过程中存在铁沉积。     

大鼠骨髓间质干细胞体内诱导肝星状细胞的凋亡

背景:骨髓间质干细胞治疗肝纤维化的疗效己得到很多实验的证实,但其机制仍不明确.目的:实验观察骨髓间质干细胞移植后肝星状细胞的凋亡情况,初步探讨骨髓间质干细胞治疗肝纤维化的机制.方法:连续8周皮下注射CCl_4诱导大鼠肝纤维化.造模成功后,20只大鼠随机分为实验组及对照组,每组10只.实验组经尾静脉注射骨髓间充质干细胞,对照组经尾静脉注射DMEM培养液.于移植前,移植后第3,7天分别处死大鼠,取其肝脏行羟脯氨酸的检测,苏木精-伊红染色及masson染色,免疫组织化学检测α-SMA及α-SMA+TUNEL双染反映肝星状细胞活化及其凋亡情况.结果与结论:造模8周后,大鼠肝脏羟脯氨酸含最明显升高,病理呈进展性肝纤维化表现.移植7 d后,实验组大鼠肝脏羟脯氨酸含量明显降低,肝纤维化有所缓解,而对照组的肝纤维化程度继续加重.免疫组织化学显示,CCl_4注射8周后,α-SMA阳性细胞大量增生,移植后第7天,实验组α-SMA阳件细胞明显少于对照组(P＜0.05).移植后第3天,实验组肝星状细胞凋亡明显较对照组增加(P＜0.05).结果提示,骨髓间质干细胞移植有治疗肝纤维化的作用.骨髓间质干细胞诱导肝星状细胞凋亡可能是其治疗肝纤维化的主要机制之一.     

稳定表达GFP的骨髓增生异常综合征转白血病细胞株的建立

目的:建立稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的骨髓增生异常综合征转白血病的细胞株,评价其生物学特性及其应用。方法:以人骨髓增生异常综合征转化为白血病细胞系SKM-1为母系细胞,通过携带GFP基因的慢病毒进行转染,以有限稀释法获得GFP阳性的单细胞克隆,并将扩大培养后的细胞通过皮下注射的方式进一步在小鼠体内筛选,致瘤后将瘤块分离,继续进行培养,获得SKM-1/GFP细胞株。通过荧光倒置显微镜观察细胞形态,应用流式细胞术检测细胞荧光表达水平,应用CCK-8法检测细胞生长特性,将扩大培养后的SKM-1/GFP细胞接种在免疫缺陷小鼠的皮下,致瘤后观察瘤块以及各个脏器组织的浸润情况。结果:SKM-1/GFP细胞形态和生长特性与SKM-1母系细胞无差异,流式细胞术检测GFP的表达率为100%,体外CCK-8法检测生长曲线显示,SKM-1/GFP细胞与母系SKM-1细胞无明显差异。将SKM-1/GFP细胞接种于NOD/SCID小鼠皮下,14d时可见瘤块形成。30 d时,在荧光显微镜下观察荷瘤小鼠,可见瘤块自发荧光。在荧光显微镜下观察肿块冰冻切片,可见较为均一的GFP阳性细胞。冰冻切片显示,小鼠心、肝、胃、肾均有肿瘤细胞浸润。结论:成功建立了稳定表达GFP的骨髓增生异常综合征转白细胞株SKM-1/GFP,该细胞株可以灵敏地追踪肿瘤细胞,应用于微小残留病的研究,为研究骨髓增生异常综合征转化的急性白血病提供一个新的实验平台。     

小鼠单核巨噬细胞Ufm1基因shRNA慢病毒载体构建及鉴定

目的 构建小鼠Ufm1基因RNA干扰慢病毒载体,并实现该基因在小鼠单核巨噬细胞系（RAW264.7）中的稳定表达抑制.方法 根据小鼠Ufm1基因设计两条RNA干扰序列,合成靶序列双链DNA,与pFU-GW-RNAi载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.pFU-GW-RNAi载体、pHelper 1.0载体及pHelper 2.0载体共转染293T细胞包装产生慢病毒颗粒,并测定其滴度,随后感染RAW264.7细胞,建立稳定转染细胞株.将RAW264.7细胞分为空白组、阴性对照组及RNA干扰慢病毒感染组,用Real-time PCR检测Ufm1基因mRNA的表达量.结果 PCR扩增检测阳性菌落和测序证实,shRNA片段完全正确插入慢病毒载体pFU-GW-RNAi中.在荧光显微镜下观察可见,293T细胞呈绿色荧光,并测得病毒滴度为9×105 TU/μl.重组慢病毒感染RAW264.7后,用Real-time PCR检测到Ufm1基因mRNA的表达受到抑制.结论 成功构建了小鼠RNA干扰慢病毒载体,并能够在RAW264.7细胞中有效沉默靶基因.     

小鼠肝星状细胞的分离纯化新方法的建立与应用

目的 介绍一种简便、经济、高产的小鼠肝星状细胞(HSC)分离方法,为肝纤维化的研究提供细胞模型.方法 参照国内外方法并加以改良,采用酶灌注预消化及随后的震荡充分消化,合并Medimachine系统制成单细胞悬液.用人淋巴细胞分离液直接铺梯度,采用单层梯度离心法一步分离HSC.结果 两只小鼠HSC得率可达1×106个,台盼蓝染色显示细胞活率达92%.初分离的HSC在328 nm激发光下自发蓝绿色荧光,油红染色及结蛋白免疫细胞化学染色鉴定纯度达90%.结论 建立了一种实用的小鼠HSC分离方法,可用于肝纤维化和原代HSC的生物学行为研究.该方法简便、实用、高产,不需特殊设备,便于推广应用.     

TLR4基因的shRNA对内毒素刺激下RAW264.7细胞TLR2表达的影响及机制

目的 观察针对Toll样受体4的发夹结构RNA(short hairpin RNA,shRNA)对内毒素刺激后小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞Toll样受体2表达的影响,并探讨其机制.方法 将携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)及shRNA克隆位点的质粒pEGFP/TLR4-siRNA,运用脂质体Lipofectamine2000转染至小鼠巨噬细胞系RAW264.7.转染24 h后予新霉素(G418)筛选获取稳定转染细胞株.然后将细胞分为三组:空白组(Blank group),未转染细胞LPS刺激组(LPS group)和稳定转染细胞LPS刺激组(LPS-TLR4-siRNA group),采用荧光定量PCR及流式细胞学方法检测各组细胞TLR2 mRNA和蛋白的表达,Western blot检测NF-κB p65的表达,同时用ELISA方法检测细胞分泌的TNF-α水平的变化.结果 将pEGFP/TLR4-siRNA转染至RAW264.7细胞后,增强型荧光蛋白的表达为(45.25±9.23)%.LPS-TLR4-siRNA组细胞的TLR2mRNA及蛋白的表达均明显低于LPS组(P＜0.05),同时NF-κB p65表达下调及分泌TNF-α的水平下降(P＜0.01).结论 针对TLR4 mRNA的shRNA能降低LPS刺激下的RAW204.7细胞TLB2的表达.     

GFAP启动子介导EGFP靶向肝星状细胞治疗肝纤维化的价值探索

目的探索体内特异性靶向肝星状细胞(HSC)治疗肝纤维化的技术方法。方法建立四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化模型,构建胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子调控增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体,采用尾静脉高压注射方法将EGFP表达裸质粒转染到纤维化小鼠的肝脏。荧光显微镜观察EGFP在肝脏的表达及免疫荧光共定位,观测EGFP与HSC标志蛋白(DESMIN)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的共定位。结果 EGFP与DESMIN和α-SMA共定位说明EGFP主要在HSC中表达,GFAP启动子能够调控外源基因在体内靶向HSC。结论 GFAP启动子介导体内靶向HSC,治疗肝纤维化策略具有临床应用的潜力。     

慢性乙型肝炎患者肝组织中TGF-β1的表达分析

目的：观察转化生长因子β1(TGF-β1)在慢性乙型肝炎患者肝组织中的表达，为肝纤维化的发生和发展机制提供进一步的实验依据。方法：实验采用免疫组化法检测慢性乙型肝炎患者肝穿刺组织中TGF-β1的表达及其变化规律。结果：TGF-β1阳性着色定位于细胞质，主要分布于肝脏非实质细胞中，包括内皮细胞、星状细胞、成肌纤维细胞。TGF-β1的表达随着炎症和纤维化评分增加而增强，且集中在炎症程度较重的门管区。结论：慢性乙型肝炎患者肝组织升高的TGF-β1主要由非实质细胞产生。TGF-β1的表达与肝组织炎症和纤维化程度呈正比。     

头部围针对偏瘫的康复效果观察

目的探讨头部围针结合体针在偏瘫康复中的作用。方法90例患者分为头部围针体针结合康复组（实验组），焦氏头针体针结合康复组（对照组1），及康复组（对照组2）。判定标准为上田敏功能评价、日常生活活动能力（ADL）评定；头部围针组还进行汉密尔顿抑郁量表治疗前后评定。结果3组治疗前后功能评分有显著性差异，组间比较实验组ADL及下肢功能的恢复优于其他两组，上肢功能恢复无显著性差异。实验组治疗前后抑郁量表评分有显著性差异。结论头部围针是有效的疗法之一。     

索他洛尔治疗心律失常疗效观察

应用索他洛尔治疗房、室性心律失常59例。用药前、后分别测血压、心率、心电图QTc、24小时动态心电图及肝、肾功能等血生化指标。结果房性心律失常者有效率为60%,室性心律失常者有效率为87.2%,总有效率78.0%。用药过程中仅有心率减慢、QTc延长及早期收缩压下降。索他洛尔治疗房、室性心律失常安全、有效,剂量以160mg/d为宜。     

甲基强的松龙治疗毛细支气管炎疗效观察

在常规治疗基础上采用甲基强的松龙治疗毛细支气管炎28例,结果疗效与常规治疗的28例相比,有显著差异(P<0.05)。     

健康教育对骨折病人康复锻炼依从性的影响

[目的]研究健康教育对骨折病人康复锻炼依从性的影响。[方法]将240例骨折病人随机分为实验组和对照组,实验组给予系统化、针对性的康复教育,对照组进行常规教育,统一发放问卷,比较两组病人健康教育前后康复知识掌握情况和依从性的差异。[结果]实验组出院后康复知识得分、依从性得分均高于对照组,经比较差异有统计学意义（P〈0.01）。[结论]对骨折病人实施健康教育有利于提高病人康复锻炼的依从性,促进骨折愈合。     

健康教育对骨折病人康复锻炼依从性的影响

[目的]研究健康教育对骨折病人康复锻炼依从性的影响.[方法]将240例骨折病人随机分为实验组和对照组,实验组给予系统化、针对性的康复教育,对照组进行常规教育,统一发放问卷,比较两组病人健康教育前后康复知识掌握情况和依从性的差异.[结果]实验组出院后康复知识得分、依从性得分均高于对照组,经比较差异有统计学意义(P<0.01).[结论]对骨折病人实施健康教育有利于提高病人康复锻炼的依从性,促进骨折愈合.     

游泳对新生儿情绪影响的研究

新生儿游泳是近一二年新开展的保健活动 ,它能满足新生儿的心理要求 ,有利于其良性情绪的发展[1] 。我院对此进行了研究 ,现报道如下。1　对象和方法1.1　研究对象　选择 2 0 0 4年 2月— 2 0 0 4年 5月在南京医科大学第一附属医院正常分娩或剖宫产出生的足月正常新生儿 2 0 0例 ,经家属同意 ,签署知情同意书。按出生时间先后分实验组(游泳组 )和对照组 (沐浴组 ) ,每组 10 0例 ,均为母婴同室 ,母乳喂养 ,1h后进行新生儿Apgar评分均 >8分 ,两组新生儿出生体重无统计学差异。1.2　研究方法　研究组新生儿出生后第 2天给予新生儿游泳 ,每天 1…     

康复训练时间选择对治疗脑卒中吞咽困难的影响

目的探讨脑卒中后吞咽困难康复训练的最佳时间。方法将96例患者随机分为3组,除常规治疗外,分别在发病后1、3、5 d给予康复训练,并评价疗效。结果治疗4周后,3 d组较其他组吞咽评分比较差异有统计学意义（P〈0.05）。3组疗效比较差异有统计学意义,3 d组疗效最好,有效率为90.63%。结论脑卒中后吞咽困难第3天开始进行康复训练较为合理。     

激光对血浆巯基物质的影响

目的 探讨低能量激光血管内照射 (IntravascularLaserIrradiationofBlood ,1L 1B)对血浆巯基物质的影响。方法　对球囊损伤动脉内膜犬行 1L1B ,观察 1L1B对血浆巯基物质的影响。结果　 1L1B后血浆巯基物质含量可显著升高 (P <0 .0 1 )。结论　 1L1B可提升血浆巯基物质含量。     

Commentary on the Impact of Obesity on PediatricDiabetes

While conventionally most children diagnosed with diabetes are thought to have type 1 diabetes mellitus (T1DM), with the increased prevalence of obesity, more are being affected by type 2 (T2) DM. Obesity leads to increased insulin resistance, which over time can lead to progressive β-cell failure and ultimately T2DM. However, patients developing T1DM may also be obese, making both the proper classification and management of diabetes in children more challenging. In this commentary, the authors discuss the impact ofobesity on the presentation of pediatric diabetes, how to differentiate between T1DM and T2DM, and the proper management of both diseases.     

Data on the effect of Probon on respiration

On the basis of the results of earlier published and recent examinations it could be concluded that among analgesics Probon is the first of choice especially in case of chronic pain accompanying chronic respiratory tract diseases. The value of the drug is also supported by the fact that the number of patients suffering from chronic obstructive respiratory failure increases continuously, since the equilibrium of these patients is very unstable; the smallest injury, such as an increase in secretion, a decrease in diaphragmatic movement, or chest expansion caused by pain, or even drug-induced respiration depression, may very easily upset this equilibrium.