HIV-1假病毒包装方法的探讨

目的：通过不同方案包装HIV-1假病毒,确定获得高重复性、高稳定性和高滴度假病毒的方法。方法从转染效率影响因素出发,通过不同的转染方案,利用pNL4-3 LucR-E-质粒与VSV-G质粒共转染293细胞包装病毒,分别于48 h和72 h收取假病毒并重新感染293细胞,48 h后测荧光素酶报告基因。结果成功包装出HIV-1假病毒,不同包装方案的病毒滴度不同,测得报告基因最高接近107 RLUs。结论应用PEI转染试剂、大提质粒pNL4-3︰VSV-G为4︰1时,转染效率最高,包装的假病毒滴度最高。     

两种机型的流式细胞仪测定CD4T细胞计数的比较研究

目的多种流式细胞仪机型应用于艾滋病防治工作中，比较不同机型间的免疫数据乃是当前迫切需要解决的问题。方法应用BDFACS Calibur和Beckman Coulter XL两种主流机型流式细胞仪，对阜阳市现场采集的183份标本[正常人41份，艾滋病病毒（HIV）阳性感染者142份]进行平行检测，观察上述两种机型对检测同一标本CD4绝对计数的影响。结果BD和XL两种机型的绝对计数结果比较显示，正常人CDd绝对计数在两种机型间的差异范围：≤10％的占57％，而〉10％占43％；检测142份HIV阳性标本，CD4绝对计数差异≤10％的占84％；而差异〉10％的占16％。在正常人标本组两机型数据间相关系数r=0．97；HIV阳性标本组数据间相关系数r=0．98，回归方程X系数均接近1。统计学检验显示，两种机型检测数据无显著性差异（P〉0．05）。结论两种机型间数据高度相关且数值相近．所测定的HIV感染者CD4细晌绡对计数可以百用．     

采用集合转化的方法构建HIV-1蛋白酶区和反转录酶区T-A克隆载体

DNA重组技术是将两个或多个单独的DNA片段连接起来产生一个能在特定宿主中自主复制的DNA分子。重组DNA分子最简单的构建方法是将基因片段克隆到质粒或噬菌体等克隆载体上。常用的质粒载体有pBR322、pUC和pGEM等。这些载体含有不同的多克隆位点,适于将含有不同酶切位点的DNA片段连接起来[1]。     

HIV-1 B''亚型R5或R5/X4嗜性毒株在GHOST细胞的感染性分析

目的分析我国HIV-1B′亚型R5或R5／X4嗜性毒株在GHOST细胞的感染性。方法采用传统的共培养方法从HIV-1感染者PBMC中分离并培养病毒，用表达CD4和趋化因子受体CCR5或CXCR4的GHOST细胞系，测定毒株的辅助受体利用情况，使用相同病毒量即2mg的HIV-1 p24分别感染表达不同受体的GHOST细胞系，通过流式细胞仪检测分析绿色荧光蛋白（GFP）的表达反映病毒感染细胞的能力。结果35例B′亚型毒株利用CCR5受体，占22例（62．85％），双嗜性即CCR5／CXCR4均阳性占13例（37．15％）。GHOST-R5／X4细胞的感染性分析结果显示，R5／X4双嗜性毒株的感染性明显高于CD4〉200／μl的R5毒株的感染性（P〈0．05）；R5／X4毒株与CD4≤200／μl的R5毒株感染性比较差异无统计学意义（P〉0．05）；CD4〉200／μl的R5毒株与CD4≤200／μl的R5毒株感染性比较差异有统计学意义（P〈0．05）；GHOST-CCR5细胞感染性分析结果显示：R5／X4双嗜性毒株的感染性明显下降，与CD4〉200／μl的R5毒株的感染性比较差异无统计学意义（P〉0．05）。利用相同剂量的双嗜性毒株分别感染R5、X4或R5／X4的GHOST细胞系，显示双嗜性毒株可同时利用CCR5和CXCR4辅助受体，但69．23％的R5／X4毒株以CCR5受体为主，30．77％的R5／X4毒株以CXCR4受体为主。结论HIV-1B′亚型R5／X4病毒不仅有更广泛的宿主细胞嗜性，而且在GHOST-R5／X4细胞中感染性明显提高。持续使用CCR5受体的毒株在疾病进展的过程中虽然辅助受体的利用是一样的，但病毒感染细胞的能力增加。     

北京市男男性行为人群庚型肝炎病毒感染率和流行亚型分析

本研究仅分析了MSM经性传播GBV-C的情况, 并不包括经血传播的实例;此外对GBV-C变化及其影响HIV/AIDS进程由于观察时间短尚难有定论。这些均是本文的不足。因此对该人群队列的长期观察可进-步揭示GBV-C和HIV感染间的相关性。     

半也糖基坑CD3单抗的制备及体内趋肝性研究

目的 了解半乳糖基抗CD3单抗－TLL复合物（Gal-Anti-CD3-McAb－TIL） 的体内趋肝细胞性。方法 制备半乳糖基抗CD3单抗（Gal-Anti-CD3-McAb）,采用苯酚－硫酸法测其糖密度;经动物外周静脉分别注入用^125I标记的抗CD3单抗（Anti-CD3-McAb）和用^131I标记的Gal-Anti-CD3-McAb,分别测定两者在动物体内各脏器的放射活性。结果 Gal-Anti-CD3-McAb的糖密度值为58．12;外周静脉注射给药,Anti-CD3-McAb趋于肺内浓聚,而Gal-Anti-CD3-McAb有显著趋肝性,且于靶器官有较长时间停留。结论 经外周静脉途径注射,Gal-Anti-CD3-McAb有显著的体内趋肝细胞性,其中半乳糖基与肝结合蛋白所介导的受体－配体反应在Gal-Anti-CD3-McAb的趋肝细胞过程中发挥主导作用。     

进口化妆品的皮肤刺激性试验结果分析

对 90 2份进口化妆品皮肤刺激性试验的分析结果表明 ,进行急性皮肤刺激性试验的 175份化妆品中 114份 (6 5 1% )未呈现刺激性 ,6 1份 (34 9% )呈现轻度刺激性 ,进行多次皮肤刺激性试验的 72 7份化妆品中 2 34份 (32 2 % )未呈现刺激性 ,呈现轻度刺激反应的 493份 (6 7 8% ) ,以唇膏、眼影、粉底液和粉饼类化妆品为主     

HIV两类反转录酶抑制剂耐药性及耐药检测研究进展

由于上世纪90年代全球开展艾滋病高效抗反转录病毒治疗（highly antiretroviral therapy，HAART），使艾滋病的病死率显著下降，感染者的免疫功能得以重建，生存时间明显延长，生存质量显著改善。但是治疗过程中的多种因素可以导致抗病毒治疗的失败，耐药性是其中的重要问题。     

抗人CD4D1D2结构域多克隆抗体对HIV-1的抑制作用

目的研究抗人CD4DID2结构域多克隆抗体对HIV-1的抑制作用。方法经overlappingPCR构建人鼠嵌合型CD4质粒pcDNA3．1-mhD1D2m和pcDNA3．1-mhD2m，利用pcDNA3．1／V5-His—TOPO质粒载体的通用引物双向测序，测序结果用vectorNTI8．0软件与预期序列作比对，并通过假病毒感染实验检测其介导病毒感染能力，实验数据采用SPSS11．5统计学软件进行χ^2检验。pcDNA3．1-mhDID2m和pcD—NA3．1-mhD2m经DNA免疫BALB／c小鼠，所获多抗血清经假病毒中和实验检测其抗HIV-1中和能力，经FACS检测其与CD4抗原结合能力。结果所构建人鼠嵌合型CD4质粒pcDNA3．1-mhD1D2m能够介导HIV-1假病毒感染。质粒pcDNA3．1-mhD1D2m免疫小鼠8周后所获得的多抗血清稀释100倍后，对HIV-1毒株抑制率为76％～95％。质粒pcDNA3．1-mhD2m免疫小鼠所获得的多抗血清则无明显的中和作用。FACS检测显示mhD1D2m多抗血清与TZM-b1细胞表面的CD4可以特异性结合。结论抗人CD4D1D2结构域多克隆抗体对H1V-1具有较强的抑制作用，为AIDS治疗和疫苗研发提供实验依据。     

127例HIV-1 B′亚型慢性感染者血浆中和水平及其与疾病进展的关系

目的探讨艾滋病病毒1型B′亚型（HIV-1 B′）慢性感染人群连续两年血浆中和能力的变化,及其与疾病进展的关系。方法通过对两年前后127例HIV-1 B′亚型感染者进行CD4和病毒载量（VL）的检测,采用基于TZM-b1细胞的中和实验方法,检测感染者血浆分别针对HIV-1临床分离株1597和实验室适应株SF33两种病毒的中和能力。通过分析中和50%病毒进入细胞的血浆浓度（EC50）与CD4计数和VL的相关性,阐明血浆中和水平与疾病进展的关系。结果2005年和2007年CD4分别为（454±131）个/μl和（440±182）个/μl（t=1.02,P=0.309）,VL（log10）分别为（4.03±0.89）拷贝/ml和（4.21±0.89）拷贝/ml（t=2.72,P=0.008）;血浆对1 597株有中和活性的分别有91例（71.65）和75例（66.93%）,其EC50分别为（65.15±0.51）和（55.59±0.59）（t=1.16,P=0.248）;对SF33株有中和活性的分别有108例（85.04%）和101例（85.04%）,其EC50为（205.65±0.52）和（139±0.47）（t=3.57,P〈0.001）。聚类分析显示,EC50与VL的关联性较强,但EC50的变化与VL的变化的相关性没有统计学意义（SF33∶r=0.07,P=0.41;1597∶r=0.12,P=0.18）。结论从2005年到2007年,慢性HIV-1B′亚型感染者的VL显著升高,尽管对病毒的中和水平降低,但血浆中和水平的降低与VL的升高没有直接的相关性。