16S rDNA测序技术在婴儿肠道微生态研究中的应用

目的探讨16SrDNA测序技术在新生儿、婴儿肠道微生态研究中的应用。方法于生后3天、1月、6月、1岁时收集2例健康婴儿粪便标本共8份,提取细菌总DNA,以Illumina Hiseq 2000为测序平台,采用新一代高通量16SrDNA宏基因组测序技术对V6可变区测序,并进行生物信息分析(物种分类和丰度分析;多样性分析)。结果 8份样品共产生原始测序数据为1 027.47 Mbp,Unique tags序列数量均值为58630,OTU数量63~209;优势菌门为Proteobacteria和Firmicutes;在科水平,1%的物种1个月之内2~4种,6月后达7~10种;1号婴儿一直以Enterobacteriaceae占优势,2号婴儿优势菌群包括Enterobacteriaceae、Lachnospiraceae、Streptococcaceae和Bacteroidaceae;4个时间点的npShannon和Simpson指数分别为1.17、1.29、2.16、2.51和0.43、0.40、0.26、0.14。结论 16SrDNA测序技术能满足新生儿、婴儿肠道微生态研究需求;新生儿、婴儿粪便中含丰富细菌基因组;细菌物种丰度及分类存在个体差异;从出生到1岁,婴儿肠道菌群结构趋向复杂和多样。     

α地中海贫血研究进展

α地中海贫血是一组常染色体隐性遗传病,由α球蛋白链合成减少或缺失致病。好发于地中海、东南亚、非洲和中东等国家,在我国长江以南地区发病率最高,是全球影响最广泛的单基因遗传病之一。缺失1、2、3、4个α地贫基因可呈现不同程度的地中海贫血临床表型。地中海贫血患者有不同程度的贫血,因此,临床上可先进行血清学筛查红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白（MCH）及血红蛋白（Hb）。缺失型和非缺失型的α地贫基因诊断技术日新月异,本文就α地中海贫血的流行病学、分子机制、血液学筛查及其基因诊断技术进展进行了综述。     

浸润性乳腺癌组织中LAMA2基因甲基化水平及其与患者临床病理特征和预后的相关性

目的:探讨浸润性乳腺癌患者组织中基因编码层粘连蛋白2（LAMA2）基因的甲基化率并分析其临床意义。方法:选取101例行择期根治术治疗的浸润性乳腺癌患者为研究对象,采用焦磷酸测序和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测癌组织及癌旁组织中LAMA2的甲基化率及其表达情况,并分析其与临床病理特征的相关性以及预后因素。结果:101例乳腺癌组织中LAMA2甲基化率为96%,甲基化率显著高于相应的癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05)。同时,在乳腺癌组织中,LAMA2启动子区域高甲基化的癌组织样本中LAMA2的mRNA表达较低（P＜0.05）。LAMA2甲基化与肿瘤直径、腋窝淋巴结转移、组织学分级和HER-2表达相关,差异有统计学意义(P均<0.05)。Cox 比例风险模型分析提示,淋巴结转移和LAMA2甲基化是乳腺癌的独立预后因素(RR=32.127、1.222,95%CI=1.296~796.112、1.103~1.355,P=0.034、0.000)。结论:LAMA2甲基化及其异常表达可能与乳腺癌有关。LAMA2与乳腺癌的发生发展密切相关,首次报道其甲基化程度可作为乳腺癌恶性程度和预后的潜在生物学标志。     

探讨磁共振3D LAVA技术对Budd-Chiari综合征的诊断价值

目的探讨MR 3D LAVA(LAVA)动态强化扫描对于Budd-Chiari综合征的诊断价值。方法 21例Budd-Chiari综合征患者均行MR LAVA动态强化扫描,对各时相扫描分别进行MIP、MPR处理,并对图像质量和血管显示情况进行分析。结果动脉时相的3D MIP对肝动脉观察的满意率达90.4﹪,第三时相冠状位MIP与多层面重组结合对门静脉、下腔静脉和肝静脉的显示满意率达100%。结论对于Budd-Chiari综合征,MR 3D LAVA动态强化扫描技术不仅能准确地显示肝动、静脉的解剖形态及病变,同时还能全面地观察肝脏及周围其他脏器的情况。     

受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O基因甲基化与乳腺癌细胞株化疗敏感性的关系

目的探讨受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O（PTPRO）基因不同甲基化状态的乳腺癌细胞株对紫杉醇的敏感性。方法应用甲基化特异性PCR,检测MCF-7、MDA-MB-231和Hs578t乳腺癌细胞株中PTPRO基因启动子Cp G岛甲基化状态,并用RT-PCR法检测PTPRO mRNA表达。采用MTT法检测MCF-7、MDA-MB-231和Hs578t乳腺癌细胞株对0.000 6、0.003 0、0.015 0、0.075 0、0.375 0、1.875 0、9.350 0、46.750 0、234.000 0 mmol/L紫杉醇的敏感性,以及对细胞株进行去甲基化实验后紫杉醇抑制率的改变。两组间均数比较采用配对t检验;在检验方差齐性的前提下,多组间均数比较用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD检验。结果乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞株中PTPRO基因甲基化,而乳腺癌Hs578t细胞株中PTPRO基因无甲基化。用紫杉醇处理细胞株后再检测PTPRO启动子甲基化情况,结果显示MCF-7、MDA-MB-231细胞株PTPRO基因甲基化率明显降低[（0.861±0.109）比（0.037±0.019）,t=23.326,P=0.000;（0.758±0.114）比（0.086±0.010）,t=16.109,P=0.000]。并且,MCF-7、MDA-MB-231细胞株经5-杂氮脱氧胞嘧啶（DAC）处理后,PTPRO mRNA表达水平明显高于DAC处理前[（0.033±0.006）比（0.166±0.016）,t=28.338,P=0.000;（0.052±0.006）比（0.587±0.087）,t=17.257,P=0.000],其表达水平与启动子Cp G岛甲基化状态有关。紫杉醇对MDA-MB-231、MCF-7及Hs578t细胞株的半数抑制浓度（IC50）分别为8.52、5.87和4.52 mmol/L。不同浓度紫杉醇对Hs578t细胞株的抑制率均比MCF-7和MDA-MB-231细胞株高（F=129.93、182.40、46.26、49.26、33.60、80.31、160.05、69.96、79.98,P均=0.000）。去甲基化实验显示：DAC处理MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞株后,不同浓度紫杉醇对细胞株的抑制率与处理前相比,差异均有统计学意义（MCF-7：t=14.195、8.328、7.042、6.385、5.450、8.557、4.788、13.351、11.887,P均〈0.050;MDA-MB-231：t=16.324、30.443、9.177、12.694、9.528、11.912、10.260、18.109?     

未培养羊水荧光原位杂交快速检测60例胎儿常见染色体数目异常

目的 应用细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)克隆自行制备荧光探针,对胎儿常见染色体数目异常(13,18,21,X,Y)行快速产前诊断.方法 利用中国医学遗传学国家重点实验室BAC库中相应染色体特异位点克隆,自行制备荧光探针.经外周血淋巴细胞染色体杂交验证后,用于胎儿未培养羊水的快速荧光原位杂交fluorescence in situ hybridization,FISH)检测,已检测60例羊水标本.结果 所有探针特异性均为100%,杂交成功率为97.86%;FISH结果与常规核型分析一致,检出21三体2例,18三体1例.有两例涉及其它染色体的结构异常未能检出.结论 自制探针用于未培养羊水快速FISH,使用标本量少、快速、简便,可有效检出上述5种染色体的数目异常,但本法不能检出其他染色体的数目异常和结构异常,其应用仍有一定局限性.     

乳腺癌HOXA4基因甲基化的检测及其临床意义

目的探讨乳腺癌患者HOXA4基因启动子甲基化的情况及其与临床病理特征的相关性。 方法运用NEBNext^? Ultra? RNA Library Prep Kit for Illumina^?进行基因表达芯片测序,运用随机数字表法选择2014年深圳市宝安区妇幼保健院收治的9例乳腺癌患者,分析癌组织与相应癌旁组织异常差异表达的基因。运用Illumina Infinium HD Methylation 450K Assay进行DNA甲基化测序,分析乳腺癌甲基化差异基因。基于肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库信息,分析乳腺癌的差异表达基因和差异甲基化基因。挑选显著高甲基化与低表达的基因,结合生物信息学,确定HOXA4为候选基因。运用随机数字表法收集2014—2017年深圳市宝安区妇幼保健院收治的另外86例乳腺癌患者,采用焦磷酸测序法和RT-PCR,检测乳腺癌组织及其癌旁乳腺组织中HOXA4基因甲基化率和mRNA表达,用Fisher确切概率法分析甲基化率与患者临床病理特征的关系。用Cox比例风险模型进行风险因素的单因素和多因素分析。分别用0、0.5、1、5、10、20 μmol/L的甲基化抑制剂RG108处理乳腺癌MCF-7细胞5 d后,检测HOXA4 mRNA的表达。 结果基因表达数据芯片分析发现在乳腺癌组织中有1 680个显著上调的基因和1 249个下调基因,整体水平上在不同区域乳腺癌患者甲基化水平较癌旁组织高(P均<0.001)。86例乳腺癌组织中HOXA4基因的甲基化率为94% (81/86),其中,30例高甲基化,52例低甲基化;而在对应癌旁组织中,HOXA4基因甲基化率为57%(49/86),其中49例低甲基化,无高甲基化(P<0.001)。有HOXA4甲基化组的癌组织样本中HOXA4 mRNA表达低于无HOXA4甲基化组的癌组织样本(P＝0.003)。HOXA4基因甲基化水平与乳腺癌淋巴结转移、ER表达有关(P＝0.039、0.017)。单因素分析结果显示患者的TNM分期、组织学分级、淋巴结转移及HOXA4甲基化是DFS的危险因素(RR＝4.008,95%CI＝1.296～12.393,P＝0.016;RR＝10.111,95%CI＝2.607～39.217,P＝0.001;RR＝4.588,95%CI＝1.201～17.523,P＝0.026;RR＝1.051,95%CI＝1.007～1.098,P＝0.024)。多因素分析显示组织学分级是乳腺癌患者DFS的独立预后因素(RR＝14.461,95%CI＝2.429～86.100,P＝0.003)。采用不同浓度的RG108来处理MCF-7细胞后,各组HOXA4 mRNA表达比较,差异有统计学意义(χ²＝4.472,P＝0.029)。 结论HOXA4基因启动子甲基化在乳腺癌的发生、发展中起着重要作用,有潜力作为新的分子生物学指标,用于乳腺癌临床诊断。     

羊水细胞培养技术的临床应用

目的探索羊水细胞染色体培养改良方法,提高培养、收获成功率,满足临床诊断需要。方法对493例羊水标本进行细胞培养和染色体收获,并对实验细节进行优化,建立标准操作程序。结果羊水培养成功率99.8%（492/493）,发现21-三体6例、18-三体2例、其他异常2例。结论采取严格质量控制;保留换液后的上清,解决因收获失败无法诊断的问题;采取肝素抗凝等,消除母血细胞干扰,可使羊水细胞培养成功。     

双胎妊娠母婴高危因素分析

双胎妊娠高危因素较多,较单胎妊娠风险性大,妊娠期及分娩期并发症多,围生儿死亡率发生率高,胎儿生长发育差,严重威胁母婴安全。本文对本院6年来住院分娩的双胎妊娠与单胎妊娠母婴高危因素进行回顾性分析。