肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白1在马兜铃酸I跨细胞转运及其在细胞毒性中的作用

目的 探讨肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白1（OAT1）在马兜铃酸I（AAⅠ）跨细胞转运中的作用及其毒效关系。 方法 体外构建重组大鼠OAT1（rOAT1）基因的真核表达质粒,将含rOAT1质粒导入人胚肾细胞(HEK-293)。观察rOAT1及被其特异性底物对氨基马尿酸（PAH）阻断后对AAⅠ摄取的作用。并分别观察不同浓度AAⅠ对转染细胞caspase-3 mRNA表达和细胞凋亡的影响。Western 印迹检测转染细胞rOAT1表达;毛细管电泳法检测细胞内PAH 浓度;高效液相色谱法（HPLC）检测细胞内AA浓度。RT-PCR检测细胞caspase-3 mRNA表达;流式细胞法（Annexin V-FITC）检测细胞凋亡水平。 结果 转染rOAT1 质粒的HEK-293细胞特异性表达rOAT1。以40、80、120、160 mg/L AAⅠ分别刺激细胞45 min,转染rOAT1组细胞内AAⅠ浓度显著高于空载体组（均P < 0.05）。以 120 mg/L AAⅠ分别刺激细胞30、60、90、120 min,转染组细胞AAⅠ浓度显著高于空载体组（均P < 0.05）。加入PAH （5 mmol/L）特异性阻断OAT1 35 min后,以上述不同浓度 AAⅠ分别刺激转染细胞,细胞内AAⅠ浓度显著低于未阻断组（均P < 0.05)。以上述不同浓度 AAⅠ分别刺激转染细胞和空载体细胞,两组细胞caspase-3 mRNA表达及细胞凋亡随AAⅠ浓度上升而增加,转染组细胞凋亡率显著高于空载体组（均P < 0.05）。 结论 转染含rOAT1 质粒的HEK-293细胞表达rOAT1。AAⅠ呈浓度依赖性和时间依赖性进入rOAT1转染细胞,并呈剂量依赖性诱导OAT1表达细胞凋亡。提示OAT1介导AAⅠ的肾细胞转运及细胞毒性。     

人增生性瘢痕成纤维细胞最佳转染条件:α_1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染的实验

目的:选择α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳条件。方法:实验于2003-10/2004-06在中山大学附属第一医院外科实验室进行。以阳离子脂质体Oligofectamine转染体外培养的第2～6代人增生性瘢痕成纤维细胞,应用荧光显微镜记录荧光素在细胞内的空间分布,用流式细胞术作荧光细胞计数和观察细胞凋亡,通过不同细胞接种数量、反义寡核苷酸浓度和脂质体量转染条件的比较,逐步获得各转染过程中的最佳条件。结果:①在6孔板上转染反义寡核苷酸,所用各转染条件未引起细胞凋亡。②其最佳转染条件为:接种细胞数量32.25×104/皿,反义核酸浓度150nmol/L,脂质体量3μL/孔;转染后细胞浆和细胞核内均有荧光素聚集。结论:获得α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染的人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳转染条件,可为下一步试验提供基础。     

环磷酰胺衍生物4-氢过氧环磷酰胺诱导狼疮肾炎患者肾间质成纤维细胞凋亡

目的和方法：探索环磷酰胺能否通过诱导细胞凋亡来减轻纤维化病变，观察环磷酰胺衍生物４－氢过氧环磷酰胺（４－ｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｙｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，４－ＨＣ）对狼疮性肾炎患者肾间质成纤维细胞凋亡的影响。结果：４－ＨＣ可明显促进其凋亡。结论：这为临床应用环磷酰胺治疗狼疮性肾炎，减轻肾间质纤维化，以迟缓肾功能恶化，提供新的实验证据。     

急性冠脉综合征患者高表达的CD40L和炎症因子相关性

目的 检测急性冠脉综合征(ACS)患者CD4+T细胞CINOL的表达率、其血清可溶性CD40配体(sCD40L)和高敏C反应蛋白(hsCRP)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的浓度,分析CD40L(sCD40L)与炎症因子的相关性,探讨CD40/CD40L在ACS发病中的作用及可能途径.方法 采用前瞻性研究方法,选取2006.10-2007.4中山大学附属第一医院急诊科、心血管医学部冠心病患者32例,包括稳定性心绞痛(SAP)7例、不稳定性心绞痛(UAP)14例、急性心肌梗死(AMI)11例.正常对照组(CON)为与患者年龄、性别相匹配的健康志愿者8例.所有受试者均排除感染、肿瘤、风湿、肝肾功能不全,未使用类固醇和免疫抑制剂等.流式细胞分析术(FCM)检测CD4+T细胞表达CD40L的阳性细胞率,ELISA法检测血清sCD40L、ICAM-1和VCAM-1浓度,免疫比浊法检测血清hsCRP浓度.所有资料使用SPSS 11.0进行统计学分析.结果 ANI、UAP、SAP、CON组CD4+T细胞中表达CD40L的阳性细胞率(%)分别为8.60±3.02、3.24±1.13、2.18±1.80、0.59±0.18,AMI组显著高于其他3组(P＜0.05),UAP组亦显著高于CON组(P＜0.05);4组血清sCD40L浓度分别为14.47±8.00、8.06±6.96、7.32±3.58、4.48±1.49(ng/mL),ANI组明显高于其他3组(P＜0.05);4组血清:hsCRP浓度分别为20.30±7.57、14.04±8.03、3.78±4.99、O.93±0.77(mg/L),AMI组显著高于其他3组(P＜0.05),UAP组亦显著高于SAP组与CON组(P＜0.05);4组血清ICAM-1浓度分别为418.09±222.19、212.86±128.43、165.04±32.12、108.62±62.27(ng/mL),AMI组显著高于其他3组(均P＜O.05),UAP组亦高于CON组(P＜0.05);4组血清VCAM-1浓度分别为5540.02±2614.65、3760.95±1915.01、4167.27±2084.48、2405.65±870.45(ng/mL),AMI组显著高于CON组(P＜0.01);AMI组CD4+T细胞中表达CD40L的阳性细胞率与VCAM-1呈明显正相关性(r=0.730,P=0.011),其血清sCD40L与hsCRP、ICAM-1、VCAN-1呈明显正相关性(r=0.677,P=0.011;r:0.901,P=0.000;r=0.714,P=0.014).结论 急性冠脉综合征患者CD4+T细胞CINOL的表达率和血清sCINOL浓度升高,且与血清hsCRP、ICAN-1、VCAM-1呈明显正相关;在ACS发生中起作用,此和hsCRP、ICAM-1、VCAN-1等有关,而CD40L/sCD40L可望作为冠心病危险性的预测因子.     

狼疮肾炎患者血清IL-16水平的检测及其临床意义

目的：探讨狼疮肾炎患者血清白细胞介素－16（IL－16）水平变化及其临床意义。方法：狼疮肾炎患者48例，按照系统性红斑狼疮疾病活动指数（SLEDAI）分为狼疮肾炎活动组28例。狼疮肾炎静止组20例；另选非狼疮肾炎组12例，正常对照组10名，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组的血清IL－16水平。结果：狼疮肾炎活动组、静止组血清IL－16水平均较正常对照组显著增高（P＜0.05），狼疮肾炎活动组血清IL－16水平与SLEDAI成显著正相关（r=0.839、P＜0.01），与血清抗双链DNA抗体水平、尿蛋白及狼疮肾炎肾组织疾病活动指数呈正相关，但狼疮肾炎静止组与非狼疮肾炎组之间血清IL－16水平无统计学差异。结论：狼疮肾炎患者血清IL－16水平增高，可作为评价狼疮肾炎活动的参考指标。     

用流式细胞术检测CD55及CD59表型对诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿的意义

目的：探讨用流式细胞术检测免疫表型对诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿(paroxysmal noctur—nal hemoglobinuria，PNH)的意义。方法：用荧光标记分化群(cluster of differentiation，CD)中的CD55、CD59的单克隆抗体，采用流式细胞术测定25名正常人、28例PHN患者外周中性粒细胞和红细胞膜抗原的表达。结果：PNH患者中性粒细胞CD55、CD59，红细胞CD59表达率较正常人明显降低，且与疾病的严重程度相关。结论：用流式细胞术检测CD55、CD59表型是目前诊断PNH的较直接而又特异、敏感的方法。     

血、尿β_2微球蛋白在小儿常见肾脏疾病中的意义

本文测定了健康儿童血和尿β_2微球蛋白(β_2m)正常值,观察了几种儿科常见肾脏病血和尿β_2m变化。在急性肾炎早期血β_2m可有轻度增高。肾病综合征和IgA肾病有少数病例血和/或尿β_2m增高。狼疮肾炎和过敏性紫癜肾炎部分病例血β_2m增高,而尿β_2m增高更显著。尿毒症病例血β_2m与血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)呈正相关,与肌酐清除率(Ccr)呈负相关。尿β_2m测定肾小管功能较酚红排泄试验和莫氏试验敏感,并能反映出肾小管病理改变。     

细胞间粘附分子—1在不同白血病细胞表面的表达

细胞间粘附分子 1(ＩＣＡＭ 1)属于免疫球蛋白超基因家族 ,是 β2亚家族淋巴细胞相关功能抗原(ＬＦＡ 1)的配体。正常生理功能为淋巴细胞活性提供重要的共刺激信号及调节淋巴细胞迁移。以前我们的研究显示ＬＦＡ 1在各种淋巴增殖性疾病存在异常表达及与疾病的发生、发展有关[1] ,本文进一步观察其配体细胞间粘附分子 1(ＩＣＡＭ 1)在各种白血病细胞的表达及其与临床特征、疗效的关系。1　材料与方法1 1　研究对象　 34例初治或复发急性淋巴细胞白血病 (ＡＬＬ)患者 ,男 18例 ,女 16例 ,中位年龄 32 (17～ 5 8)岁 ,按本免疫室建立的方法进…     

外周血干细胞动员调节CD34^＋细胞β整合素及L—选择素的表达

目的：观察造血干细胞表面粘附分子的变化在外周血干细胞动员中的作用。方法：用双色免疫荧光法研究15例恶性血液病患者经化疗＋G－CSF动员外击血干细胞前后、骨髓和外周血CD34^ 细胞表面β1整合素（CD49d）、β2整合素（CD11a、CD11b）及L－选择素（CD62L）的表达。结果：①动员后第7天CD34^ 细胞表面较动员前CD49d、CD11a、CD62L表达下降;（P＜0．01）,而CD11b无变化（P＞0．05）。②外周血CD34^ 细胞表达CD49d、CD11a、CD11b、CD62L较骨髓低（P＜0．05）。③外周血CD34^ 细胞绝大多数处于GO／G1期,该期的的干细胞CD49d的密度低于S＋G2／M期。结论：化疗＋G－CSF通过粘附分子的变化而使造血干细胞从骨髓进入外周血中。