肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白1在马兜铃酸I跨细胞转运及其在细胞毒性中的作用

目的 探讨肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白1（OAT1）在马兜铃酸I（AAⅠ）跨细胞转运中的作用及其毒效关系。 方法 体外构建重组大鼠OAT1（rOAT1）基因的真核表达质粒，将含rOAT1质粒导入人胚肾细胞(HEK-293)。观察rOAT1及被其特异性底物对氨基马尿酸（PAH）阻断后对AAⅠ摄取的作用。并分别观察不同浓度AAⅠ对转染细胞caspase-3 mRNA表达和细胞凋亡的影响。Western 印迹检测转染细胞rOAT1表达；毛细管电泳法检测细胞内PAH 浓度；高效液相色谱法（HPLC）检测细胞内AA浓度。RT-PCR检测细胞caspase-3 mRNA表达；流式细胞法（Annexin V-FITC）检测细胞凋亡水平。 结果 转染rOAT1 质粒的HEK-293细胞特异性表达rOAT1。以40、80、120、160 mg/L AAⅠ分别刺激细胞45 min，转染rOAT1组细胞内AAⅠ浓度显著高于空载体组（均P < 0.05）。以 120 mg/L AAⅠ分别刺激细胞30、60、90、120 min，转染组细胞AAⅠ浓度显著高于空载体组（均P < 0.05）。加入PAH （5 mmol/L）特异性阻断OAT1 35 min后，以上述不同浓度 AAⅠ分别刺激转染细胞，细胞内AAⅠ浓度显著低于未阻断组（均P < 0.05)。以上述不同浓度 AAⅠ分别刺激转染细胞和空载体细胞，两组细胞caspase-3 mRNA表达及细胞凋亡随AAⅠ浓度上升而增加，转染组细胞凋亡率显著高于空载体组（均P < 0.05）。 结论 转染含rOAT1 质粒的HEK-293细胞表达rOAT1。AAⅠ呈浓度依赖性和时间依赖性进入rOAT1转染细胞，并呈剂量依赖性诱导OAT1表达细胞凋亡。提示OAT1介导AAⅠ的肾细胞转运及细胞毒性。