红细胞生成素对高糖诱导肾小管细胞凋亡的影响

目的 探讨红细胞生成素（EPO）是否可以抑制高糖诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡及其相关机制。 方法 传代培养大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E）,分为正常对照组（NC组）、渗透浓度对照组（OC组）、高糖组（HG组）、高糖+EPO 50 U/ml组（E1组）和高糖+EPO 100 U/ml组（E2组）。免疫荧光检测NRK-52E细胞有无EPO受体（EPOR）表达。Western印迹检测高糖对EPOR表达的影响。流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡指数。荧光探针CM-H2DCFDA检测细胞内活性氧（ROS）的水平。RT-PCR检测bcl-2、bax、capases-3 mRNA的表达。 结果 （1）NRK-52E细胞表达EPOR,且高糖可刺激EPOR表达增加。（2）高糖可诱导NRK-52E细胞凋亡,与葡萄糖相同渗透浓度的甘露醇不能明显诱导细胞凋亡。E1、E2组细胞早、晚期凋亡率显著低于HG组（P < 0.05）。（3）高糖刺激 NRK-52E细胞后,细胞内ROS产生增多,bcl-2 mRNA的表达下调,bax、caspase-3 mRNA的表达上调。EPO可以抑制细胞内ROS的产生,上调bcl-2 mRNA 表达,下调bax、caspase-3 mRNA 表达。 结论 EPO可能通过EPOR的介导,缓解高糖诱导的氧化应激,上调bcl-2 mRNA表达,下调bax、caspase-3 mRNA表达,抑制NRK-52E细胞凋亡。     

红细胞生成素对马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞凋亡的保护机制研究

目的探讨红细胞生成素（EPO）抑制马兜铃酸（AA）所诱导的肾小管上皮细胞（LLC—PK1）凋亡的作用机制。方法以不同浓度AA（5、10、20mg／L）刺激LLC—PK1细胞株，同时培养体系中加入不同浓度的EPO（5、10、20U／m1），另设对照组。各组细胞培养24h后，TUNEL法原位检测细胞凋亡情况；流式细胞仪检测凋亡细胞的比例；Western印迹检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶（caspase）3、bcl—xL的蛋白表达。结果（1）与对照组（6．09±1．84）％相比，AA5mg／L组TUNEL阳性细胞比例增加【（9．79±2．58）％】；AA10、20mg／L阳性细胞比例显著增加[（37．67±8．23）％、（62．95±8．29）％】，与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。AA10mg／L组细胞经EPO10、20U／ml干预后，阳性细胞比例显著下降f（22．41±3．47）％、（14．63±2．66）％，P〈0．051；AA20mg／L组细胞经不同浓度EPO干预后，阳性细胞比例无显著变化。（2）与对照组相比，AA5mg／L组细胞caspase-3的活性表达有少量增加；AA10mg／L组细胞caspase-3显著增加；而AA20mg／L组caspase-3表达降低。与AA10mg／L组相比，EPO10U／ml和EPO20U/ml干预后，细胞caspase-3的表达显著降低。（3）与对照组相比，AA5mg／L组细胞bcl—xL的表达明显增加；AA10mg／L组细胞bcl-xL表达减少；AA20mg／L组细胞bcl—xL表达显著减少。与AA10mg／L组相比，EPO5U/ml干预后，细胞bcl-xL有所增加；EPO10U／ml和EPO20U／ml干预后，细胞bcl—xL的表达显著增加。结论EPO可能通过促进抗凋亡蛋白bcl-xL的表达、抑制凋亡蛋白酶caspase-3的过高表达，从而抑制了AA诱导的肾小管上皮细胞的凋亡。     

缺血再灌注损伤后大鼠肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白的表达及其功能

目的 探讨大鼠肾脏缺血再灌注损伤（IRI）后肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白(OAT)1和3表达及功能变化。 方法 建立大鼠IRI模型，于术后第1、2、4、6天取血及肾组织标本。常规测定Scr浓度及观察肾脏组织形态。分别用免疫组织化学和Western印迹检测肾脏组织OAT1和3蛋白表达。毛细血管电泳仪检测肾脏对氨基马尿酸（PAH）排泄率。钼蓝分光光度法测定基侧膜钠-钾-ATP酶（Na＋-K＋-ATP酶）活性。另设假手术组作对照。 结果 模型组大鼠术后第1天肾小管上皮细胞坏死脱落，管腔内可见大量管型，刷状缘消失，基底膜裸露；Scr显著升高。与假手术组比较，模型组大鼠肾组织匀浆及肾小管上皮细胞OAT1和OAT3表达增强；PAH排泄率降低[(0.53±0.15)比(4.00 ± 0.67) ml/min, P < 0.01]；肾小管上皮细胞基侧膜Na＋-K＋-ATP酶活性降低[(9.33±1.37)比(15.07±0.15) μmol Pi&#8226;(mg蛋白)-1&#8226;h-1, P < 0.01]。损伤后第2天及第4天，损伤的肾小管逐渐修复，OAT1和3表达逐渐降低，PAH排泄率和Na＋-K＋-ATP酶活性逐渐增加；至第6天时肾小管基本恢复正常。 结论 急性肾缺血再灌注导致大鼠肾小管上皮细胞可逆性损伤，损伤初期肾小管OAT1和OAT3 表达增强，转运有机阴离子功能下降，PAH排泄减少。Na＋-K＋-ATP酶活性低下是OAT功能降低的主要机制之一。     

24p3/NGAL介导铁转运通过抑制肾小管上皮细胞凋亡减少急性肾损伤

目的:阐明24p3/NGAL介导铁转运对急性肾损伤肾小管上皮细胞的保护作用。方法:用分子克隆的方法构建Pc DNA3.1/24p3质粒,采用脂质体转染的方法瞬时转染小鼠胚胎成纤维(NIH/3T3)细胞;实时荧光定量PCR及ELISA验证24p3在NIH/3T3细胞中的表达,以未转染质粒的空白组和转染空载体质粒组作为对照,RT-PCR检测各组细胞24p3mRNA水平,ELISA检测各组细胞培养上清中24p3水平,收集各组上清液;用氯化钴缺氧诱导小鼠肾小管上皮(TCMK-1)细胞,用收集的NIH/3T3细胞上清液在正常铁离子浓度下培养,流式细胞仪检测各组TCMK-1细胞凋亡情况。结果:转染Pc DNA3.1/24p3质粒后的NIH/3T3细胞24p3mRNA和蛋白表达水平明显增加,证实转染成功;与对照组相比,加入重组质粒转染组上清液的TCMK-1组凋亡细胞数量明显减少(P0.05)。结论:24p3/NGAL介导的铁转运通过抑制肾小管上皮细胞的凋亡,减少急性肾损伤。     

外源性p16基因对食管癌患者癌细胞系的生长抑制作用

目的 观察外源性p16基因质粒导入食管癌患者食管鳞癌细胞系Ec109后的表达及其对Ec109细胞增殖生长状况的影响。方法 根据转染质粒的不同或是否行p16 cDNA质粒转染分为三组,每组分别为5个样本。PcDNA3-P16转染组（P16转染组）：采用脂质体（Lipofectamine）为载体,将PcDNA3-P16表达质粒寻入Ec109细胞;空载体转染组：用PcDNA－3－neo空载体以上述相同方法转染,作空白对照;未转染组：未用PcDNA3－P16质粒转染,作阴性对照。应用Northern斑点杂交、免疫组织化学、免疫荧光检测转化细胞的P16蛋白变化;流式细胞仪分析细胞周期变化,DNA片段化电泳检测细胞凋亡。结果 P16转染组外源性p16基因在Ec109细胞中表达后,细胞生长速度减慢,克隆形成能力下降,瞬时表达时有细胞凋亡发生,稳定表达后细胞存在G1期阻滞;空载体转染组和未转染组均未观察到以上结果。结论 脂质体介导的外源性p16基因转染对Ec109细胞有生长抑制作用,p16基因瞬时表达可诱导细胞凋亡。     

bcl-2及其重要功能结构域在调节成纤维细胞NIH3T3凋亡中的研究

目的 以成纤维细胞NIH3tT13作为细胞模型,探讨bel-2 Loop Domain结构域在成纤维细胞凋亡中的作用地位.方法 构建正常和Loop Domain结构域突变bcl-2基因的真核表达质粒,用于成纤维细胞转染;脂质体介导,分别将(1)空载体质粒(2)携带bcl-2基因质粒和携带突变基因的质粒转染成纤维细胞(NIH3T3),转染后用肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激NIH3T3细胞诱导凋亡,应用流式细胞仪(FCM)检测各组细胞凋亡,应用华联小鼠全基因表达谱芯片检测各组细胞基因表达谱的变化.结果 成功构建bcl-2基因和Loop domain中突变的真核表达载体;成功将携带突变基因、野生基因的质粒转染入NIH3T3细胞;各组转染后用TNF-α刺激细胞诱导凋亡,FCM检测发现,TNF-α刺激细胞17 h后,NIH3T3未转染细胞凋亡明显增加,细胞凋亡率为(53.18 ±8.18)%,NIH3T3转染野生型bcl-2质粒组与NIH3T3未转染细胞组比较细胞凋亡率明显下调;NIH3T3转染突变bcl-2质粒组与NIH3T3未转染细胞组比较细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);NIH3T3转染野生型bcl-2质粒组与NIH3T3转染突变bcl-2质粒组比较细胞凋亡率明显上调;基因芯片检测发现:转染bcl-2基因的NIH3T3细胞凋亡基因与转染空质粒组下调,转染Loopdomain突变的真核表达载体的NIH3T3细胞凋亡基因比转染bcl-2基因的NIH3T3细胞上调.结论 证实bcl-2基因Loop domain结构域突变对bcl-2基因功能产生明显影响,bcl-2基因Loop domain结构域突变使NIH3T3细胞凋亡产生明显变化.     

垂体中叶素对肾脏缺血再灌注大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨垂体中叶素（IMD）对肾脏缺血再灌注（I/R）大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响及相关机制。 方法 健康雄性Wistar大鼠24只随机分为假手术组、I/R组、空质粒组、IMD质粒组。动物右肾切除后,采用超声微泡法,将空质粒或IMD质粒转染入左肾,1周后制作肾脏I/R模型。TUNEL法测定细胞凋亡;半定量RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Fas的mRNA表达水平;比色法检测caspase-8、-9的活性;Western印迹法检测caspase-3蛋白的表达水平。 结果 与假手术组相比,I/R组细胞凋亡率增高,Bax、Fas mRNA表达增加,bcl-2 mRNA表达下降,caspase-8、-9活性增强,caspase-3蛋白表达增加（均P < 0.05）。与I/R组相比,IMD转染组细胞凋亡率明显降低,Bax、Fas的mRNA表达下降,bcl-2的mRNA表达增加,caspase-8、-9活性减弱,caspase-3蛋白表达减少（均P < 0.05）。转空质粒组与I/R组比较,各指标差异均无统计学意义。 结论 IMD能上调bcl-2表达,降低bax、Fas的表达,降低caspase-8、-9活性,从而抑制肾脏I/R损伤所诱导的凋亡。     

PTC1体外转染肺腺癌细胞系A549对细胞生长和凋亡的影响

长曲线可见野生型组细胞的生长速度明显减慢,而对照组和空载质粒组无明显变化.转染野生型PTC1基因后,EGFR的表达明显下降,与其他3组有明显差异.流式细胞术检测可见,野生型组的细胞凋亡率达24.5%,突变型组的细胞凋亡率达8.3%,与对照组相比明显升高(P<0.01),而空载质粒组的凋亡率无明显变化.结论 野生型PTC1转染肺腺癌细胞A549后,抑制癌细胞生长,促进凋亡.     

苦参碱对雄激素依赖性前列腺癌细胞的影响

目的：探讨苦参碱（Matrine）对雄激素依赖性前列腺癌细胞株（LNCaP）凋亡及前列腺特异抗原（prostate specific antigen,PSA）表达的影响。方法：分别用0.5g／L、1.0g／L、1.5g／L、2.0g／L浓度的苦参碱作用于LNCaP细胞12h、24h、36h后MTT法检测细胞生长活性;24h后流式细胞仪测定细胞凋亡的变化;24h后Western印迹法检测细胞内Bel-2和Bax的表达;12h、24h、36h后化学发光法检测LNCaP细胞培养液中PSA的变化。结果：苦参碱能抑制LNCaP细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度苦参碱组之间与不同作用时间组之间的差异均有统计学意义（P〈0.05）。苦参碱诱导LNCaP细胞凋亡,各浓度组凋亡细胞比例均显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;LNCaP细胞内Bcl-2含量呈浓度依赖性下降,Bax含量呈浓度依赖性升高（P〈0.01）;LNCaP细胞培养液中PSA的表达显著下降（P均〈0.05）。结论：苦参碱能显著抑制LNCaP细胞的体外生长,诱导其凋亡,并抑制PSA的表达。     

MAPKs信号转导通路在DHA诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的：探讨二十二碳六烯酸（DHA）对人胃癌细胞系SGC-7901的作用及对MAPKs信号转导通路中ERK1/2通路蛋白及凋亡蛋白caspase-3表达的影响。方法：采用MTT法及流式细胞仪技术对细胞增殖和凋亡进行观察和分析;应用Westernblot技术检测不同浓度的DHA诱导胃癌细胞的丝裂原活化蛋白激酶ERK1/2及其磷酸化水平的表达以及其下游通路中凋亡蛋白caspase-3的表达。结果：DHA对于SGC-7901胃癌细胞的增殖有明显抑制作用,呈现时间和浓度依赖性（P〈0.01）。DHA可诱导SGC-7901细胞凋亡,凋亡率随DHA的作用浓度增加而增加（P〈0.01）。ERK1/2在对照组和不同DHA浓度组稳定表达,且表达无差异;P-ERK1/2活性随DHA作用浓度的增高而降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;caspase-3随着DHA浓度的增高表达不断增强,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：DHA可能通过下调ERK1/2的磷酸化过程,激活凋亡蛋白caspase-3的表达,诱导胃癌细胞的凋亡。     

凋亡相关基因PDCD5对前列腺癌细胞PC-3M-1E8促凋亡作用的研究

目的：观察外源性PDCD5对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3M-1E8的促凋亡作用。方法：扩增重组质粒PCI-neo-PDCD5,利用脂质体介导将其瞬时转染前列腺癌细胞PC-3M-1E8,RT-PCR检测转染后表达情况;撤除血清培养16h后,通过四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞存活率,原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡指数,透射电子显微镜观察细胞形态。结果：MTT结果显示转染重组质粒组细胞较转染空载体和对照组细胞生长速度明显减慢,存活细胞明显减少（P〈0.001）;通过TUNEL与透射电镜观察,发现转染组细胞凋亡程度和数量明显增加,凋亡指数较对照组明显增高（P〈0.001）。结论：PDCD5在撤出血清因素的诱导作用下能显著抑制前列腺癌细胞PC-3M-1E8在体外的生长,明显促进其凋亡。     

PGC-1α在高糖诱导的HK-2细胞凋亡中的作用

目的:探讨PGC-1α在高葡萄糖诱导的HK-2细胞凋亡中的作用及机制。方法:根据对HK-2细胞所进行的处理不同设置分组:A、对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖处理24 h);B、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖处理24 h);C、PGC-1α过表达组(PGC-1α过表达质粒转染后以30 mmol/L D-葡萄糖处理24 h);D、空质粒对照组(空质粒转染后以30 mmol/L D-葡萄糖处理24 h);采用Western Blot技术检测PGC-1α、cleaved caspase-3的表达,采用流式细胞分析技术检测线粒体膜电位(ΔΨm)的变化和细胞凋亡情况。统计分析采用SPSS20软件,P0.05为差异有统计学意义。结果:高糖组较对照组PGC-1α表达减少,线粒体膜电位降低,cleaved caspase-3的表达增加,细胞凋亡增加(P0.05);PGC-1α过表达组较高糖组PGC-1α表达增加,线粒体膜电位升高,cleaved caspase-3的表达减少,细胞凋亡减少(P0.05)。结论:PGC-1α可能通过维护线粒体的功能减少高糖所致的HK-2细胞凋亡,对HK-2细胞具有保护作用。     

人胚肾细胞SGLT2基因异源表达体系的构建

目的 构建钠依赖的葡萄糖转运蛋白2（SGLT2）基因异源表达体系,为探讨突变引起SGLT2蛋白功能及表达异常的分子机制提供实验依据。 方法 利用RT-PCR法从人肾组织中获得SGLT2基因,将该基因克隆到真核表达载体PEXL-GFP（绿色荧光蛋白）中,将携带有SGLT2基因的PEXL载体转染人胚肾细胞系（HEK293细胞）,获得目的蛋白的瞬时表达。应用Western印迹及激光共聚焦显微镜检测融合蛋白在HEK293细胞的表达和分布,并通过摄取实验进一步验证SGLT2蛋白的转运功能。 结果 SGLT2-GFP蛋白可在HEK293细胞表达,激光共聚焦显微镜观察发现,SGLT2-GFP蛋白在细胞膜上呈点状分布,并且与细胞膜标记物（DiI）有良好的共定位,转染SGLT2-GFP质粒的HEK293细胞的转运活性较对照组（未转染及转染空质粒细胞组）强约3.5倍（P < 0.01）。 结论 成功构建了SGLT2真核表达载体,为探讨SGLT2基因表达、功能及SGLT2突变在家族性肾性糖尿发病的遗传机制提供了重要的依据。     

下调星形细胞上调基因1表达对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨下调星形细胞上调基因1(AEG-1)对乳腺癌细胞凋亡的影响。方法:通过脂质体介导的方法,将乳腺癌MCF-7细胞分别转染AEG-1siRNA(AEG-1siRNA)和阴性对照siRNA(阴性对照组),以无处理的MCF-7细胞为空白对照组。验证转染效果后,分别采用流式细胞术与Westernblot检测各组细胞的凋亡以及凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9的表达。结果:与空白对照组细胞比较,AEG-1siRNA组MCF-7细胞AEG-1蛋白表达明显降低、细胞凋亡率明显升高、caspase-3和caspase-9蛋白表达明显上调(均P0.05);阴性对照组与空白对照组间以上各项指标均无统计学差异(均P0.05)。结论:下调乳腺癌细胞AEG-1的表达能促进caspase-3和caspase-9的表达,从而诱导乳腺癌细胞凋亡,因此,AEG-1在乳腺癌细胞中可能起了抑制细胞凋亡的作用,机制可能与其调节凋亡相关蛋白的表达有关。     

VEGF-C基因转染对人乳腺癌MCF-7细胞VEGF-C表达的影响

目的探讨将真核表达载体pcDNA3．1-VEGF—C重组质粒转染入人乳腺癌MCF-7细胞后VEGF-C表达的变化。方法通过脂质体介导方法，将构建好含有VEGF—C的重组质粒转染入人乳腺癌MCF-7细胞中，新霉素（G418）筛选得到稳定转染细胞系，RT—PCR和Western blot方法检测稳定转染后细胞中VEGF—C mRNA和蛋白的表达。结果成功转染并获得稳定高表达VEGF—C的乳腺癌MCF-7细胞系，其转染组VEGF—C mRNA相对吸光度值（12．382&#177;2．183）较空载组（6．039&#177;1．950）显著上调（P〈0．01）。Western blot检测转染组VEGF-C蛋白相对灰度值（0．971&#177;0．186）较空载组（0．594&#177;0．196）明显上调（P〈0．05）。结论脂质体介导重组质粒pcDNA3．1-VEGF-C转染入人乳腺癌MCF7细胞中可显著增加VEGF—C表达水平。     

弓形虫ROP16蛋白诱导肝癌细胞凋亡的检测

目的观察弓形虫ROP16蛋白转染肝癌细胞Hep G2后,肝癌细胞的凋亡比率的变化以及细胞凋亡蛋白的表达水平变化。方法克隆弓形虫ROP16基因,构建真核转染质粒,并用脂质体转染的方式转染Hep G2细胞,48小时后,用流式细胞仪检测细胞凋亡比率,用western blotting和RT-PCR的方法检测细胞凋亡相关蛋白caspase-9、Bax、Bcl-2等的表达水平。结果与未转染细胞组相比,弓形虫ROP16转染Hep G2细胞后,肝癌细胞的凋亡比率明显升高。促细胞凋亡蛋白caspase-9、Bax的蛋白表达水平和基因转录水平均升高,而抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达水平和转录水平下降。结论 ROP16蛋白可以诱导肝癌细胞Hep G2发生凋亡。     

表达大鼠caspase-3 siRNA腺病毒的构建及其对神经元凋亡的影响

目的 构建表达大鼠caspase-3 siRNA腺病毒,体外观察其抑制内毒素诱导神经元凋亡的效果.方法 合成正、反义寡核苷酸并克隆入pShuttleH1载体,与含caspase-3及绿色荧光增强蛋白序列的质粒pEGFPC1-Cas3共转染293细胞,流式细胞仪分析荧光强度;pShuttleH1-siCas3线性化后转化到含pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中获取重组质粒,脂质体转染293细胞获取重组腺病毒Ad-siCas3;TCIDs.法测定病毒滴度;感染海马神经元,观察内毒素诱导神经元caspase-3 mRNA的表达及凋亡情况.结果 目的基因序列正确,pShuttleH1-siCas3可明显减弱pEGFPC1-Cas3绿色荧光,Ad-siCas3滴度为1.06×1010 pfu/ml.转染病毒的海马神经元内毒素诱导的凋亡效应及caspase-3 RNA的表达明显减弱.结论 成功地构建了表达大鼠caspase-3 siRNA腺病毒,具有良好的抑制神经元凋亡作用.     

靶向沉默SPHK1基因诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的探讨用小干扰核酸（SmallinterferingRNA,siRNA）靶向沉默神经鞘氨酸激酶1（sDhingosinekinasel,SPHKl）基因敲除后对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法人工化学合成SPHKlsiRNA和对照siRNA,分别转染胃癌SGC-7901细胞。Westernblot法检测SPHKl、Bcl-2和Bax蛋白的表达;流式细胞术（FlowCytometry,FCM）检测细胞凋亡的变化。结果SPHKlsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞后,SPHKl蛋白表达明显下调;与对照组相比,SPHKlsiRNA转染组Bcl一2蛋白表达下调了55％（P〈0．01）,Bax蛋白表达差异无统计学意义,Bcl-2／Bax比值下调54％（P〈0．05）;SPHKlsiRNA转染组早期凋亡细胞明显增多（P〈0．01）,晚期凋亡细胞无明显变化。结论SPHKl特异性siRNA可阻断SGC-7901细胞SPHKl蛋白的表达,并通过影响Bcl-2通路诱导细胞凋亡。     

钠-氢交换蛋白1小干扰RNA对抗霉素A诱导人肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤的保护机制

目的 通过构建钠-氢交换蛋白1（NHE-1）小干扰RNA (siRNA)抑制肾小管上皮细胞NHE-1的表达，探讨其对细胞缺血再灌注损伤的保护作用机制。 方法 根据人NHE-1全长基因序列设计并合成NHE-1-siRNA，转染人肾小管上皮细胞系（HKC），以无关siRNA转染组作为对照。利用10 μmol/L 抗霉素A诱导细胞来模拟缺血缺氧环境。用RT-PCR、Western印迹法检测NHE-1的表达。用BCECF/AM、Fluo-3/AM和SBFI-AM标记HKC，通过激光共聚焦显微镜分别检测其细胞内pHi、Ca2+和Na+浓度的变化。用Hoechst 33342染色技术及Annexin V/PI 染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况。利用荧光探针JC-1检测细胞线粒体膜电位的变化。 结果 特异性NHE-1-siRNA能有效抑制HKC的NHE-1表达，与无关siRNA转染组相比，NHE-1-siRNA转染组NHE-1 mRNA和蛋白表达水平明显下调(均P < 0.05)。抗霉素A刺激后，2组细胞NHE-1 mRNA及蛋白表达水平显著上调，而NHE-1-siRNA转染组低于无关siRNA转染组；同时NHE-1-siRNA转染组细胞凋亡率（8.9%±2.9%）明显低于抗霉素A处理组（18.8%±3.2%）和抗霉素A+无关siRNA转染组（17.4%±3.6%）（均P < 0.05）；NHE-1-siRNA转染组线粒体膜电位明显增高；与无关siRNA转染组相比较，NHE-1-siRNA转染组经抗霉素A处理后，细胞内钠离子、氢离子及钙离子增高的幅度较低（P < 0.05）。 结论 NHE-1-siRNA可抑制肾小管上皮细胞内NHE-1的表达，对抗霉素A诱导肾小管上皮细胞的缺血再灌性损伤有一定的保护作用。其机制可能通过抑制NHE-1表达，延缓细胞内Na+的积聚，减轻细胞内钙离子的超载，抑制损伤细胞的线粒体膜电位下降，减少细胞的凋亡。     

外源性CC10基因表达对肝癌细胞增殖、 凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探究外源性Clara细胞分泌蛋白10（CC10）的基因表达对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和 侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用RT-qPCR和Western blotting检测人正常肝细胞LO2和 肝癌细胞HepG2、Hep3B中CC10的内源表达水平;将HepG2细胞系分为pcDNA 3.1组和pcDNA 3.1-CC10 组,用LipofectionTM分别转染pcDNA 3.1空载体质粒和重组质粒pcDNA 3.1-CC10。用CCK-8法、TUNEL 法和Transwell小室实验分别检测两组细胞增殖、凋亡情况及迁移、侵袭能力。采用RT-qPCR和Western blotting检测两组细胞中CC10和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的表达水平。结果 与正常肝细胞LO2相 比,CC10在肝癌细胞HepG2、Hep3B中呈明显低表达（P<0.05）;转染 pcDNA 3.1-CC10后的HepG2细胞内 CC10 mRNA和蛋白水平均显著增高（P<0.05）。与 pcDNA 3.1组相比,pcDNA 3.1-CC10组细胞活力受到抑 制,细胞活力以时间依赖性方式降低（P<0.05）,细胞迁移和侵袭实验中的过膜细胞数均低于pcDNA 3.1组 （P<0.05）,细胞凋亡率高于pcDNA 3.1组（P<0.05）。同时,Cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低 （P<0.05）。 结论? 外源性CC10基因表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其机制可能与 下调Cyclin D1表达有关。