碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的了解临床分离的耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药情况以及碳青霉烯酶的基因型。方法收集21株耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌,采用纸片扩散法（K—B法）进行药敏试验,PCR方法检测碳青霉烯酶基因型。结果21株碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌对阿米卡星、左氧氟沙星和氨曲南的耐药率分别为35．7％、42．9％和78．6％,对其余抗菌药物耐药率均高达92．9％～100％。21株中检出OXA-23基因阳性17株（80．9％）,OXA-51基因阳性15株（71．4N）,OXA-58基因阳性2株（9．5％）。12株（57．1％）含OXA-23＋OXA-51基因,1株（4．8％）含OXA-23＋0XA-51＋OXA～58基因。上述菌株中均未检出OXA-24、IMP和VIM耐药基因。结论碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌多重耐药情况严重,碳青霉烯酶基因型OXA-23和OXA-51携带率高,且以OXA-23＋OXA-512种基因型同时存在为主。     

多重耐药鲍曼不动杆菌携带碳青霉烯类水解酶基因情况的研究

目的 研究浙江省瑞安市人民医院多重耐药鲍曼不动杆菌中金属-内酰胺酶(IMP、VIM)、 KPC酶、 OXA-23型水解酶基因的携带情况,探讨各种碳青霉烯类水解酶在多重耐药鲍曼不动杆菌中的作用。 方法 采用Whonet 5.4 软件分析多重耐药鲍曼不动杆菌的标本类型和病区分布,以及药敏资料;设计特异性引物,用PCR方法扩增IMP、VIM、KPC和OXA-23特异基因,并用琼脂糖电泳分析其产物。 结果 70株多重耐药鲍曼不动杆菌均未检测到IMP、VIM及KPC基因,其中58株亚胺培南耐药菌株均携带OXA-23基因,阳性率为82.86%。 结论 OXA-23型水解酶是造成瑞安市人民医院鲍曼不动杆菌对临床常用碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的 对临床分离亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌耐药性及碳青霉烯酶基因型进行研究,以指导临床合理应用抗生素.方法 用琼脂稀释法检测最低抑菌浓度(MIC),聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-58、IMP和VIM碳青霉烯酶基因,并对PCR产物进行测序.结果 鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率为36.9%,且亚胺培南耐药组菌株对12种抗菌药物耐药率与敏感组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在24株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中21株PCR扩增出OXA-23基因,2株扩增出VIM基因,检出率分别为87.5%和8.3%,OXA-24、OXA-58、IMP基因均未检出;PCR产物测序表明与Genbank相关基因同源性为100%.结论 该院亚胺培南耐药鲍不动杆菌耐药现象严重;OXA-23碳青霉烯酶基因的产生是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制之一.     

多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因和同源性分析

目的分析多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因型和医院感染鲍曼不动杆菌同源性。方法收集四川省人民医院重症监护病房(ICU)分离的鲍曼不动杆菌复合群76株,用OXA-51基因扩增法鉴定。用Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统进行药敏试验,同时用PCR技术分析其产碳青霉烯酶相关耐药基因类型,对其中确定为医院感染的19株鲍曼不动杆菌和5株物体表面的鲍曼不动杆菌用重复序列聚合酶链反应(Rep-PCR)的DiversiLab系统进行同源性分析。结果 76株菌株均显示多重耐药,全部检出携带OXA-51、OXA-23基因,未检出OXA-24、OXA-58、VIM、IMP-1、IMP-4、SIM、NDM-1耐药基因。DiversiLab系统将19株医院感染鲍曼不动杆菌和5株物体表面的鲍曼不动杆菌分为4个亲缘性不同的克隆组及9个亚克隆组。结论该院鲍曼不动杆菌多重耐药现象严重,OXA-23基因可能是其耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。克隆组1为该院鲍曼不动杆菌医院感染的主要流行株。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药表型和碳青霉烯酶基因型分析

目的检测广州市第一人民医院20株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药性,研究并分型其碳青霉烯酶基因。方法用法国生物梅里埃公司VITEK2全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,用6种碳青霉烯酶特异性基因引物进行PCR扩增和基因型的测序分析,并通过网上GenBank进行比对以确定编码酶基因的类型。结果 20株鲍曼不动杆菌对哌拉西林-他唑巴坦、左氧氟沙星和阿米卡星的耐药率分别为85%、50%和25%。对其他所测抗菌药的耐药率均在90%以上。扩增结果显示17株(85%)细菌携带碳青霉烯酶OXA-23基因,16株(80%)携带OXA-51基因,1株(5%)携带OXA 58基因。OXA-24、VIM、IMP基因引物PCR扩增均为阴性,随机抽取OXA-23基因阳性株进行双向测序后在网上GenBank比对与OXA-23标准株99%同源,OXA-51基因阳性株与OXA-66标准株99%同源,OXA-58基因阳性株与OXA-58标准株99%同源。结论我院耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药现象,对阿米卡星的耐药率最低,OXA-23型碳青霉烯酶基因检出率最高,OXA-23/OXA-51类基因占60%,应引起临床高度重视,防止在医院内广泛传播。     

耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶、整合酶基因型研究

目的研究碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶、整合酶基因型情况。方法收集93株碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌和16株碳青霉烯类敏感的鲍曼不动杆菌,采用改良Hodge实验检测碳青霉烯酶,EDTA协同试验检测金属β-内酰胺酶;采用聚合酶链反应(PCR)扩增和测序分析碳青霉烯酶和整合子基因。结果耐药株碳青霉烯酶表型检测阳性率为62.4%,金属酶表型检测均为阴性;PCR结果显示耐药菌中OXA-23、Int1检出率为100%,OXA-51检出率为96.8%,OXA-58检出率为1.1%,未检出OXA-24、VIM、IMP和Int2,敏感株除Int1检出率为37.5%外,其余基因均未检出。结论临床分离的碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌主要携带OXA-23、OXA-51碳青霉烯酶基因型,并且均携带Ⅰ类整合酶基因。     

鲍曼不动杆菌OXA-51样碳青霉烯酶基因分型与耐药性研究

目的 研究鲍曼不动杆菌中OXA-51样碳青霉烯酶基因分型及与抗菌药物耐药的相关性.方法 纸片扩散法检测174株鲍曼不动杆菌对头孢他啶、头孢曲松、阿米卡星、环丙沙星的耐药性,琼脂稀释法检测亚胺培南和美罗培南的最低抑菌浓度(MIC值);PCR扩增碳青霉烯酶VIM、IMP、OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58相关基因;对ONA-51阳性菌株进行测序和基因分型.结果 所有菌株均未检出OXA-24、OXA-58、IMP及VIM基因;15.5%(27/174)的菌株OXA-23阳性,72.4%(126/174)的菌株OXA-51阳性,其中15.5%(27/174)菌株同时产OXA-51样酶和OXA-23酶,126株OXA-51样酶阳性菌株中,82.5%(104/126)为OXA-66型,非OXA-66基因型占17.5%(22/126),本次研究发现的8个新基因型;OXA-66型的耐药性明显高于其他基因型.结论 OXA-66为本地区分离鲍曼不动杆菌产生的OXA-51样碳青霉烯酶的主要基因型;OXA-66与碳青霉烯抗生素的低水平耐药有关,且可能与其他抗菌药物的耐药性相关,临床分离鲍曼不动杆菌中发现新的OXA-51样碳青霉烯酶基因.     

儿童鲍曼不动杆菌产IMP-4及OXA-23型碳青霉烯酶分子流行病学

目的 研究武汉地区儿童分离CRAB中获得性碳青霉烯酶分子流行病学特征.方法 收集2008年12月至2009年5月期间武汉市儿童医院急救科、新生儿内科、心胸外科、骨外科、呼吸内科及肾内科住院患儿分离的非重复CRAB 40株,使用生物梅里埃公司生产的GNS-142检测菌株的MIC值,PFGE分析耐药菌株的同源性.采用PCR扩增KPC、IMP、GIM、SPM、SIM、OXA-23、VIM 7种获得性碳青霉烯酶基因及整合酶基因,测序确定基因型,质粒接合转移试验分析细菌耐药性的转移方式,Southern blot试验定位耐药基因.结果 40株CRAB对庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方磺胺甲(口恶)唑的敏感率分别为20%、5%、93%、93%、95%及23%;PFGE分型共检出11种克隆株,其中A型29株,B型2株,C～K型各1株.11株同时产IMP-4型MBL及OXA-23酶,26株只产OXA-23酶;未检出GIM、SPM、SIM、KPC和VIM型碳青霉烯酶基因.36株鲍曼不动杆菌携带Ⅰ类整合子(Int1).Southern blot表明Int1、IMP-4及OXA-23型定位于细菌染色体上.未见质粒接合转移试验阳性菌株.结论 A型克隆耐药株为本地区最常见CRAB菌株,OXA-23酶及IMP-4型是CRAB中主要的获得性碳青霉烯酶类型,其中以OXA-23型最为常见,Int1介导的OXA-23及IMP-4基因的水平传播及A型耐药克隆株的传播是本地区鲍曼不动杆菌中碳青霉烯类耐药性传播的主要方式.     

儿科临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性和产OXA酶的研究

目的研究儿科临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性和OXA酶基因存在情况。方法收集2010年1—12月北京儿童医院住院患儿中分离多重耐药鲍曼不动杆菌42株。用美国BD公司Phoenix100微生物分析仪,进行菌株鉴定和13种抗菌药物的药敏试验,按照CLSI 2010年推荐标准判断结果。用多重PCR方法检测OXA酶OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58 4组基因。PCR产物测序结果通过GenBank进行比对分析,确定其基因型别。结果多重耐药鲍曼不动杆菌42株对亚胺培南和美罗培南耐药率分别为76.2%和78.6%。未发现对多黏菌素耐药的菌株。42株菌中41株(97.6%)扩增出特异性条带,为OXA基因阳性。其中,OXA-51组基因阳性38株(90.4%);OXA-23组基因阳性28株(66.7%);OXA-58组基因阳性2株(4.8%)。未扩增出OXA-24组基因。有27株(64.2%)OXA-51和OXA-23组基因同时阳性。携带OXA-23基因鲍曼不动杆菌均为对碳青霉烯类抗生素耐药的菌株。结论儿科临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药情况严重。以同时产OXA-51和OXA-23型OXA酶为主。OXA-23基因是导致鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。     

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌耐药特征及分子流行病学研究

目的调查2009年碳青酶烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)的耐药基因及分子流行病学特征。方法用PCR筛查碳青霉烯类耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-58、IMP、VIM、NDM-1和adeABC型外排泵结构基因adeB,并进行测序分析;用基因外重复回文序列PCR(repetitive extragenic palindromic sequence-based PCR,Rep-PCR)分型技术进行分子流行病学监测。结果2009年我院66株CRAB中98.5%的菌株OXA-23基因阳性,95.5%adeB基因阳性,两种基因同时阳性的比率为93.9%,未检出其他耐药基因。66株CRAB可分为A～D 4个基因型,我院流行的优势克隆株为A型,波及10个病房。这些基因型不同于2004年我院CRAB流行株。结论 2009年CRAB通过产生OXA-23酶和adeABC型外排泵等机制共同介导碳青霉烯类耐药,CRAB克隆株水平传播是造成2009年鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药率增加的主要原因。     

重症监护病房中多重耐药鲍曼不动杆菌耐药基因型及同源性分析

目的分析22株重症监护病房(ICU)中多重耐药鲍曼不动杆菌耐药表型,耐药基因型及基因同源性。方法菌株鉴定采用Vitek-32细菌鉴定仪,药物敏感试验采用K-B法。三维试验检测ESBLs和AmpC酶,协同试验检测金属酶(MBL)。PCR检测各类β-内酰胺酶类、氨基糖苷类抗菌药耐药基因及喹诺酮类相关gyrA基因。脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行基因同源性分析。结果 (1)对亚胺培南耐药率最低为4.5%,头孢哌酮/舒巴坦耐药率较低为22.7%,对其他所测抗菌药耐药率均大于90%。(2)产AmpC酶21株占95.5%;产ESBLs和MBL各5株,分别占22.7%。(3)100%携带AmpC酶基因、TEM-1型广谱β-内酰胺酶基因、aacA4氨基糖苷乙酰转移酶基因;aacC1、aadA1型氨基糖苷乙酰转移酶基因各占95.5%;有gyrA型DNA旋转酶基因突变;各1株检测到OXA-23型碳青霉烯酶基因、PER型ESBLs基因和aphA1型氨基糖苷乙酰转移酶基因,分别占4.5%;未检测到SHV型β-内酰胺酶基因、VEB型ESBL基因I、MP型和VIM型金属酶基因、OXA-24型碳青霉烯酶基因。(4)PFGE结果显示20株出现完全相同条带,具有高度同源性,另2株各自为独立株。结论 22株多重耐药鲍曼不动杆菌中存在一个克隆流行株,携带AmpC酶基因、TEM-1型β-内酰胺酶基因及aacA4、aacC1、aadA1型氨基糖苷类修饰酶基因,高产AmpC酶,治疗应首选亚胺培南。     

呼吸重症监护病房多重耐药鲍曼不动杆菌耐药基因检测及耐药性分析

目的 了解呼吸重症监护病房内多重耐药鲍曼不动杆菌( MDR- AB)β-内酰胺酶基因和耐消毒剂磺胺复合物基因(qacE△ l-sull)的耐药性,为临床的合理用药提供依据.方法 对分离出的39株MDR-AB采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析方法检测耐药基因,并且进行耐药性分析.结果 39株MDR-AB中28株碳青霉烯酶-23 (OXA-23)阳性(71.8％),OXA-51阳性39株(100％),青霉素酶(TEM)阳性7株(17.9％),二十二碳六烯酸(DHA)阳性6株(15.4％),丝氨酸酶(PER)阳性5株(12.8％),头孢菌素酶(AmpC)阳性23株(59.0％),qacE△1-sull阳性39株(100％).OXA-23和AmpC同时阳性17株(43.6％).OXA-24,OXA-58,内膜蛋白酶-1(IMP-1),IMP-4,波形蛋白酶(VIM-2)和产巯基变量型(SHV)均未检出.在呼吸重症监护病房分离出来的菌株对哌拉西林、头孢他啶、环丙沙星、氨苄西林、头孢哌酮、头孢克洛、头孢唑啉的耐药率均＞90％,对多黏菌素B的敏感率为100％.结论 本院呼吸重症监护病房内MDR-AB主要携带的β-内酰胺酶基因为OXA-23和AmpC,根据其院内感染特征,为控制其传播,临床应加强有效的监测和隔离工作.     

鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型检测分析

目的了解鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型的存在状况。方法应用聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58基因,对PCR产物进行DNA直接测序,同时采用PCR对ISAba1和ISAba3插入序列进行检测,对PCR产物进行直接测序。除分别对OXA-23和ISAba1进行检测外,在两个基因之间再设计一对引物进行扩增,获得ISAba1与OXA-23之间的全长DNA序列。结果收集温州医科大学附属第一医院住院患者临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用PCR方法共检到OXA-23基因阳性菌株155株,阳性率为77.5%,其中与插入序列ISAba1同时阳性143株,阳性率为71.5%,本次试验未检到OXA-24基因阳性菌株;200株鲍曼不动杆菌均携带OXA-51基因,阳性率为100%,其中和OXA-23基因同时阳性155株,阳性率为77.5%;OXA-58基因阳性菌株共检出8株,阳性率为4.0%,插入序列ISAba3阳性共检出12株,阳性率为6.0%,其中有8株ISAba3和OXA-58同时阳性,阳性率为4.0%。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是该院鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。