结核病分子生物学研究进展

1953年Watson和Crick提出的DNA双螺旋结构模型是现代分子生物学诞生的里程碑，开创了分子遗传学基本理论建立和发展的黄金时代。所谓分子生物学是指从分子水平研究生命现象、生命本质、生命活动及其规律。医学分子生物学是其中的一个重要分支，它是以疾病为中心，用分子理论和技术来研究人类疾病的预防、诊断、治疗和发病机制等。     

病原学阴性初治肺结核患者诊断模型的建立及初步评价

目的 建立病原学阴性初治肺结核患者的诊断模型, 以提高临床诊断的规范性及准确性。方法 收集 2017 年 8 月至 2019 年7 月湖南省胸科医院收治的年龄≥15岁、结核分枝杆菌病原学检查阴性, 且从未因结核病应用过抗结核药物治疗或不规范化疗未满1个月已确诊的200例病原学阴性初治肺结核患者和212例非结核性肺部疾病患者的临床资料。采用简单随机数字表法将两组患者分为两类, 一类为训练样本, 一类为考核样本, 两类样本比例为3∶1。通过对训练样本临床观察指标进行单因素和多因素非条件logistic回归分析, 筛选出独立预测因子并建立诊断模型, 并以训练样本的临床诊断结果为金标准, 采用受试者工作特征(ROC)曲线评估模型的诊断能力, 再使用考核样本对建立的诊断模型进行前瞻性考核。结果 对训练样本临床观察指标的多因素非条件logistic回归分析显示, 血清白蛋白/球蛋白比值(A/G)> 1.2、血清糖类抗原-125(CA-125)> 35kU/L、全血结核分枝杆菌γ-干扰素释放试验(IGRA)阳性、咳嗽≥2周、有咯血或者痰中带血、全身结核中毒症状、并发其他疾病、病灶发生于单侧或两侧的肺上叶尖后段和(或)下叶背段和空洞形成是病原学阴性初治肺结核与非结核性肺部疾病鉴别的相关独立因素[Wald χ ²= 7.264, P= 0.007, OR(95%CI)= 3.433(1.400~8.417); Wald χ ²= 17.114, P= 0.000, OR(95%CI)= 6.980(2.780~17.524); Wald χ ²= 63.643, P= 0.000, OR(95%CI)= 19.283(9.320~39.894); Wald χ ²= 5.557, P= 0.018, OR(95%CI)= 0.434(0.217~0.869); Wald χ ²= 6.237, P= 0.013, OR(95%CI)= 0.255(0.087~0.745); Wald χ ²= 24.930, P= 0.000, OR(95%CI)= 0.126(0.056~0.284); Wald χ ²= 12.062, P= 0.001, OR(95%CI)= 10.139(2.743~37.746); Wald χ ²= 16.224, P= 0.000, OR(95%CI)= 4.428(2.147~9.135); Wald χ ²=16.228, P=0.000, OR(95%CI)=14.437(3.939~52.919)]。ROC曲线分析模型的诊断效能为曲线下面积(AUC)=0.881(95%CI:0.839~0.915), 最佳临界值为0.42, 诊断病原学阴性初治肺结核的敏感度和特异度分别为86.67%和76.10%。经考核样本检验, 建立的诊断模型对两组患者总的准确判别率为79.61%(82/103)。结论 本研究建立的模型敏感度和准确率均较高, 可以作为临床医师诊断病原学阴性初治肺结核的辅助参考工具。     

血清降钙素原在肺结核合并肺部感染诊断中的应用

目的探讨血清降钙素原（PCT）对肺结核（PTB）合并肺部感染早期诊断的临床价值。方法 收集某院2013年8-12月收治的确诊活动性PTB患者的临床资料,依据PTB患者合并细菌、真菌感染分为合并细菌感染组(n=104)和合并真菌感染组(n=37),同期该院确诊的活动性PTB未合并感染者作为对照组（n=95）,比较3组患者血清PCT浓度,并进行接受者操作特性（ROC）曲线分析。结果合并细菌和真菌感染组患者PCT中位浓度分别是0.44 ng/mL和0.30 ng/mL,均明显高于未合并感染组的0.16 ng/mL,差异具有统计学意义（Z值分别为9.49、3.51,均P＜0.001）。合并细菌和真菌感染组PCT的ROC曲线下面积分别为0.89（0.84～0.93）和0.69（0.61～0.77）;临界值分别为0.31 ng/mL、0.27 ng/mL;灵敏度分别为79.81%（70.57%～86.80%）、59.46%（42.19%～74.80%）;特异度分别为83.16%（73.79%～89.78%）、73.68%（63.48%～81.95%）。结论血清PCT对早期诊断肺结核合并肺部细菌感染有一定价值,并且能为临床合理、正确选用抗菌药物提供参考依据。     

真菌培养法在诊断一例肺结核并发脓肿分枝杆菌感染患者中的应用

<正>近年来,随着实验室检测能力和技术水平的提高,以及临床医师对非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacteria,NTM)潜在致病性认识的增强,NTM已报道的菌种越来越多,导致NTM感染呈明显上升趋势~([1])。为进一步提高实验室对NTM检测方法的认识和鉴别能力,增进临床医师对实验室结果的正确认知,现分享1例应用真菌培养法检出NTM的患者资料。     

临床276例次单采血小板输注效果及相关因素分析

目的分析临床单采血小板输注效果及其影响因素,为科学、合理、有效使用血小板提供参考依据。方法对湖南省胸科医院136例(276例次)输注血小板患者按性别、年龄、血型、输注次数及脾肿大与否分组,进行统计分析,观察患者输注血小板后血小板计数是否有效提高或临床出血症状有否改善,评价血小板输注效果。结果 276例次输注单采血小板中有效194例次,有效率为70.29%,性别、年龄及血型对输注效率无影响(P0.05),不同输注次数总体组间差异有统计学意义(P0.05),同时脾肿大患者较脾正常患者疗效差异有统计学意义(P0.01)。结论血小板输注次数和脾脏肿大是影响输注效果的因素,临床医生应该严格控制患者输注血小板指征、掌握患者情况并在输注时避免各种诱发因素,减少或避免无效输注的发生,提高血小板输注有效率及临床疗效。     

InnowaveDX MTB/RIF对结核分枝杆菌复合群及利福平耐药检测性能评估

目的评估结核分枝杆菌(MTB)和利福平耐药突变检测试剂盒(InnowaveDX MTB/RIF, 简称InnowaveDX)检测痰液对MTB复合群及利福平耐药的诊断价值。方法前瞻性连续纳入2020年6月19日至2022年5月16日湖南省结核病防治所、河南省传染病医院和武汉市金银潭医院就诊的具有结核病体征的患者1 328例, 依据纳入及排除标准, 最终纳入1 035例肺结核患者(确诊患者357例, 临床诊断患者678例)和180例非结核患者。收集所有患者的痰液样本, 进行常规痰涂片、痰培养、药敏试验, 并评价Xpert?MTB/RIF(简称Xpert)和InnowaveDX对肺结核和利福平耐药的诊断价值。对肺结核的诊断分别以临床诊断和MTB培养结果为参考标准, 对利福平耐药的评价分别以表型药敏试验和Xpert为参考标准, 分析两种检测方法对结核病诊断和利福平耐药的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。两种检测技术的一致性分析行kappa检验。结果以临床诊断为参考标准, InnowaveDX对1 035例临床诊断肺结核患者检测敏感度[58.0%(600/1 035)]高于Xpert[51...     

IS6110-RFLP、Spoligotyping和MLVA在结核分枝杆菌基因分型中的应用研究

目的 评价156110限制性片段长度多态性（IS6110-RFLP）、间隔区寡核苷酸分型（Spoligotyping）及多位点可变数量串联重复序列分析（MLVA）3种方法在结核分枝杆菌基因分型研究中的应用。方法 分别采用IS6110-RFLP、Spoligotyping及MLVA对40株结核分枝杆菌临床分离株进行基因分型研究，比较3种方法的分型效果。结果 使用IS6110-RFLP方法，40株结核分枝杆菌呈现出35种基因型，33株具有独特的基因型；使用Spoligotyping方法，40株结核分枝杆菌呈现出17种基因型，11株具有独特的基因型；使用MLVA方法时，40株结核分枝杆菌呈现出34种基因型，29株具有独特的基因型；当3种方法联合使用时，40株结核分枝杆菌呈现出39种基因型，38株具有独特的基因型。结论 MLVA和IS6110-RFLP方法的分辨率高于Spoligotyping，但是对于IS6110单拷贝或低拷贝的菌株，MLVA方法的分辨率要高于IS6110-RFLP。MLVA、IS6110-RFLP和Spoligotyping联合应用可有效地进行结核病的流行病学调查和病原学监测。     

MPT抗原阴性的结核分枝杆菌复合群临床分离株mpt64突变特征分析

目的 分析MPT抗原阴性的结核分枝杆菌复合群临床分离株mpt64突变特征。 方法 收集湖南省胸科医院2017年1—6月BACTEC MGIT 960法(MGIT 960)培养分离的菌株,通过生化和分子生物学方法进行菌种鉴定,然后将结核分枝杆菌复合群随机抽取部分MPT抗原阳性株及全部MPT抗原阴性菌株进行DNA提取、mpt64基因扩增测序和序列比对,并对结核分枝杆菌复合群MPT抗原呈阴性的临床分离株mpt64突变特征进行分析。 结果 2017年1—6月湖南省胸科医院就诊的结核病患者的痰液或支气管肺泡灌洗液等标本共分离出2 560株结核分枝杆菌,其中MPT抗原检测阳性有2 458株,MPT抗原检测阴性有102株,MPT抗原阴性占比3.98% (102/2 560)。随机抽取的20株MPT抗原阳性株的mpt64基因无突变。测序成功的85株MPT抗原阴性的临床分离株中,有81株mpt64基因存在 63 bp碱基的缺失突变,有4株存在单碱基突变,2株402位G→A,2株613和614位间加了碱基C。 结论 湖南省胸科医院MPT抗原呈阴性的结核分枝杆菌复合群临床分离株mpt64基因突变主要类型为63bp碱基的缺失。     

湖南省结核病四次流行病学调查细菌学耐药结果比较

为了解我省结核病的耐药趋势，对我省四次结核病耐药情况进行分析评价。