中国结核分枝杆菌MPT64蛋白多态性及对MPT64抗原检测试剂盒的敏感性影响

目的探讨中国结核分枝杆菌MPT64抗原的多态性及对其T/B细胞抗原表位的影响;应用MPT64抗原检测试剂盒对MPT64基因突变菌株和野生菌株进行检测,以进一步分析MPT64抗原多态性对结核感染检测的影响。方法从中国疾病预防控制中心传染病预防控制所结核室保存的2 346株国内结核分枝杆菌复合群临床分离株中挑选180株,对其MPT64基因扩增后进行序列比对,比较其T/B细胞抗原表位与非表位的多态性,对突变的菌株与野生菌株进行BACTEC MGIT 960系统与液体培养管进行培养,报阳后,用胶体金标记抗MPT64单克隆抗体采用免疫层析色谱法进行MPT64蛋白检测。结果 180株临床分离株中有15株(包括2株BCG菌株)表现有MPT64蛋白的多态性,占菌株数的8.33%,8株菌有63bp的缺失,4株菌有单位点的非同义突变,1株是单位点插入。MPT64基因的突变造成13个T细胞抗原表位(56.52%)和4个B细胞抗原表位(占80%)的改变,T/B细胞抗原表位区的dN/dS值均高于对应的非表位区。8株有63bp缺失的菌株胶体金检测阴性,对应的野生株检测阳性;5株单位点突变的菌株与对应的野生菌株胶体金检测均阳性。结论中国结核分枝杆菌MPT64蛋白存在多态性,这是产生抗原改变的原因之一,这会影响抗原相关功能的改变并引起免疫逃逸。63bp缺失会造成MPT64抗原检测试剂盒的假阴性,而某些单位点突变对检测效率无影响。     

MTBDRplus VER 2. 0检测耐药结核病的结果分析

目的 分析分子药敏检测为耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的GenoType MTBDRplus VER 2.0(简称MTBDRplus 2.0)结果,了解MTBDRplus 2.0对耐药MTB的检测效果和本地区耐药MTB的耐药基因特征。 方法 收集在湖南省胸科医院MTBDRplus 2.0检测为耐药, 且相同标本BACTEC MGIT 960液体(简称MGIT 960)培养出MTB的住院患者作为研究对象,收集患者的临床资料、液体药物敏感性试验(简称MGIT 960药敏)和MTBDRplus 2.0检测结果并进行分析。 结果 共收集到分子药敏检测为耐药的结核病患者199例,最终临床诊断为耐药结核病193例,包括耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis, MDR-TB)127例,单耐药结核病66例; MTBDRplus 2.0检测为利福平(rifampin, RFP)耐药的171株MTB,MGIT 960检测也耐药的有151株(88.3%),MTBDRplus 2.0检测为异烟肼(isoniazid, INH)耐药的149株MTB,MGIT 960检测也耐药的有145株(97.3%)。单耐药组和耐多药组的基因突变模式不全相同,MTBDRplus 2.0检测RFP和INH耐药基因突变频率最高的位点分别是rpoB S531L和katG S315T。 结论 MTBDRplus 2.0和MGIT 960技术检测耐RFP和(或)INH MTB符合率高,湖南省耐药MTB以rpoB S531L和KatG S315T突变型为主。     

结核分枝杆菌利福平分子药敏结果与其表型药敏差异的研究

目的 分析结核分枝杆菌利福平耐药的分子药敏(Xpert MTB/RIF)检测与在表型药敏(Bactec MGIT 960)检测结果不一致的机制。 方法 从2015年10月－2018年4月在长沙医学院第一附属医院进行 Xpert MTB/RIF 检测的8 274位患者中筛选出 Xpert MTB/RIF 检测利福平耐药而 Bactec MGIT 960 利福平敏感的患者39例,以及Xpert MTB/RIF 检测利福平敏感而 Bactec MGIT 960 利福平耐药的患者7例,共46例患者标本复苏其分离株,然后提取基因组DNA并进行rpoB的利福平耐药决定区域(rifampicin resistance determining region, RRDR)测序,同时对所有复苏的分离株进行最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)测定,观察不同突变菌株的耐药程度。 结果 46例患者中有2例菌株复活失败、2例菌株丢失,剩下42例菌株完成测序,其余有5株菌株RRDR区未发生突变,剩余的37株在rpoB基因的RRDR区有不同位点及不同类型的变异,其中有2株在508和509位点发生缺失突变,其它突变的位点有511、516、526、531、533。多数突变位点集中在526位,突变类型包括His526Asn、His526Leu、His526Gly、His526Cys四种,其余位点突变形式为Leu511Pro、Asp516Tyr、Leu533Pro。在511、516、526、533位点突变中,MIC测定除了一株突变类型为His526Leu的菌株为32 μg/ml外,其余位点突变均表现为低水平耐药或敏感,而531位点突变中Ser531Trp、Ser531Leu均表现为高水平耐药。 结论 基于rpoB测序和MIC测定的结果显示特定rpoB基因突变可能导致结核分枝杆菌利福平耐药水平的改变,结核分枝杆菌利福平耐药(Xpert MTB/RIF)检测与(Bactec MGIT 960)检测结果不一致。     

深圳市学校结核病监测中基因分型技术的研究

目的 应用DiversiLab基因分型系统对深圳市学校结核分枝杆菌进行基因分型,初步探讨其分型特征以及在学校结核病监测中的应用。 方法 对来自2015年深圳市学校结核病患者的41株结核分枝杆菌菌株,采用DiversiLab基因分型系统对其进行基因分型。 结果 DiversiLab基因分型系统将41株结核分枝杆菌分为8个基因群,分型显示高度多态性,各个基因群分别占比为Ⅰ群12.2%(5/41)、Ⅱ群22.0%(9/41)、Ⅲ群7.3%(3/41)、Ⅳ群24.4%(10/41)、Ⅴ群17.1%(7/41)、Ⅵ群2.3%(1/41)、Ⅶ群9.8%(4/41)、Ⅷ群4.9%(2/41),以Ⅱ群和Ⅳ群为主。各个基因群的患者均有来自深圳户籍、广东省户籍和广东省外户籍的人口,深圳户籍患者主要基因型集中在Ⅳ群(33.3%,4/12)和Ⅴ群(41.7%,5/12)基因群中。各个基因型与户籍人口之间差异无统计学意义(χ²=15.280,P=0.270>0.05)。研究中发现了5株耐药菌株,耐药菌株同样来自各个不同的户籍人口,但是并未发现统计学联系(χ²=4.237,P=0.077>0.05)。 结论 深圳市学校结核病基因分型存在高度多样性,有主要流行基因群,并且存在跨区域流行传播的可能性。     

分泌蛋白在痰液及培养液中鉴定结核分枝杆菌复合群的应用研究

目的评价两种结核菌分泌蛋白试剂分别应用于痰液和培养液中鉴定结核分枝杆菌复合群(MTC)的效果。方法①采用结核分枝杆菌多克隆分泌蛋白试剂对20例健康人呼吸道分泌物以及151例疑为结核病病人痰标本进行检测,同时使用MGIT 960培养仪分离培养,阳性分离菌株进行传统方法鉴定,并使用结核分枝杆菌单克隆分泌蛋白MPT64鉴定。②23株分枝杆菌标准菌株采用MPT64单克隆试剂鉴定。③找出两种试剂的检出限。稀释H37RV标准菌株找出MPT64单克隆试剂的检出限,分析涂片阳性级别与多克隆分泌蛋白试剂结果关系找出该检出限并作比对。结果 MPT64单克隆试剂与多克隆分泌蛋白试剂的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为98.7%、100.0%、88.9%、98.7%和81.0%、85.9%、83.1%、84.0%、83.6%。MPT64单克隆试剂在3 000 CFU/ml的菌液浓度检出。多克隆分泌蛋白试剂在5 000～10 000 CFU/ml的阳性痰中检出。两者的平均检测时间为12 d和1 d。结论应用MPT64单克隆分泌蛋白试剂检测鉴定培养液中MTC是一种准确、快速、简便而又不需要任何仪器设备的实用型方法,值得临床推广应用;而多克隆分泌蛋白试剂可直接应用于痰液中检测鉴定MTC,尽管在灵敏度、特异性、准确度上未尽人意,但其快速性仍不失为一种让人期待的方法。     

湖南省某专科医院非结核分枝杆菌临床分离株菌种鉴定及药敏结果

 目的 探讨非结核分枝杆菌肺病（NTMPD）菌种分布及耐药性,为其临床诊治提供依据。方法 收集2017—2019年湖南省某胸科医院BACTEC MGIT 960系统培养阳性的临床分离菌株,经MPB64检测以及PNB、TCH培养基生长试验分离出非结核分枝杆菌（NTM）,应用16Sr RNA、Hsp65、ITS基因测序法将NTM鉴定至种,采用最低抑菌浓度（MIC）法检测其中脓肿分枝杆菌对10种抗菌药物的耐药性。结果 10 443份MGIT 960报告阳性的菌株中,共检出NTM 1 227株,检出率为11.7%。经菌种鉴定,居前4位者依次为胞内分枝杆菌（27.8%）、脓肿分枝杆菌（25.3%）、戈登分枝杆菌（16.5%）、鸟分枝杆菌（16.1%）。脓肿分枝杆菌对阿米卡星、克拉霉素和利奈唑胺的敏感性较高,敏感率分别是94.6%、87.5%、82.1%;对其他药物的敏感率均低于50%。结论 湖南省NTM流行的菌种以脓肿分枝杆菌和胞内分枝杆菌为主,阿米卡星和克拉霉素可作为该省临床治疗脓肿分枝杆菌感染患者的优选抗菌药物。     

结核分枝杆菌实验室检测方法的结果差异分析及临床诊断评估

目的 分析常见结核分枝杆菌实验室检测结果,并探讨各个检测方法的临床诊断价值。 方法 采用痰涂片抗酸染色、BD BACTEC MGIT 960分枝杆菌快速培养法(BD-960)、实时荧光定量PCR法( TB-DNA检测方法),对357例痰标本进行检测,并对其结果进行组合分析。 结果 痰涂片抗酸染色法、BD-960培养法、TB-DNA检测的阳性率分别为14.3％、40.9％、30.5％(χ²=62.9,P<0.05)。在146例培养(+)标本中,TB-DNA阳性率为68.5%;在211例培养(-)中,TB-DNA阳性率为4.3%;在培养(+)DNA(+)菌株中,痰涂片阳性率为48.0%;在培养(+)DNA(-)菌株中,痰涂片阳性率为4.3%;在培养(-)DNA(-)菌株中,痰涂片阳性率为0;在培养(-)DNA(+)菌株中,痰涂片阳性率11.1%。 结论 BD-960培养法的结核分枝杆菌检测阳性率、准确率高,仍是确诊肺结核的金标准,但结合其他检测方法,可进一步提早、提高检测的准确率。     

新生儿33 321例耳聋基因筛查结果分析

目的 探讨新生儿耳聋基因筛查的意义,对携带耳聋基因儿童的家长提出预警并指导其进行听力学随诊和生活防护。方法 经产妇及家属知情同意后,收集本地区2014年8月—2018年2月出生的33 321例新生儿足跟血,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术进行4个常见耳聋相关基因20个突变点的检测。结果 33 321例新生儿检测出阳性1 693例,占总人数的5.08%。分别为GJB2基因杂合突变893例,携带率为2.68%;SLC26A4基因杂合突变546例,携带率为1.64%;GJB3基因杂合突变123例,携带率为0.37%;线粒体12SrRNA基因均质或异质突变96例,携带率为0.29%。另发现GJB2基因纯合或复合杂合突变8例,SLC26A4基因纯合或复合杂合突变2例,双基因杂合突变25例。结论 新生儿耳聋基因筛查对听力障碍患儿的早期发现、早期诊断和早期干预具有重要意义。     

黔北地区城、乡肺结核发病及分子流行病学特征差异比较

目的 比较黔北地区城乡肺结核患者流行病学特征及结核分枝杆菌基因型特征的差异,分析农村结核高发的原因。方法 对2011年12月－2013年6月期间黔北地区某医院及某疾病预防控制中心就诊肺结核患者的人口学资料及结核相关的行为生活方式特征进行调查,收集痰液标本并进行培养,培养阳性的进一步采用分枝杆菌散在重复单元(MIRU)技术对结核分枝杆菌进行基因分型。结果 农村患者初中以下文化程度、家庭年均人收入少于4 000元及肉类摄食每天不足一次者的构成比分别为56%、67.18%、54.96%,高于城市(镇)的26.15%、50.77%、40%(均P＜0.05);农村患者的结核分枝杆菌基因成簇率为19.08%(25/131),高于城市(镇)的7.69%(5/65)(P＜0.05),农村组基因簇群中具有流行病学关联的占48%,高于城镇组的0%。结论 黔北地区贫穷及高近期传播仍然可能是农村肺结核高发的原因。     

重症监护病房耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制和分子分型的研究

目的 分析重症监护病房(intensive care unit, ICU)耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药特征及其耐药机制。方法 收集 2018年1月—2019年9月广州市某医院ICU分离的37株耐亚胺培南铜绿假单胞菌(imipenem resistant Pseudomonas aeruginosa, IRPA),使用微生物鉴定药敏分析系统分析菌株的抗菌药敏感性,脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)进行聚类分析,PCR检测金属β-内酰胺酶基因以及oprD2基因,并对阳性株进行测序。结果 37株IRPA的抗菌药敏感性结果显示对β-内酰胺类抗生素的耐药率均很高,而氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药的耐药率很低。37株IRPA有11株检出携带金属酶基因,其中7株blaVIM-2,4株blaIMP-9。oprD2缺失和有意义突变合计33株,占89.2%。PFGE 分析结果显示菌株高度克隆多样性,但携带金属酶基因的11株菌被分成了两个带型簇。结论 本实验证实oprD2基因缺失,发生有义突变,是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要机制;携带blaVIM-2和blaIMP-9的IRPA菌株有在ICU引起暴发流行的风险。     

COL1A2新发突变致新生儿成骨不全症1例报告并文献复习

目的 对COL1A2新发突变致1例新生儿成骨不全症的临床表型及基因变异特征进行分析,提高对成骨不全症(OI)的诊断和认识。方法 回顾福建中医药大学附属厦门市第三医院儿科2017年8月确诊的1例新生儿成骨不全症临床资料及辅助检查,并提取患儿及其父母外周血DNA,采用全序列外显子基因检测技术检测成骨不全症相关基因,对突变基因进一步分析并复习相关文献。结果 患儿的COL1A1基因未检出致病性变异,而COL1A2 基因检测发现一杂合错义突变(c.G2882A,p.G961D),PubMed及HGMD数据库均未见报道,该错义突变来自母亲,而其父正常。结论 依据本例患儿临床信息、疾病遗传模式和Exomiser软件综合评价,预测COL1A2 基因新发突变(c.G2882A,p.G961D)是成骨不全症致病突变。     

悬浮阵列技术在结核分枝杆菌检测中的研究进展

悬浮阵列技术(Luminex xMAP技术)是一种将编码微球捕获特定检测物的抗原、抗体或核酸探针等分子的有效方法。本文综述了结核分枝杆菌检测的研究进展,探讨以结核分枝杆菌的Rpo B基因和CYP141基因为靶标应用Luminex xMAP技术,构筑悬浮阵列体系,建立一种快速、灵敏、特异的方法,实现结核分枝杆菌及其耐药基因联合检测,拓展出一条更为经济、迅速、便捷的结核分枝杆菌快速检测新路径。     

两种巢氏PCR方法检测二期梅毒血液标本的比较

目的 比较两种巢氏PCR方法在检测二期梅毒患者血液标本中的价值。 方法 对tpp47和polA,分别建立两个巢氏PCR扩增全血中的梅毒螺旋体DNA。 结果 在353例梅毒阳性全血中,nPCR-tpp47和nPCR-polA分别检出142例(40.2%)和132例(37.4%),结果差异有统计学意义(χ²=5.79,P<0.05);两种巢氏PCR在血清学试验高滴度(RPR≥1:8或TPPA≥1:2 560)组的检出率明显高于低滴度组(RPR<1:8或TPPA<1:2 560)。 结论 在检测二期梅毒全血标本Tp DNA时,nPCR-tpp47优于nPCR-polA;巢氏PCR方法可作为梅毒血清学试验的补充试验。     

快速生长分枝杆菌菌血症的菌种分布及临床研究

目的对5例快速生长分枝杆菌菌血症患者进行菌种鉴定和临床特征分析,提高该病诊疗水平。方法对海南省人民医院2016—2017年收集的5株快速生长分枝杆菌采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术进行初步鉴定,16s rRNA确证,结合文献报道的15例快速生长分枝杆菌菌血症病例分析其临床特征。结果 MALDI-TOF MS鉴定结果为马德里分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、产黏液分枝杆菌各一株,偶发分枝杆菌群2株。16s rRNA鉴定结果为马德里分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、产黏液分枝杆菌、偶发分枝杆菌、猪分枝杆菌各1株。主要临床症状为发热,2例死亡,3例治疗后好转。结论 MALDI-TOF MS是一种简单、方便、快速的快速生长分枝杆菌鉴定方法,鉴定结果与16s rRNA序列分析的符合率高。快速生长分枝杆菌菌血症多发生于人工材料、导管植入患者,实验室和临床应重视该病的诊断。     

结核分枝杆菌Lsr2蛋白原核重组表达及其多克隆抗体制备

目的 利用原核系统获得重组结核分枝杆菌Lsr2蛋白,制备抗Lsr2多克隆抗体。 方法 以临床标准株 H37Rv DNA为模板,合成引物PCR扩增Lsr2核酸序列,插入原核表达载体pET28a,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达,柱上复性纯化后,重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备并纯化抗Lsr2多克隆抗体,采用间接ELISA和Western-blotting实验对抗体进行验证。 结果 成功构建pET28a-Lsr2表达质粒,重组蛋白Lsr2经SDS-PAGE电泳鉴定分子量为14 kD。亲和层析及柱上复性后,纯化的重组蛋白纯度在95%左右。制备的抗Lsr2多克隆抗体效价在1:5.5×10⁶以上,并能特异性识别纯化的重组蛋白和结核分枝杆菌菌体蛋白。 结论 成功在原核系统内表达并纯化了重组结核分枝杆菌Lsr2蛋白,制备了高效价的抗Lsr2多克隆抗体,为进一步研究Lsr2蛋白的功能,筛选其下游相互作用蛋白以及相关分子机制研究奠定了基础。     

结核分枝杆菌L型特征及临床意义研究进展

结核病是影响公共卫生健康安全的一种慢性传染性疾病。其病原菌是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB),而结核分枝杆菌L型(Mycobacterium tuberculosis L-forms,MTB-L)是MTB细胞壁缺失的一种特殊形态,在显微镜下呈现抗酸染色阴性、形态多样的特点,且目前临床实验室检测率低,较难发现。近年来MTB-L型在临床中的报道越来越多,本文通过对MTB-L的生物学特征、耐药性和临床致病力等方面进行综述。     

全身播散性偶发分枝杆菌病1例报告并文献复习

目的探讨偶发分枝杆菌引起全身播散性感染的临床特点,以提高诊断率及对该病的认识。方法报告全身播散性偶发分枝杆菌感染1例,并结合相关文献进行分析。结果患者全身多系统累及(包括肺部、淋巴结、皮肤、关节),淋巴结组织培养偶发分枝杆菌阳性,给予克拉霉素+左氧氟沙星+利奈唑胺治疗,病情缓解。结论偶发分枝杆菌引起全身播散性感染罕见,其机制可能与患者存在GATA2的缺乏和IFN-γ自身抗体有关,确诊主要依靠病理学及微生物学检查,但阳性率偏低,诊断困难。     

贵州地区2017—2020年结核分枝杆菌卷曲霉素耐药与相关基因突变关系

 目的 检测结核分枝杆菌(M.tb)对卷曲霉素(CM)耐药相关基因突变情况,探究基因型与表型的关联,为临床使用CM提供指导。方法 收集2017—2020年某院痰抗酸染色阳性的肺结核病患者痰标本,培养获得临床分离M.tb,药物敏感试验(DST)明确菌株耐药表型;提取DNA送全基因组测序(WGS),检测CM耐药相关基因tlyA、rrs、rpsL、eis、Rv0194及Rv1258C的突变情况,探索CM与利福平(RIF)表型耐药相关性。结果 共培养123株M.tb,WGS检出6个CM耐药相关基因共23个非同义突变位点;DST结果显示52例RIF耐药,4例CM、RIF均耐药。CM耐药菌株检出rrs基因A1401G、rpsL基因A128G以及Rv0194基因C3293T和T221C非同义突变位点;CM与RIF耐药相关性分析显示,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 M.tb CM耐药可能与rrs基因A1401G、rpsL基因A128G和Rv0194基因C3293T突变有关,CM存在与RIF交叉耐药可能,在制定抗结核治疗方案时可作参考。     

儿童血流感染病原菌人苍白杆菌的流行种系及耐药特点

目的 了解儿童血流感染病原菌人苍白杆菌的流行种系及耐药特点,为临床诊疗提供依据。方法 收集湖南省儿童医院2010年1月－2017年12月收治的全自动微生物鉴定分析仪鉴定为人苍白杆菌败血症患儿的194株病原菌菌种,采用质谱仪重新鉴定,再取其中61株用基因测序法鉴定,同时对药物结果进行统计。结果 194株原鉴定为人苍白杆菌的菌株有163株确定为人苍白杆菌,占84.0%,其他31株分别是解糖精假苍白杆菌26株,假贵格纳苍白杆菌4株,中间苍白杆菌1株。苍白杆菌对氨曲南100%耐药。人苍白杆菌对氨苄西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢唑啉、头孢他啶耐药率达90.0%以上,对左氧氟沙星、亚胺培南耐药率为0%,对环丙沙星、丁胺卡那、庆大霉素耐药率低于2.0%,对复方新诺明、头孢吡肟耐药率小于21.5%。假苍白杆菌对氨苄西林、头孢唑啉耐药率小于50%,对头孢他啶、头孢吡肟、丁胺卡那、庆大霉素耐药率低于10.0%。对左氧氟沙星、环丙沙星、哌啦西林/他唑巴坦、复方新诺明耐药率为0%,对亚胺培南则有16.1%的耐药率。人苍白杆菌有AmpC/R基因,假苍白杆菌没有。结论 湖南省儿童苍白杆菌血流感染的流行菌株主要是人苍白杆菌,其次为解糖精假苍白杆菌和假贵格纳苍白杆菌等。传统仪器无法区分苍白杆菌的种系,而人苍白杆菌和假苍白杆菌的耐药性有差别。人苍白杆菌可选用头孢吡肟,重症患儿可用亚胺培南;假苍白杆菌可选用头孢他啶、头孢吡肟、哌啦西林/他唑巴坦。