真菌培养法在诊断一例肺结核并发脓肿分枝杆菌感染患者中的应用

<正>近年来,随着实验室检测能力和技术水平的提高,以及临床医师对非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacteria,NTM)潜在致病性认识的增强,NTM已报道的菌种越来越多,导致NTM感染呈明显上升趋势~([1])。为进一步提高实验室对NTM检测方法的认识和鉴别能力,增进临床医师对实验室结果的正确认知,现分享1例应用真菌培养法检出NTM的患者资料。     

湖南省231株结核分枝杆菌Spoligotyping和MLVA基因分型方法及其结果分析

随着1998年结核分枝杆菌(Mycobacteriu tuberculosis)H37Rv全基因测序工作完成[1],以及分子生物学技术的发展,人类已采用基因分型技术在分子水平上了解结核分枝杆菌的传播规律和近期传染率等.     

多重耐药结核病的成因分析

对我院1999年住院病人中属MDR－TB患者进行成因分析，结果显示，产生MDR－TB的主要原因是不规则治疗（占86．4％），其中自觉症状缓解后自行停药的居首位（占43．2％），表明应提高患者的保健意识及加强医务人员的继续教育培训工作并严格执行DOTS，可使MDR－TB得到逐步控制。     

MPT抗原阴性的结核分枝杆菌复合群临床分离株mpt64突变特征分析

目的 分析MPT抗原阴性的结核分枝杆菌复合群临床分离株mpt64突变特征。 方法 收集湖南省胸科医院2017年1—6月BACTEC MGIT 960法(MGIT 960)培养分离的菌株,通过生化和分子生物学方法进行菌种鉴定,然后将结核分枝杆菌复合群随机抽取部分MPT抗原阳性株及全部MPT抗原阴性菌株进行DNA提取、mpt64基因扩增测序和序列比对,并对结核分枝杆菌复合群MPT抗原呈阴性的临床分离株mpt64突变特征进行分析。 结果 2017年1—6月湖南省胸科医院就诊的结核病患者的痰液或支气管肺泡灌洗液等标本共分离出2 560株结核分枝杆菌,其中MPT抗原检测阳性有2 458株,MPT抗原检测阴性有102株,MPT抗原阴性占比3.98% (102/2 560)。随机抽取的20株MPT抗原阳性株的mpt64基因无突变。测序成功的85株MPT抗原阴性的临床分离株中,有81株mpt64基因存在 63 bp碱基的缺失突变,有4株存在单碱基突变,2株402位G→A,2株613和614位间加了碱基C。 结论 湖南省胸科医院MPT抗原呈阴性的结核分枝杆菌复合群临床分离株mpt64基因突变主要类型为63bp碱基的缺失。     

105株脓肿分枝杆菌临床分离菌株对10种抗菌药物的敏感性分析

  目的   分析脓肿分枝杆菌临床分离菌株对10种抗菌药物的敏感性,为脓肿分枝杆菌病的治疗提供参考依据。   方法   收集湖南省胸科医院2019—2020年分离鉴定出的脓肿分枝杆菌临床菌株,采用微孔药敏板最小抑菌浓度试验,检测脓肿分枝杆菌对磺胺甲恶唑、利奈唑胺、环丙沙星、亚胺培南、莫西沙星、头孢西丁、阿米卡星、克拉霉素、妥布霉素和强力霉素（多西环素）共10种抗菌药物的敏感性。   结果   共收集脓肿分枝杆菌临床分离菌株105株。 结果显示,脓肿分枝杆菌对阿米卡星、克拉霉素敏感性高,分别为98.10%和93.33%;对利奈唑胺的敏感性为78.10%,而其他药物的敏感性均低于50%。 脓肿分枝杆菌对强力霉素的耐药性最强,耐药率为84.76%;其对磺胺甲恶唑、环丙沙星和亚胺培南的耐药率也较高,分别为75.24%、74.28%、72.38%。96.19%（101/105）的菌株同时对多种抗菌药物耐药。   结论   脓肿分枝杆菌对抗菌药物的耐药率较高。 阿米卡星、克拉霉素及利奈唑胺可作为临床治疗脓肿分枝杆菌病的优选抗菌药物。 最好是在药敏试验下进行精准抗感染治疗。     

湖南省51株疑似非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定

目的对2011年湖南51株非结核分枝杆菌(NTM)临床分离株进行菌种鉴定。方法从湖南省结核病防治所接收到分枝杆菌临床分离株后,通过罗氏培养基(L-J)、对硝基苯甲酸(p-nitrobenzoic acid,PNB)和噻吩-2-羧酸肼(2-thiophene carboxylic acid hydrazide,TCH)鉴别培养基和多位点PCR方法鉴别出非结核分枝杆菌后,对其进行基于rpoB基因的限制性酶切片段长度多态性(PRA)和基因测序方法的鉴定。结果从2011年湖南省51份临床分离菌株中培养出51份抗酸杆菌,通过初步鉴别(即L-J、PNB/TCH鉴别培养基培养)鉴别出NTM有51株,经rpoB-PRA及进一步的测序鉴别出50株(98.04%)NTM,分别为胞内分枝杆菌(Mycobacterium intracellμlare)22株(43.14%),鸟分枝杆菌(M.avium)13株(25.49%),脓肿分枝杆菌(M.abscessus)6株(11.76%),偶发分枝杆菌(M.fortuitum),戈登分枝杆菌(M.gordonae),新产色分枝杆菌(M.neoaurum)各2株(均占3.92%),堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii),马赛分枝杆菌(M.massiliense),福西亚分枝杆菌(M.phocaicum)各1株(分别占1.96%);以及鼻疽诺卡菌(Nocardia farcinica)1株(1.96%)。结论抗酸染色阳性、PNB/TCH鉴定为非结核分枝杆菌临床分离株中包含不同种类的非结核分枝杆菌和诺卡菌。湖南非结核分枝杆菌病的病原至少有9种。使用分子生物学方法能够快速、准确地对其鉴别。     

MTBDRplus VER 2. 0检测耐药结核病的结果分析

目的 分析分子药敏检测为耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的GenoType MTBDRplus VER 2.0(简称MTBDRplus 2.0)结果,了解MTBDRplus 2.0对耐药MTB的检测效果和本地区耐药MTB的耐药基因特征。 方法 收集在湖南省胸科医院MTBDRplus 2.0检测为耐药, 且相同标本BACTEC MGIT 960液体(简称MGIT 960)培养出MTB的住院患者作为研究对象,收集患者的临床资料、液体药物敏感性试验(简称MGIT 960药敏)和MTBDRplus 2.0检测结果并进行分析。 结果 共收集到分子药敏检测为耐药的结核病患者199例,最终临床诊断为耐药结核病193例,包括耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis, MDR-TB)127例,单耐药结核病66例; MTBDRplus 2.0检测为利福平(rifampin, RFP)耐药的171株MTB,MGIT 960检测也耐药的有151株(88.3%),MTBDRplus 2.0检测为异烟肼(isoniazid, INH)耐药的149株MTB,MGIT 960检测也耐药的有145株(97.3%)。单耐药组和耐多药组的基因突变模式不全相同,MTBDRplus 2.0检测RFP和INH耐药基因突变频率最高的位点分别是rpoB S531L和katG S315T。 结论 MTBDRplus 2.0和MGIT 960技术检测耐RFP和(或)INH MTB符合率高,湖南省耐药MTB以rpoB S531L和KatG S315T突变型为主。     

湖南省某专科医院非结核分枝杆菌临床分离株菌种鉴定及药敏结果

 目的 探讨非结核分枝杆菌肺病（NTMPD）菌种分布及耐药性,为其临床诊治提供依据。方法 收集2017—2019年湖南省某胸科医院BACTEC MGIT 960系统培养阳性的临床分离菌株,经MPB64检测以及PNB、TCH培养基生长试验分离出非结核分枝杆菌（NTM）,应用16Sr RNA、Hsp65、ITS基因测序法将NTM鉴定至种,采用最低抑菌浓度（MIC）法检测其中脓肿分枝杆菌对10种抗菌药物的耐药性。结果 10 443份MGIT 960报告阳性的菌株中,共检出NTM 1 227株,检出率为11.7%。经菌种鉴定,居前4位者依次为胞内分枝杆菌（27.8%）、脓肿分枝杆菌（25.3%）、戈登分枝杆菌（16.5%）、鸟分枝杆菌（16.1%）。脓肿分枝杆菌对阿米卡星、克拉霉素和利奈唑胺的敏感性较高,敏感率分别是94.6%、87.5%、82.1%;对其他药物的敏感率均低于50%。结论 湖南省NTM流行的菌种以脓肿分枝杆菌和胞内分枝杆菌为主,阿米卡星和克拉霉素可作为该省临床治疗脓肿分枝杆菌感染患者的优选抗菌药物。     

BACTEC MGIT960分枝杆菌分析系统结果分析

目的评价美国BD公司生产的BACTECMGIT960分枝杆菌分析系统（960）快速分离分枝杆菌效果。方法采用BACTECMGIT960分枝杆菌分析系统对临床标本进行分析，同时用《结核病诊断细菌学检验规程》规定的中性改良罗氏培养基法（L—J法）进行平行对照，比较其对不同来源的样本中分枝杆菌的分离率、阳性报告时间。结果对1449份标本用960和传统的中性改良罗氏培养基进行平行接种，960培养的阳性率为32．9％（482／1449），传统的L—J法培养的阳性率为25．5％（370／1449），前者明显高于后者（X^2=61．65，P〈0．005）。960的污染率为2．3％，L—J法的污染率为6．5％，前者明显小于后者（X^2=29．42，P〈0．005）。阳性报告时间方面，14d内支纤镜提取物（BF液）晚于其它标本；而对链霉素（STR）、异烟肼（INH）、利福平（RIF）和乙胺丁醇（EMB）全耐药菌株早于其它耐药菌株。结论应用BACTEC MGIT960系统分离培养分枝杆菌可以明显提高分离分枝杆菌的阳性率和减少污染。     

2012—2017年湖南省非结核分枝杆菌感染的特征分析

目的 分析湖南省2012—2017年非结核分枝杆菌(NTM)的感染趋势、分布特征、流行状况,为湖南省NTM感染的防治提供参考依据。方法 收集2012—2017年来自湖南省14个地级市、在湖南省胸科医院经BACTEC MGIT 960 法确诊为分枝杆菌感染的患者15576例,其中男性11126例,女性4450例。分离出分枝杆菌菌株15576株(每例患者1株)。采用MPB64蛋白免疫胶体金法、对硝基苯甲酸(PNB)生长试验进行结核分枝杆菌复合群(MTBC)与NTM的初步鉴别,应用16S rRNA、Hsp65测序法对初步鉴定为NTM的菌株进行菌种鉴定,并对NTM感染者的相关临床资料进行分析。结果 2012—2017年NTM检出率为10.17%(1584/15576);男性NTM感染者占62.06%(983/1584),女性占37.94%(601/1584);年龄分布中,40~岁的中老年患者最多,占39.02%(618/1584);职业分布以农民为主,占66.67%(1056/1584)。2016年NTM菌种分布达24种,位列前4者分别为:胞内分枝杆菌[25.23%(84/333)]、脓肿分枝杆菌[24.62%(82/333)]、戈登分枝杆菌[18.62%(62/333)]、鸟分枝杆菌[16.82%(56/333)];2017年NTM菌种分布达21种,位列前4者分别为:胞内分枝杆菌[27.15%(104/383)]、脓肿分枝杆菌[22.46%(86/383)]、戈登分枝杆菌[21.15%(81/383)],鸟分枝杆菌[17.49%(67/383)]。结论 2012—2017年湖南省NTM检出率处于较高水平,感染人群以男性、中老年、农民为主,以致病NTM菌居多。