肺炎链球菌不同菌株自溶酶基因的克隆、序列分析及重组表达

目的克隆肺炎链球菌自溶酶(LytA)的基因序列，并进行重组表达。方法分别提取不同临床分离株的基因组DNA，根据已知肺炎链球菌野生R6株LytA基因序列设计引物，进行PCR扩增，将获得的目的基因片段克隆人原核表达质粒，然后测序；利用生物信息学方法，对不同临床分离株LytA基因序列进行比较分析，同时进行LytA基因的重组表达。结果从不同临床分离株的基因组中均扩增出完整的LytA基因片段，成功构建了重组质粒pGEX-4T-1-LytA。比较不同临床分离株LytA基因的DNA序列及推测的氨基酸序列，发现各株LytA基因序列及氨基酸序列间存在差异。通过异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导，LytA基因在大肠埃希菌JM109中得到高效表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示pGEX-4T-1-LytA融合蛋白相对分子质量约62000，与理论预测一致。结论序列分析发现各分离株的LytA基因序列及氨基酸序列间存在差异，但同源性极高，推测LytA基因序列保守，可用于疫苗研发。     

完全控制的支气管哮喘患者肺功能和气道高反应性测定

目的检测完全控制的支气管哮喘患者肺功能和气道反应,探讨其临床意义。方法选择71例完全控制的支气管哮喘患者,测定肺功能和气道反应性。选择30名急性发作期支气管哮喘患者和15名健康老年人作为对照。结果71例完全控制的支气管哮喘患者中,49例(84.5%)支气管激发试验阳性,9例(15.5%)支气管激发试验阴性。完全控制哮喘组和哮喘组患者FEV1占预计值%和FEV1/FVC分比较差异有统计学意义(P0.01);完全控制哮喘组和健康对照组受试对象FEV1占预计值%和FEV1/FVC比较差异无统计学意义(P0.05)。结论完全控制的支气管哮喘患者多数存在气道高反应性,测定患者气道反应性有助于指导哮喘治疗。     

月经前哮喘1例并文献复习

通过报道1例典型的月经前哮喘(PMA),结合复习相关文献,讨论PMA的患病率、发病机制和治疗。40%左右女性哮喘患者月经前出现哮喘加重,但经平喘治疗后仍每次月经前均发作或加重的典型PMA仍少见,PMA的发病机制尚不清楚,可能与体内性激素改变有关,其治疗除哮喘防治指南中常用药物外还包括白三烯调节剂、黄体酮肌肉注射、口服避孕药、促性腺激素释放激素类似物等甚至包括双侧卵巢切除等,国外多种特殊治疗疗效不一,缺乏大量临床实验,所以有待更多相关研究。     

恒河猴IL-4与变异IL-4促进外周血单核细胞向树突状细胞转化功能的比较

 【目的】比较重组的恒河猴IL-4与变异IL-4在促进外周血单核细胞向树突状细胞转化方面功能的异同。【方法】 利用葡聚糖-泛影葡胺梯度离心法分离恒河猴外周血单个核细胞,阴性筛选非CD3+细胞,随后贴壁分离外周血单核细胞并进行流式细胞技术确定筛选结果。将所分离的外周血单核细胞分为阴性对照组,IL-4+GM-CSF组和vIL-4+GM-CSF组进行体外培养,收集细胞并表面染色CD14、CD1a、CD11c和CD83进行流式细胞分析。【结果】 利用三步分离的方法得到了纯度达90%的未激活的外周血单核细胞。培养后的细胞进行流式分析,结果提示与阴性对照组相比,IL-4+GM-CSF组和vIL-4+GM-CSF组细胞的CD14表达明显下降,而CD1a、CD11c和CD83表达明显上调,两实验组间无差别。【结论】 与IL-4相同,vIL-4亦能促进外周血单核细胞转化为树突状细胞。     

寄生虫基因组计划的启动

从1993年至1994年，发展中国家及发达国家的科学家制定并启动了许多寄生虫基因组计划，并在已有的合作基础上建立了几个绘制及测序这些中等大小基因组的联合组织。资金及其它支持来自WHO／TDR，如Welcome Trust及其它基金。因而，恶性疟原虫、曼氏血吸虫、克氏锥虫、布氏锥虫、利什曼原虫、马来丝虫及其它致病线虫的基因组已在研究之中。从最初阶段网络系统的建立、作图、资源的建库（EST、GSS、噬菌体、粘粒、BAC及YAC库的构建），测序工作以基因发现为开端，很快发展到小片段染色体，现在则是整个成熟基因组阶段。蛋白质组学，功能分析，基因操作及微阵列分析都在不同的水平上进行，由于用于全基因组测序的经费是固定的，因此除大型测序中心外大多参与此项计划的实验室，都开始定位于后基因组学。为了资料的处理、注解及深层分析，生物信息学网络在包括发展中国家扩展开来。     

基于网络平台的PBL教学法在医学微生物学教学中的应用初探

以问题为基础的学习（PBL）教学法是上世纪六十年代末在北美开始兴起的一种新的教学模式,是我国高等医学院校教育改革的新方向。本教研室近年开始在医学微生物学部分教学中试行网络教学与PBL教学相结合的新模式,即以案例讨论作为PBL教学的形式,并建立了方便师生交流的PBL教学网络交流平台,结果表明教学效果良好。     

伯氏疟原虫CSP片段与肝细胞特异结合的生物学特性

目的明确去除伯氏疟原虫CSP基因的中央重复序列不影响该蛋白的膜定位及与肝细胞特异结合的特性。方法将去除中央重复序列的伯氏疟原虫CSP基因片段（PbCSP’）克隆入原核表达质粒pGEX一4T一1,在大肠杆菌BL21／DE3中诱导表达,纯化重组蛋白,免疫大鼠获得相应抗体;用流式细胞仪筛选表达EGFP—PbCSP’的Hela细胞,应用Confocal照微镜及免疫组化方法观察表达的蛋白是否定位于细胞膜及能否与小鼠肝癌细胞（H22）特异结合。结果pGEX—PbCSP’的原核表达及纯化、免疫大鼠获得抗体,在Hela细胞表达的EGFP—PbCSP’蛋白定位于细胞膜,并能与小鼠肝癌细胞（H22）特异结合。结论去除中央重复序列的伯氏疟原虫CSP片段与肝细胞特异结合,为进一步研究其是否可作为肝细胞的靶向分子奠定了基础。     

寄生虫基因组:现状及未来展望

1 测序计划的现状不同于几年前的情况,许多寄生虫基因组研究工作正在进行中并且大量资料已被收集。获得的序列资料可分为3种基本类型:完成或接近完成的基因组序列,通常被称为‘contigs’重叠序列;基因组序列扫描(GSS)标签,由漂浮基因组序列产生(或随机克隆或人工细菌染色体末端序列);以及表达序列标签(ESTS),由来自寄生虫生活史的一个或多个阶段的mRNAs表达产生。至2001年3月30日,在基因库中共有136214寄生虫ESTs及177172寄生虫GSSs的描述。请注意,这些数字是被低估的,因为在序列产生、登上局域网以及在基因库被正式注册之间有一相当长的滞后期。     

肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白B细胞表位的预测、筛选及确定

目的确定肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白B细胞线性表位。方法通过生物信息学方法预测肺炎链球菌LytA蛋白分子的B细胞表位并人工合成相应肽段;经克隆、表达、纯化等步骤得到纯化的重组LytA(rLytA)蛋白用以免疫小鼠并进行Westen blot鉴定;取免疫组小鼠和对照组小鼠血清分别与人工合成的候选B细胞表位肽段进行间接ELISA检测,筛选出B细胞表位。结果利用多种方法分析LytA蛋白分子的B细胞表位,经整理得到11条候选肽段,命名为LB1到LB11,并进行了人工合成。利用分子生物学技术获得了rLytA蛋白并成功地免疫了小鼠,间接ELISA结果显示:肽段LB3、LB5、LB6、LB7、LB11与rLytA免疫小鼠的血清发生反应,其OD 450 nm读数比相应的阴性对照小鼠显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论确定了肺炎链球菌LytA蛋白分子5个B细胞线性表位的位置和序列。     

留学生病原生物学课程教学的总结与思考

随着国际交流与合作的频繁以及我国教育质量的提高,来华医学留学生教育已成为高校教育的重要组成部分.在留学生病原生物学教学过程中,不断提高教师的英语授课水平和自身素质是决定教学质量的关键;同时,运用多种教学方式激发学生的学习兴趣,加强实验课建设,完善师生间的沟通与了解也是提高教学质量的重要手段.本文就留学生的病原生物学教学进行了初步探讨,以期为留学生教育的深入开展提供思路.