血管紧张素Ⅱ促进内皮细胞凋亡和NOX4表达

目的分析高浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)时细胞内活性氧(ROS)、NOX4 mRNA水平和细胞凋亡的变化。方法倒置显微镜下观察人脐静脉内皮细胞形态;免疫组化法检测人脐静脉内皮细胞Ⅷ因子相关抗原的表达;RT-PCR检测HUVECs中NOX4的表达;流式细胞仪检测各组细胞内ROS生成量和细胞凋亡率,Hoechst染色分析细胞凋亡。结果高AngⅡ刺激HUVECs时,NOX4 mRNA表达上调,细胞内ROS生成增加,细胞凋亡增加。结论高AngⅡ上调HUVCEs内NOX4mR-NA表达并促进细胞内ROS生成和细胞凋亡。     

四氢叶酸还原酶基因C677T突变与阿尔茨海默病有关

目的　调查一些候选基因的多态性与阿尔茨海默病 (Alzheimer disease,AD)发病的关系。方法　利用Roche公司 Roche Molecular System(RMS)提供的同时检测多种基因多态性的方法 ,检测 1 5种与脂代谢、血压和血栓形成相关基因的 2 9个多态性位点的基因型 ,比较 3 7例 AD患者和 84名健康人在这些等位基因频率方面的差别。结果　 AD组载脂蛋白 E(Apo E)常见基因多态性 (ε2、ε3、ε4)和甲烯四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因的 C677T多态性分布与健康对照组相比有显著不同。Apo Eε4和 MTHFR基因的 677T等位基因的频率在AD组显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　 MTHFR基因的 677T等位基因可能是除 Apo Eε4外另一个与 AD发病有关的遗传危险因素     

北京机关工作人员血脂水平分类及分型的统计分析

目的 研究北京职业人群血脂水平分类及分型特征。方法 根据近年4033例血脂调查资料(男／女=2835／1198，年龄40～91岁)，按我国“血脂异常防治建议”并参考美国“ATPⅢ指南”作血脂分类及分型研究。结果 本组人群中50岁以上者只有1／3总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)都在合适水平，高TC者超过半数。高TC明显多于高TG，Ⅱa型高脂蛋白血症比Ⅳ型多2～3倍。男性中约有20％、女性中只有5％高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低；女性组达25％～39％、男性中仅有10％～14％HDL-C明显增高；高HDL-C多见于高TC者，而低HDL-C多见于高TG者。结论 本调查结果示中老年人血脂异常者已达2／3，表明动脉粥样硬化性心血管病的风险明显增高，防治血脂异常应有利于冠心病预防。     

ω-3多不饱和脂肪酸对HepG2细胞胆固醇代谢的影响

目的通过培养SD大鼠乳鼠心室肌细胞建立缺氧/复氧(H/R)模型,以模拟在体心肌缺血再灌注损伤,观察脂联素(APN)对心肌细胞缺氧/复氧内质网应激所致心肌细胞损伤的保护机制,为心脏缺血/再灌注损伤的防护提供理论依据。方法采用胰蛋白酶消化法原代培养乳鼠心室肌细胞,通过心肌α肌动蛋白免疫荧光法进行鉴定。选用培养72 h的单层心肌细胞,实验分为5组:正常对照组、单纯H/R组、H/R+30 mg/L APN组、H/R+30 mg/L APN+5 mmol/L SB203580(p38 MAPK抑制剂)组、H/R+5 mmol/L SB203580组。实验终止后,在倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态的变化,采用化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放,用RT-PCR和Western blot测定内质网应激指标GRP78、Caspase-12的表达。结果与空白对照组相比,单纯H/R后,细胞生长状态较差,内质网应激蛋GRP78、Caspase-12的蛋白和mRNA表达明显增高,LDH的释放量增加;APN预处理后进行H/R,可较大程度地逆转上述指标变化,与H/R组相比具有显著性差异(P<0.05);而与H/R+APN组相比,H/...     

高效液相色谱测定血清胆固醇酯n-3脂肪酸指数方法的建立

目的 建立一种HPLC测定血清胆固醇酯n-3脂肪酸指数的方法.方法 血清标本来自于70名北京医院健康志愿者和36例冠心病患者,用NaOH乙醇溶液水解血清三酰甘油,乙酸终止水解反应,正己烷提取胆固醇和胆固醇酯,HPLC分离脂质,UV(205 nm)检测.20:5-CE和22:6-CE用液相色谱串联质谱鉴定,各胆固醇酯峰面积修正因子用测定相应组分胆固醇含量的方法确定,归一化法定量,计算n-3脂肪酸胆固醇酯的百分比(即胆固醇酯n-3指数).结果 色谱分析在6 min内完成;影响胆固醇酯n-3指数测定的三酰甘油用4 mol/L NaOH乙醇溶液水解30 s可被去除;测定血清胆固醇酯n-3指数的批内和总CV为0.66%和0.90%,106名试验对象血清胆固醇酯n-3指数略呈正偏态分布(偏度值=1.25,峰度值=1.70),全体中位数为0.98%(0.37%～2.40%).n-3指数对数基本呈正态分布,(x)±s为0.003 7%±0.15%.性别组n-3指数分布与全体类似,女性和男性中位数(范围)分别为1.08%(0.60%～2.40%)和0.95%(0.37%～2.11%),不同性别间差异具有统计学意义(t=-3.021,P=0.003).结论 成功建立了HPLC测定血清胆固醇酯n-3指数的方法,有望在营养监测和心血管病危险分析中发挥作用.     

DHA缓解肝X受体激活所致HepG2细胞的甘油三酯积聚

目的 探讨DHA对肝X受体激动剂T0901317诱导的HepG2细胞甘油三酯积聚的影响.方法 体外培养HepG2细胞,以50 μmol/L DHA、10 μmol/L T0901317分别处理细胞以及50 μmol/L DHA 和10 μmol/L T0901317共同处理细胞48 h.油红O染色观察细胞内脂质沉积;氯仿-甲醇抽提细胞总脂质,酶法定量检测细胞甘油三酯含量;实时定量PCR检测与脂肪酸代谢相关基因如SREBP-1c、FAS、SCD-1、PPARα和CD36的mRNA水平.结果 与对照组相比,10 μmol/L T0901317处理48 h后,HepG2细胞内的油红O染色脂滴增多,甘油三酯浓度升高了50 %;脂肪酸合成基因:SREBP-1c、FAS和SCD-1及脂肪酸吸收基因CD36的mRNA水平分别升高了9.9、5.2、2.2和1.5倍,而脂肪酸降解基因PPARα的mRNA无变化.DHA与T0901317共同处理的HepG2细胞内脂滴明显减少;甘油三酯含量比T0901317处理组降低了15 %;SREBP-1c 、FAS 、SCD-1和 CD36的mRNA水平比T0901317处理组分别降低了92 %、31 %、46 %和60 %,而PPARα的mRNA水平比T0901317处理组升高了30 %.结论 DHA通过降低脂肪酸合成和吸收基因的表达并升高脂肪酸降解基因的表达缓解肝X受体激活所致HepG2细胞内甘油三酯积聚.     

超速离心高效液相色谱准确测定血清脂蛋白(a)胆固醇

目的建立血清脂蛋白(a)胆固醇的准确测定方法。方法血清与含脯氨酸的溴化钠溶液混合,使背景密度为1.044,超速离心;用含2-巯基乙醇的溴化钠溶液将底部组分的密度调节至1.040,再次超速离心,高效液相色谱测定顶部组分胆固醇即为脂蛋白(a)胆固醇。结果用2-巯基乙醇使脂蛋白(a)解离,使成为不含载脂蛋白(a)的脂蛋白(a),脂蛋白(a)解离前后存在明显密度分界区域,使脂蛋白(a)的分离和测定成为可能。测定脂蛋白(a)胆固醇的批内和总变异系数分别为1.84%～2.17%和2.85%～4.29%。结论建立新的血清脂蛋白(a)胆固醇测定方法,方法精密、可靠,可望在脂蛋白(a)测定标准化中发挥作用。     

胆固醇测定国际比对的总结

建立参考系统和参加标准化计划(国际比对)是标准化工作的两个主要内容。我们在建立胆固醇参考系统的同时,近年来也参加了国际上几个主要的胆固醇测定比对。现简要介绍比对计划和结果。1、美国疾病控制与预防中心-国家心肺血液研究所血脂标准化计划(CDC-NHLBI-LSP):该计划是国际     

北京部分职业人群血清非高密度脂蛋白胆固醇参考值及其分布

非高密度脂蛋白胆固醇代表除高密度脂蛋白胆固醇以外一切有致动脉粥样硬化作用的脂蛋白(以胆固醇含量表示)的总和,用总胆固醇减去高密度脂蛋白胆固醇即可算出.为了解北京部分职业人群非高密度脂蛋白胆固醇的参考值及其分布,选择调查2000～2001年来院体检的北京市事业及企业单位干部与职工(不包括体力劳动者),共计28161人(男/女为6/4),年龄20～85岁.按标准化要求空腹测定总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及甘油三酯水平,以Freidewald公式计算低密度脂蛋白胆固醇水平.结果发现,非高密度脂蛋白胆固醇随年龄上升,50岁以下男性高于女性,50岁以上女性高于男性.非高密度脂蛋白胆固醇年龄标化均值男为3.47mmol/L、女为3.29mmol/L,但老年男为3.90mmol/L、老年女高达4.21mmol/L.假定甘油三酯在临界值(1.7mmol/L)时,非高密度脂蛋白胆固醇比低密度脂蛋白胆固醇高0.77mmol/L,由于该组人群甘油三酯水平较低,各年龄组两项指标的差距都或多或少地低于0.77mmol/L.调查所得非高密度脂蛋白胆固醇水平比美国全国有代表性的数据大约低20%(男女相近),以上表明北京部分职业人群动脉粥样硬化性心血管病危险明显低于美国人.     

树鼩载脂蛋白AV基因的克隆、表达和纯化

目的　构建树鼩载脂蛋白AV原核表达载体并利用His标签纯化该蛋白。方法　从树鼩肝细胞中提取总RNA,经逆转录合成cDNA第一链,以cDNA第一链为模板,扩增载脂蛋白AV基因。PCR扩增产物和pET32a原核表达载体经过双酶切,将纯化回收的酶切产物按适当的摩尔比通过T4　DNA连接酶16℃连接过夜,连接产物转化大肠杆菌感受态细胞Top10,挑克隆测序。将克隆成功的载脂蛋白AV重组质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,并优化诱导条件。表达的载脂蛋白AV经镍离子螯合树脂纯化,采用BCA法分析蛋白浓度,纯度测定采用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合薄膜凝胶扫描分析获得。结果　挑选的克隆经测序证实载脂蛋白AV基因已经成功连接入pET32a原核表达载体中。在大肠杆菌BL21（DE3）中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,有分子量大小约60　kDa的特异性蛋白产生,与预期大小一致。重组蛋白诱导的最佳表达时间为5　h左右,最佳浓度约在20　μmol/L。镍离子螯合树脂柱亲和层析获得的纯化蛋白,经过聚丙烯酰胺凝胶电泳后薄膜凝胶扫描分析显示目的蛋白的纯度在95%以上。结论　成功构建了载脂蛋白AV的原核表达载体,该蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中实现了高效表达,纯化后的载脂蛋白AV纯度约95%,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。