FGF2对BMP-Smads信号转导通路的负调节机制初步研究

目的 :利用小鼠前成骨细胞系MC3T3 E1初探FGF2对BMPS Smads信号转导通路的调节机制。方法 :构建含 5个串联的来源于Smad6启动子的R Smads结合序列 (GC2 )的荧光素酶报告基因质粒 ( 5GC2 Lux)。以该质粒探讨FGF2对BMP组成活化型受体I(caALK 2 )激活的Smad5转录调控能力的影响。外源转染去除Smad5分子中MEK ERK通路磷酸化位点的突变体 ,探讨FGF2伙化的MEK ERK对BMPS Smads通路的调节作用。结果 :所构建报告基因质粒能够特异反映Smads的转录激活能力的变化。FGF2能够显著下调BMP组成活化型受体(caALK2 )激活的Smad5转录调控能力。外源转染Smad5突变分子仅能部分逆转FGF2对Smads通路的负调节效应。结论 :FGF2参与调节BMPs活化的信号通路可能不仅限于通过活化MEK ERK信号转导通路来下调Smads转录调控活性     

间充质干细胞治疗的安全性及伦理问题探讨

间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSC）的免疫调节、造血支持及促血管新生的功能特点,使其成为继造血干细胞之后又一个有望应用于临床的成体干细胞.有些国家已经批准MSC作为药物,用于治疗移植物抗宿主病、克隆氏病、骨关节炎等疾病;同时,数百个临床试验也在进行中,上万人已经接受了MSC治疗.然而,MSC本身及其治疗过程,都可能引起相应的毒副反应,甚至产生致命的并发症.因此,在MSC治疗某些疾病效果尚存在争议的情况下,进行这种新型细胞治疗的临床试验,应重视符合医学伦理规范的受试者知情权保护.参试者有权了解细胞治疗细节及其可能机制,潜在的风险及规避措施,其他可以采用的治疗手段及其与细胞治疗的比较等细节,以切实保护受试者权益.     

小鼠骨骼肌源间充质干细胞的分离与培养

为观察成体小鼠肌肉组织中是否含有间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)，将分离胶原酶消化的肌肉单个核细胞，在含10％胎牛血清的α—MEM／F12培养液中培养，观察培养细胞的形态、细胞化学及增殖特性特征，用流式细胞术分析细胞表型，并观察细胞体外向成骨细胞分化能力。结果显示，从小鼠肌肉组织中分离和培养获得的细胞具有良好的增殖特性，CD34及CD45阴性，CD29及Sca—1阳性率在90％以上。细胞化学染色显示，细胞非特异性酯酶和酸性磷酸酶为阳性，碱性磷酸酶阴性，糖原为弱阳性。细胞经维生素C，β-磷酸甘油及地塞米松诱导后，碱性磷酸酶活性明显增强，阳性率达到94％以上。结论：成体小鼠肌肉组织中含有间充质干细胞，是肌肉干细胞群体中的重要组成部分。     

脐带间充质干细胞在遗传性痉挛性截瘫中的应用

目的观察脐带间充质干细胞（UC-MSC）治疗遗传性痉挛性截瘫（HSP）的临床疗效及安全性。方法2010年9月及2011年4月,分别给予一HSP家系父子2人行UC-MSC鞘内注射治疗,两个疗程,每次1×106 cells/Kg,每周1次,4次为1个疗程。采用改良的Ashworth肌张力分级标准（MAS）、国际合作共济失调评分量表（ICARS）及日常生活量表（ADL）,对患者治疗前后神经功能、日常生活能力进行评定。结果第一疗程结束1个月与治疗前比较,2人MAS分级、ICARS及ADL评分均降低,两人行走站立稳定性及言语流利程度较治疗前改善;第二疗程结束后1个月与该疗程治疗前比较,2人ICARS及ADL评分降低,儿子肌张力进一步降低,父亲双上肢共济失调减轻。2人治疗后均未见明显不良反应发生。末次治疗结束后随访20个月,父、子俩分别于第二疗程治疗结束7个月及8个月后,症状继续加重。结论 UC-MSC鞘内注射治疗是安全的,可在一定时间内一定程度上减轻患者临床症状,提高患者生活质量,延缓疾病进展,但疗效不能持久。     

c-cbl反义RNA抑制K562细胞的增殖

为探讨原癌基因c-cbl对CML细胞增殖的影响,我们用RT-PCR克隆了包括5′端非编码区的人类c-cbl基因部分序列,将之反向插入pcDNA3载体,并转染K562及NB4细胞。经MTT实验、半固体集落培养和流式细胞术观察细胞增殖能力的改变。结果表明,限制性酶切分析及序列测定证明所克隆的基因核苷酸序列正确,MTT实验显示反义载体转染K562细胞生长明显受抑,24、48及72小时增殖抑制率分别为30.07％,42.53％和55.75％(P值均<0.001),FCM-BrdU法测定的细胞倍增时间之比为1∶1.87(P<0.02),细胞集落形成抑制率为33.01％,反义转染基因NB4细胞增殖率无改变。上述结果直接地证明了c-cbl在CML细胞生长中的重要性。     

大剂量甲氨喋呤副作用及其对策

我们对17例ALL 58次HD-MTX治疗,出现的副作用及处理进行了总结分析,认为:(1)副作用以呕吐、发热及药物性肝炎多见;(2)发热可能与MTX直接脑毒性有关;(3)药物性肝损害表现为GPT增高,可于短期内恢复;(4)局部应用0.1g/L四氢叶酸钙可减轻口腔及肛周溃疡的发生。     

人骨髓间充质干细胞释放膜微囊条件探索

间充质干细胞（MSC）释放膜微囊（MV）是其促血管再生的重要机制。本研究旨在探索人骨髓MSC释放MV的适宜条件。收集5份健康人骨髓标本,分离培养并鉴定MSC。将第5代MSC分别悬浮于含10％胎牛血清或无血清的培养液中,按2×10^6／皿接种于直径为150mm的培养皿中,在低氧（1％氧浓度）或常氧条件下培养72h,每组20皿。将培养上清高速离心收获MV。计数培养后贴壁细胞,并测定MV蛋白质含量。电子显微镜观察MV的形态以鉴定MV。流式细胞术分析MV的表面标志。在脐静脉内皮细胞培养体系中,加入不同来源的MV（10μg/m1）,培养72h后利用MTr实验观察细胞增殖活性。结果表明：多数Msc释放的MV直径〈100nm,在电子显微镜下呈特征性的中空膜样结构。MV表达CD29、CD44、CD73和CD105,不表达CD31和CD45。在常氧含血清、常氧无血清、低氧含血清和低氧无血清条件下,台盼蓝抵抗的贴壁细胞扩增倍数分别为4．1、1．8、5．8和3．7,计算10^8细胞释放的MV蛋白含量分别为463．48±138．74、1604．07±445．28、2389．64±476．75和3141．18±353．01μg。MTT实验表明,低氧条件下获得的MV具有更好的促内皮细胞增殖作用。结论：低氧可促进MSC释放MV,低氧和无血清培养MSC可能是制备MSC—MV的适宜条件。     

重组人IL—2激活外周血干细胞移植物的抗白血病细胞毒 …

目的：观察重组人ＩＬ－２体外激活Ｇ－ＣＳＦ动员的健康供者外周血干细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ，ＰＢＳＣ）移植物的抗白血病细胞毒作用，以及ｒｈＩＬ－２处理对ＰＢＳＣ移植物造血功能的影响。方法：细胞培养条件下，ＰＢＳＣ移植物与不同浓度ｒｈＩＬ－２（１０００，５００和２５０Ｕ／ｍｌ）共培养２４及７２ｈ，采用乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放法测定激活的ＰＢＳＣ移植物细胞毒作用，并应     

人骨髓间充质干细胞的培养及向软骨细胞分化

为建立分离纯化、大鼠扩增人骨髓间充质MSC，改进其冰冻保存的方法，并初步探索其体内向软骨细胞分化的最佳方法，以Percoll(1.073g/ml）密度梯度离心法分离人骨髓中单个核细胞，用含经筛选的10％的胎牛血清的低糖DMEM体外培养扩增骨髓干细胞（MSC），FCM鉴定细胞纯度，传代2次以后的细胞吸附于明胶海绵内，以TGF－β为主要刺激因子体外诱导1周，植入裸鼠皮下。在不同的时间取出组织块，甲苯胺蓝染色显示细胞外基质。结果发现，体外培养扩增的人间充质MSC表达CD166、CD29、CD44等表面抗原，不表达CD34、CD45、HLA－DR等抗原；MSC可以不经消化，直接在原培养瓶内冻存在－70℃低温冰箱，3个月后复苏的细胞生物学特性没有明显改变；体外诱导的细胞植入裸鼠皮下4周后即出现软骨细胞特有的结构。说明骨髓MSC具有独特的生物学特征，体外培养的MSC具有体内成软骨能力，应用MSC构建软骨组织具有一定的可行性。     

兔股骨近端骨性结构的解剖研究

目的研究兔股骨近端解剖结构及股骨头钻孔减压细胞注入的可行性。方法以20只新西兰兔为实验动物,对殴骨近端进行Micro—CT、大体测量,观察兔股骨近端骨性解剖特点。结果兔股骨近端转子窝较深,股骨颈最小直径〉4mm。结论以2mm克氏针及骨髓穿刺针可有效完成钻孔减压及细胞注入.