实时荧光定量RT-PCR法测定脑胶质瘤中MT1-MMP基因mRNA表达水平

目的探讨胶质瘤恶性程度和MT1-MMP基因mRNA表达水平的关系。方法采用实时荧光定量RT-PCR法检测34例脑胶质瘤和7例正常脑组织（取自癫痫病人手术切除脑组织）中MT1-MMP的mRNA表达水平。结果经实时荧光定量RT-PCR法检测，正常脑组织和低级别、高级别胶质瘤的△△Ct（循环阈值）值分别为（0．834±0、517）、（4．063±2．309）和（7.072±4．072）。正常脑组织与低级别、高级别胶质瘤之间，低级别、高级别胶质瘤之间MT1-MMP基因mRNA表达水平的差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论脑胶质瘤中存在MT1-MMP基因mRNA高水平的表达，随着肿瘤恶性级别的增加，MT1-MMP基因mRNA表达水平有增高趋势。     

血浆蛋白C（PC）对口服华法令患者凝血功能的影响

目的 探讨口服华法令抗凝患者血浆蛋白C(PC)含量的改变及对凝血功能的影响.方法 用STAcompact全自动血凝分析仪测定40例口服华法令抗凝的心脏瓣膜置换患者和40例正常对照者的血浆凝血酶原时间(PT)及国际标准化比率(INR),用酶联免疫吸附实验双抗体夹心法原理定量测定PC.结果 口服华法令抗凝患者血浆PT,INR,PC分别为25.7±5.1s,2.6±0.5,3.1±0.8μg/ml,与对照组比较,差异均有统计学显著性意义(P均<0.01).结论 口服华法令抗凝患者血浆PC含量降低,使华法令的抗凝效果出现一定程度的减弱.     

缺陷短波单胞菌致颅内感染1例

缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)原称微小假单胞菌,为革兰染色阴性的短小杆菌。国内外尚未见缺陷短波单胞菌致颅内感染的报道。近期,在1例脑膜瘤术后患者脑脊液中培养出缺陷短波单胞菌,现将其诊治情况报告如下。     

MMP-9及其抑制剂TIMP-1与多发性硬化活动相关性研究

目的探讨血清和脑脊液中基质金属蛋白酶（ MMP）-9及其抑制剂金属蛋白酶组织抑制剂（ TIMP）-1与多发性硬化发病及疾病活动的相关性。方法本实验共分四组：多发性硬化组、神经系统炎性疾病（OIND）组、神经系统非炎性疾病（NIND）组和健康人群组。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清MMP-9、血清和脑脊液中TIMP-1的表达水平;采用酶谱法检测脑脊液中MMP-9水平;以MRI检查为多发性硬化疾病活动性判断标准,分析比较多发性硬化活动组和非活动组MMP-9及TIMP-1水平。结果多发性硬化组血清MMP-9水平显著高于NIND组（ P＜0.05）和健康人群组（ P＜0.001）,血清TIMP-1水平显著低于OIND组（ P＜0.001）、NIND组（ P＜0.001）和健康人群组（ P＜0.001）;多发性硬化组脑脊液中MMP-9水平高于NIND组（ P＜0.05）,脑脊液中TIMP-1水平显著低于OIND组（ P＜0.05）;多发性硬化活动期患者血清MMP-9水平、MMP-9/TIMP-1比值分别显著高于非活动期（ P均＜0.05）,活动期血清TIMP-1水平与非活动期无统计学差异。结论检测血清和脑脊液中MMP-9及TIMP-1水平对多发性硬化疾病活动性的监测有一定参考价值。     

电泳技术的临床应用

电泳是一种带电分子在电场中向着电性相反的电极移动的现象。利用电泳现象进行物质分离的技术，称电泳技术。早在1809年俄国物理学家Rcoss就进行了世界上第一次电泳实验。1937年，Tisehus教授利用界面电泳将血清蛋白成功地分离成5种成分，开创了电泳技术的新纪元。20世纪60～70年代，当滤纸、聚丙烯酰胺凝胶等介质相继引入电泳以来，电泳技术得以迅速发展。各种电泳技术及仪器相继问世，先进的电泳技术和各种自动电泳分析系统使其应用十分广泛，[第一段]     

血清中胶质瘤疾病相关蛋白质的筛选

目的方法利用液体芯片一飞行质谱技术进行血清中胶质瘤疾病相关蛋白质的筛选。结果将78例胶质瘤患者和68例正常对照者血清样本各随机分为模型建立组和模型验证组；应用液体芯片．飞行质谱技术测定模型建立组样本，进行了差异蛋白的筛选和诊断模型的建立；然后用模型验证组样本进行了差异蛋白和模型的验证；并对其中的蛋白质进行鉴定。经模型建立组胶质瘤患者与正常对照者的血清蛋白质图谱比较，得到差异蛋白17个并建立了诊断模型，建模蛋白质为l460（m／z）、l612（m／z）、l776（m／z）、l862（m／z）、l941（m／z）、3952（m／z）、4052（m／z）。模型敏感性为85％，特异性为9r7．06％。其中差异蛋白质l460（m／z）、1612（m／z）、2551（m／z）为肿瘤高表达，差异蛋白l941（m／z）为肿瘤低表达，经鉴定蛋白质l941（m／z）为高分子量激肽原。结论利用液体芯片一飞行质谱技术进行血清中胶质瘤疾病相关蛋白质的研究，得到了差异蛋白和诊断模型，为临床胶质瘤的诊断提供了新的思路；差异蛋白质的鉴定结果可能为胶质瘤的治疗提供有价值的途径。     

磁分离酶联免疫法检测AFP

目的建立检测甲胎蛋白(AFP)的磁分离酶联免疫法(Magnetic affinity immunoassay,MAIA)。方法采用双抗体夹心法,用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)分别标记识别不同表位的两种抗AFP单克隆抗体(mAb)4A3和5H7,以偶联羊抗FITC mAb包被的免疫磁珠作为固相载体,单磷酸酚酞(phenolphthalein monophosphate,PMP)做显色底物,建立检测AFP的MAIA法。结果成功实现了用MAIA法对AFP的定量检测,其检测灵敏度0.2 IU/ml,线性范围0.2-510 IU/ml,批内CV5.5%-9.3%,批间CV1.6%-9.7%。添加回收率101.4%-104.9%,稀释回收率78.3%-123%。与雅培AxSYM及i2 000的检测结果对比,相关系数分别为0.984和0.985。结论MAIA法的性能优于现有的ELISA和RIA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的AFP测定试剂盒。     

胶质瘤中膜型基质金属蛋白酶1mRNA水平表达

目的 探讨胶质瘤恶性程度和膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)mRNA表达水平的关系,为胶质瘤的诊断、治疗及预后等提供参考.方法 分别采用实时荧光定量逆转录PCR法(RT-PCR)和半定量RT-PCR法检测34例胶质瘤和7例正常脑组织中MT1-MMPmRNA的表达水平.结果 实时荧光定量RT-PCR法检测正常脑组织和Ⅱ级(低级别)、Ⅲ级、Ⅳ级、高级别(Ⅲ、Ⅳ级)胶质瘤的△△Ct值分别为0.834±0.517,4.063±2.309,6.376±4.023,7.653±4.196和7.072±4.072.半定量RT-PCR法测定结果显示,正常脑组织和Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级、高级别胶质瘤的相对灰度值分别为0.799±0.156,1.142±0.158,1.538±0.482,1.652±0.376和1.600±0.421.正常脑组织和Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤之间,Ⅱ、Ⅳ级胶质瘤之间,正常脑组织和低、高级别胶质瘤之间,低、高级别胶质瘤之间MT1-MMP基因mRNA表达水平均有显著性差异.结论 胶质瘤中存在MT1-MMP基因mRNA高水平的表达,随着肿瘤恶性程度的增加,MT1-MMP基因mRNA的表达水平增高.     

潍坊地区女性HPV的感染情况及基因亚型分析

目的 研究潍坊市女性人群人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况、年龄特征及基因型分布,为HPV感染的防治提供理论依据.方法 采用核酸分子导流杂交分型技术对1 358例女性患者进行HPV分型检测,并对感染情况及基因亚型分布进行统计学分析.结果 (1)1 358例女性中HPV阳性424例,阳性率为31.22%,感染者中单一感染365例占86.08%,二重以上感染59例占13.92%.<30岁和大于或等于51岁女性是HPV感染高峰,与其他年龄段比较差异有统计学意义(P＜0.05).(2)424例阳性标本共检出HPV 519株,分为19个亚型.分离率高的前5个基因型是HPV16(16.28%)、HPV58(11.63%)、HPV6(10.08%)、HPV33(9.30%)、HPV52(8.53%).结论 HPV感染具有一定的地域性,开展HPV基因型的检测对宫颈疾病的防治具有重要意义.     

胶质瘤组织中蛋白质表达谱的研究及疾病相关蛋白质的筛选

目的利用双向凝胶电泳-MALDI-TOF质谱技术进行胶质瘤组织中蛋白质表达谱的研究,并进行胶质瘤组织中疾病相关蛋白质的筛选。方法分别提取6例胶质瘤患者脑组织、6例相对正常脑组织的总蛋白质,进行双向凝胶电泳、银染,两组凝胶图像差异分析,得到差异蛋白质。对目的差异蛋白质进行MALDI-TOF质谱分析。结果获得了分辨率较高的胶质瘤和相对正常脑组织双向凝胶电泳图谱,鉴定了29个差异蛋白质点中的18个蛋白质,得到15个阳性结果。在鉴定中得到阳性结果的差异蛋白质中,胶质瘤组织上调的蛋白质有:γ-肌动蛋白、三联基元蛋白5的环指蛋白、假想蛋白、RAS结合蛋白、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原、SMC1结构维持染色体1样1、ATP结合盒转运载体蛋白1和果糖二磷酸醛缩酶;下调的蛋白质有:β-球蛋白、脑肌酸激酶、类似S期激酶活化剂、CUG-BP和ETR-3样因子、类似磷酸二酯酶4D相互作用蛋白、CD2抗原和肌动蛋白结合蛋白。结论利用双向凝胶电泳-MALDI-TOF质谱技术进行胶质瘤组织中疾病相关蛋白质的研究得到差异蛋白质,其中上调蛋白质功能为细胞的骨架结构形成、细胞的侵袭性生长、肿瘤耐药性和促进细胞增殖等;下调蛋白质功能为免疫调节、细胞周期调节、抑制细胞迁移、在脑组织中参加细胞能量代谢和调节细胞特异性和发育等;还有一些未知功能蛋白质。所得结果为胶质瘤疾病蛋白质组学的进一步研究打下了一定的工作基础。