ICU患者血流感染耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌同源性分析

目的了解某院重症监护病房(ICU)血流感染患者分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)同源性。方法收集该院ICU2012年1—12月血流感染患者血液、下呼吸道和静脉导管尖端分离的CRAB,进行药物敏感试验,以及运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株同源性。结果 50株CRAB分离自患者血液26株、下呼吸道20株、静脉导管4株;对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦、头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、环丙沙星的耐药率均为100%。对分离自患者血液(26株)、呼吸道(6株)和静脉导管尖端(4株)的36株CRAB进行PFGE,结果表明主要为7个PFGE型(A~G),其中A克隆5株,B克隆2株,C克隆3株,D克隆4株,E克隆3株,F克隆8株,G克隆3株;其余8株菌为散发。该ICU分为Ⅰ、Ⅱ区,其中A、B、F克隆在两个病区间均存在。3例患者不同部位分离的CRAB为同一克隆,其中2例血液、下呼吸道、静脉导管尖端为同一克隆,另1例血液和下呼吸道为同一克隆。对其中6例患者下呼吸道分离的CRAB进行PFGE分型,3例同属D克隆。对12例血流感染患者静脉导管尖端进行培养,4例患者培养阳性,且为CRAB,分别与各自血液分离株为同一克隆。结论 ICU存在CRAB血流感染流行,患者间交叉传播是医院流行的主要方式。     

用实时荧光定量PCR选择急性呼吸窘迫综合征患者血清microRNA内参照基因

目的探讨用实时荧光定量PCR检测急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血清微小RNA(microRNA,miRNA)的表达并选择最优内参照基因。方法用实时荧光定量PCR检测40例ARDS患者及20例体检健康者血清中5个miRNA候选内参照基因miR-16-5p、miR-93-5p、miR-101-3p、miR-191-5p和U6,并用ge Norm法、Norm Finder法、bestkeeper法和相对△Ct法4种算法分析内参照基因稳定性,通过对4种算法稳定值进行排序并计算几何均数的方法分析综合稳定值。结果比较5个候选内参照基因在ARDS患者和体检健康者的表达水平,差异均无统计学意义(P均0.05)。4种算法综合分析显示,miR-16-5p以最小的稳定值1.32成为综合稳定性最高的内参照基因,其次是miR-101-3p、U6、miR-93-5p和miR-191-5p。结论实时荧光定量PCR法确定ARDS患者血清miRNA最优的内参照基因为miR-16-5p。     

胰岛素注射液的稳定性考察

本文利用离子交换高效液相色谱,对在室温和低温条件下放置不同时间的胰岛素样品进行含量及降解产物测定,结果表明,在室温条件下,中性胰岛素注射液稳定性较好,而酸性胰岛素注射液稳定性较差,这是由于胰岛素在酸性条件下不稳定,易降解生成脱酰胺胰岛素所致。     

肝素效价的血凝度计测定法

肝素具有抗凝血和调整血脂等生理作用,临床上广泛用于各种血栓栓塞性疾病的防治。目前各国药典均应用其抗凝血的药理作用对肝素进行效价测定,国内则多采用羊血浆移位均值法(USPXXI,1985,p 481)和兔血浆量反应平行线法(中国药典,1990,二部附录102页)。在使用过程中由于一些人为     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌感染危险因素的Meta分析

目的 对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）感染的危险因素进行系统评价。方法 检索PubMed、Embase、中国知网（CNKI）等数据库从建库至2021年12月发表的有关CRKP感染危险因素相关研究文献。采用Stata 15.1软件进行Meta分析。结果 共纳入27篇研究文献,Meta分析结果显示,在纳入的28项危险因素中与CRKP感染相关的危险因素有17项,分别是近期住院史、入住ICU、APACHE Ⅱ评分、高血压、动静脉导管、机械通气、尿导管、气管插管/切开、胃管、透析,及前期使用碳青霉烯类、头孢类、糖肽类、氨基糖苷类等抗菌药物。结论 近期住院史、入住ICU、APACHE Ⅱ评分、高血压、有创性操作和前期使用抗菌药物是导致CRKP感染的危险因素。     

脂多糖诱导气道上皮细胞过氧化物氧化还原酶1的表达

目的 探讨脂多糖(LPS)作用于气道上皮细胞后对过氧化物氧化还原酶1(prdx1)表达的影响.方法 培养正常人气道上皮细胞株BEAS-2B,以0、1、10 mg/L LPS作用于气道上皮细胞12h和24h后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测pMx1 mRNA表达;以0、0.1、0.5、1、5、10 mg/L LPS作用于气道上皮细胞12h后,用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测prdx1蛋白表达.结果 RT-PCR结果显示:LPS作用于细胞12h内,随着LPS作用剂量的增加,pMx1mRNA表达增高,10 mg/L LPS作用12hpMx1 mRNA表达较对照组显著增加(2.014±0.197比0.644±0.178,P＜0.05);但随着LPS作用时间的延长,24 h时prdx1mRNA表达有所回落.Western blotting结果显示,随着LPS作用剂量的增加,prdx1蛋白表达逐渐增高,5mg/L LPS作用12h时prdx1蛋白显著高于对照组(1.069±0.175比0.328±0.010,P＜0.05),10 mg/L LPS作用12h时维持在高水平(0.984±0.220).结论 10 mg/L的LPS作用于BEAS-2B细胞12h后可诱导prdx1的基因和蛋白表达增加.     

人Ⅱ型肺泡上皮细胞的分离培养及表型维持研究

目的 建立人Ⅱ型肺泡上皮细胞(ATⅡ)分离、纯化、原代培养及鉴定的方法,探索体外培养的表型维持情况.方法 取手术切除的边缘肺组织,用胰酶、弹性蛋白酶联合法消化分离人ATⅡ细胞粗悬液,经过滤、差速贴壁、密度梯度分离、磁珠分选纯化.用肺表面活性蛋白C前体(pro-SP-C)免疫荧光、溶酶体绿色荧光染料(GreendND-26)荧光探针染色以及透射电镜鉴定人ATⅡ细胞;用pro-SP-C免疫荧光法和GreenDND-26荧光探针染色法评估细胞纯度;锥虫蓝染色法评估细胞活性;并运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测体外培养过程中肺表面活性蛋白(SP-A、SP-B、SP-C、SP-D)的表达情况.结果 人ATⅡ细胞产量为(5～10)×105/g;锥虫蓝染色细胞活性为(93±2)％;pro-SP-C免疫荧光、GreendND-26荧光探针鉴定、评估细胞纯度一致,为98％左右,透射电镜下观察ATⅡ细胞特有的板层小体结构清晰可见.SP-A、SP-C表达持续时间在24d左右(SP-A 16d:0.52±0.03,20d:0.35±0.02,24d:0.26±0.01,28d:0.10±0.08;SP-C 16d:0.68±0.16,20d:0.31±0.04,24d:0.18±0.06,28d:0.14±0.09),SP-B、SP-D表达持续时间可在28d左右(SP-B 16d:1.05±0.17,20d:0.76±0.35,24d:0.55±0.15,28d:0.36±0.19;SP-D 16d:0.52±0.19,20d:0.33±0.12,24d:0.31±0.04,28d:0.23±0.02).结论 成功建立了一种分离、纯化及鉴定人ATⅡ细胞的方法,此方法能较持久维持ATⅡ细胞表型.     

荧光定量PCR法检测烟曲霉DNA

目的 建立检测烟曲霉DNA的荧光定量PCR方法,评价其在小鼠侵袭性烟曲霉肺部感染诊断中的意义.方法 根据烟曲霉ITSI区域基因组序列,设计合成引物和荧光标记探针,优化荧光定量PCR条件,从特异性、扩增效率、灵敏度及重复性方面进行评价.建立小鼠烟曲霉肺部感染模型,用荧光定量PCR对36只实验小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(...     

ICU多药耐药鲍氏不动杆菌连续流行的同源性分析

目的对某医院中心重症监护病房(ICU)2007年1月-2009年7月3次疑似多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRAB)医院流行时间段内的MDRAB进行同源性分析。方法收集ICU住院患者标本中分离的28株MDRAB,以及从该病房环境中分离的7株ABA;运用脉冲场凝胶电泳分析菌株的同源性。结果脉冲场凝胶电泳结果表明,36株菌有4个克隆,其中克隆A包括临床分离株648,3个环境分离株B8、J4、C9;B型、C型全为临床分离株,分别包括1196、1201、1103、1205、1150和3325、3693、3334、3893、4006、4128、4358、3605;D型包括3次临床分离株433、438、458及一个环境分离株(B15)。结论 3次医院流行分别由克隆D、B、C引起,患者间MDRAB的交叉传播是医院流行的主要传播方式,环境样品分离鉴定及同源性分析结果提示,ICU的通风系统是MDRAB流行的源头;严格的消毒、隔离措施,强调手卫生,能有效控制MDRAB的医院流行。     

多重荧光定量PCR对三种主要致病性曲霉菌的检测研究

目的 建立一种能同时鉴定烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉菌的多重荧光定量PCR诊断方法,并将之应用于侵袭性曲霉菌病的诊断研究.方法 构建多重荧光定量PCR方法,对该方法进行实验评价,并将之应用于侵袭性曲霉菌病患者的痰标本检测,初步评价该方法的临床诊断效能.结果 建立的多重荧光定量PCR方法,制定标准曲线,R2在0.989～0.999之间,斜率分别为-3.117、-3.583、-3.674；只与烟曲、黄曲、黑曲的DNA发生特异性反应,无非特异性扩增；最低检测浓度为1×102孢子/ml;重复性检测试验,获得Ct值标准差为0.12～0.20,变异系数为0.37％～0.80％；对分离自26例侵袭性曲霉菌病患者的56份深部痰标本进行检测,敏感率为85.7％(48/56),特异性为92.0％(46/50),阳性预测值为92.3％(48/52),阴性预测值为85.2％(46/54).结论 研究建立的多重荧光定量PCR方法检测侵袭性曲霉菌病患者的深部痰标本有较高的敏感性、特异性和阴、阳性预测值,且快速、简便,将有助于侵袭性曲霉菌病的早期准确诊断.