新生儿缺氧缺血性脑病神经干细胞的研究进展

随着干细胞基础与临床研究的进展,干细胞具有的自我更新和多向分化潜能为新生儿缺氧缺血性脑病的治疗提供了一种新的方法.缺氧缺血性脑损伤后可以激活内源性神经干细胞,诱导其增殖、迁移、分化和凋亡,参与损伤后结构修复和功能重建.联合外源性的因素如干细胞移植术和神经营养因子等,将对干细胞应用于临床,治疗新生儿缺氧缺血性脑病具有重要意义.     

不同细胞浓度及细胞因子对骨髓基质成纤维细胞集落形成的影响

目的：研究植入不同细胞浓度与不同细胞因子对小鼠骨髓基质成纤维细胞集落生成单位(CFU-F)形成的影响。方法：采用体外骨髓基质细胞贴壁培养的方法，分别植入不同的细胞浓度及加入不同的细胞因子后，培养2周时计数CFU-F的数量，培养3～4周时观察贴壁细胞的形态。结果：在一定的范围内，随接种骨髓有核细胞数量的增加，CFU-F的数量略有增加，但增加数量有限，各组间差异不显著。干细胞因子(SCF)和白细胞介素-3(IL-3)对骨髓基质细胞的增殖有促进作用，其中SCF和SCF、IL-3联用能明显增加CFU-F的数量，而对贴壁细胞的形态无明显影响。结论：在一定的条件下，骨髓基质细胞可以扩增，提示细胞因子作用下的基质细胞扩增有可能用于造血损伤修复。     

转化生长因子—β与缺氧缺血性脑损伤

分子生物学的研究表明 ,脑损伤的发生与生物多肽、细胞因子、NO、氧自由基和细胞凋亡等多种因素有关 ,众多资料证明 ,上述因素参与了脑损害的发生和发展过程。近年来研究发现 ,转化生长因子 -β(TransformingGrowth Factor- β,TGF- β)在脑损伤中起着重要的作用 ,并引起了人们的关注。早在1 983年 ,Sporn从牛唾液腺、肾脏和皮肤中分离出 TGF- β1。同年 ,Berry(1 )在人 CNS中发现了 TGF- β。 1 994年 ,在马里兰州国立卫生研究机构召开了首次 TGF- β学术讨论会。目前 ,对 TGF-β在神经系统中的研究主要集中于动物实验 ,在人体中…     

先天性心脏病患儿个性及行为调查

目的 探讨先天性心脏病(CHD)患儿的心理卫生状况.方法 采用艾森克个性问卷(儿童)手册(EPQ)、Achenbach儿童行为评定量表(CBCL)、联合型瑞文测验(CRT)、适应能力商数(SAB)量表对191例CHD(紫绀组78例,无紫绀组113例)患儿进行个性、行为、智力及适应能力的心理测试.同时选取100名健康儿童做对照.结果 CHD儿童神经质个性显著高于对照组(P<0.001),紫绀组高于无紫绀组(P<0.05).CHD患儿心理行为总粗分和粗分均值高于对照组(P<0.01或P<0.05),紫绀组高于无紫绀组(P<0.05).男、女童均表现有抑郁、体诉、社会退缩、违纪行为.紫绀组男童在攻击方面,女童在抑郁、社会退缩方面分别高于无紫绀组(P<0.05).无紫绀组CHD患儿平均智商与对照组比较差异无统计学意义,紫绀组患儿平均智商低于对照组(P<0.05).CHD患儿适应能力商数低于对照组、紫绀组低于无紫绀组(P<0.01或P<0.05).结论 CHD患儿表现出情绪不稳的个性特点,存在着明显的行为问题;与健康儿童相比,CHD患儿社会适应能力、紫绀型CHD患儿智商水平显著降低.     

癫痫病儿血清神经元特异性烯醇化酶水平的检测

①目的　探讨癫痫病儿发作后不同时间血清神经元特异性烯醇化酶 (NSE)的动态变化。②方法采用放射免疫分析法测定 11例癫痫病儿发作后 4 8h内、2～ 4d、5～ 7d血清中NSE水平 ,并与 2 2例正常儿童进行对照。③结果　癫痫病儿发作 4 8h内及 2～ 4d血清NSE水平与对照组比较 ,差异有显著性 (t =4 .32、2 .5 8,P<0 .0 1、0 .0 5 )。④结论　癫痫发作后血清NSE水平升高可能与脑神经元损害有关。     

胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞的诱导条件

目的：探索胚胎干细胞ES—D3分化为胰岛素分泌细胞的诱导条件。方法：ES—D3细胞培养于鼠胚成纤维细胞滋养层上，对数生长期时转入无血清含bFGF的DMEM液中，隔天换液，2周后，用DTZ染色、ELISA、免疫细胞化学染色等方法鉴定诱导生成的胰岛素分泌细胞及其所分泌的胰岛素。结果：ES—D3细胞在不含白血病抑制因子和滋养细胞的无血清培养体系中呈悬浮生长，并于第4天形成拟胚体，加入促分化因子bFGF可使胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化，诱导生成的胰岛素分泌细胞在培养基中自我组装形成三维立体细胞簇。诱导第17天，DTZ染色发现大量被染成暗红色的胰岛素分泌细胞，免疫细胞化学染色亦证实了胰岛素分泌细胞的存在；同时，用ELISA法检测到胰岛素分泌。随着诱导天数增加，DTZ染色阳性细胞数及胰岛素含量均增加?结论：胚胎干细胞ES—D3在无血清含bFGF培养基中能被诱导分化为胰岛素分泌细胞，且该细胞能够分泌胰岛素。     

血管内皮生长因子促进小鼠胚胎干细胞的造血分化

目的：研究血管内皮生长因子(VEGF)体外促进小鼠胚胎干细胞系ES-D3向造血分化的能力。方法：先将ES-D3形成拟胚体，将拟胚体细胞转入含不同浓度的VEGF和VEGF+SCF的培养基中。实验分6组，分别为VEGF 5 μg/L组、VEGF 10 μg/L组、VEGF 20 μg/L组、VEGF 5 μg/L＋SCF组、VEGF 10 μg/L＋SCF组、VEGF 20 μg/L＋SCF组，同时设不加因子的自发分化对照组。RT-PCR检测造血转录基因GATA-2和早期造血细胞基因c-kit和β-H1的表达，流式细胞仪检测CD34+细胞，甲基纤维素半固体培养法检测生成造血集落的能力。结果：经过1周的诱导培养，实验组生成的细胞可以表达GATA-2、c-kit和β-H1，CD34＋细胞的比例也升高，并可形成造血祖细胞的集落。从诱导生成CD34＋细胞的比例和生成的集落数量看，VEGF联合SCF组的诱导效率要高于VEGF单用组和对照组，其中以VEGF 20 μg/L＋SCF组和VEGF 10 μg/L＋SCF组的诱导效率最高。结论：VEGF能够促进ESC的早期造血分化，尤以与SCF合用时，其诱导效率更高。     

血管内皮生长因子促进小鼠胚胎干细胞生成CD34+细胞的研究

目的：研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)体外促进小鼠胚胎干细胞系ESD3生成CD34+细胞的能力。方法将ESD3形成拟胚体，将拟胚体细胞转入含不同浓度的VEGF和VEGF+干细胞因子（stem cell factor, SCF)的培养基中。实验分6组，分别为VEGF 5 μg/L组、VEGF 10 μg/L 组、VEGF 20 μg/L组、VEGF 5 μg/L＋SCF组、VEGF 10 μg/L＋SCF组、VEGF 20 μg/L＋SCF组，同时设不加因子的自发分化对照组。RTPCR检测CD34 mRNA的表达，流式细胞仪检测CD34+细胞的比例，甲基纤维素半固体培养法检测生成造血集落的能力。结果：经过1周的诱导培养，实验组生成的细胞可以表达CD34 mRNA，CD34＋细胞的比例也升高，并可形成造血祖细胞的集落。从CD34 mRNA的表达水平、诱导生成CD34＋细胞的比例和生成的集落数量看，VEGF 20 μg/L＋SCF组和VEGF 10 μg/L＋SCF组的诱导效率最高。结论：VEGF能够促进ESC生成CD34＋细胞，尤以与SCF合用时，其诱导效率更高。     

人脐血和胎盘中肝细胞生长因子和纤维连接蛋白的测定

目的:检测人脐血、胎盘组织和胎盘基质细胞培养上清液中肝细胞生长因子(HGF)和纤维连接蛋白(Fn)的含量。方法:选择健康足月新生儿,分娩时留取脐血和胎盘组织,用ELISA法检测其中Fn和HGF的浓度,并比较分析。结果:HGF含量在脐血、胎盘组织提取液和胎盘基质细胞培养上清液中分别为1.23±0.24ng/ml、113.73±11.99ng/ml、2.23±0.31ng/ml。Fn含量分别为1105±44ng/ml、1537±319ng/ml、1027±171ng/ml。结论:与脐血相比,胎盘是提取HGF和Fn的优质材料,将其浓缩或纯化后具有很大的科研和应用价值。