脐血混合培养对粒-巨噬细胞系祖细胞产率的影响

利用粒-巨噬细胞系祖细胞(CFU-GM)体外培养技术,观察了2份脐血混合后CFU-GM集落和集簇的产率。结果表明:混合培养组造血祖细胞的集落和集簇的产率不低于单一培养组。该研究为混合脐血造血细胞移植提供了一定的理论依据。     

单细胞PCR用于HLA配型的研究

目的研究用筑巢式多重PCR技术对单细胞进行HLA配型，分析影响单细胞PCR扩增的因素。方法首先分别采用不同的细胞裂解方法制备单细胞DNA模板，然后采用多重PCR分别扩增HLA—A，B基因的第2、3外显子和第2内含子区域，HLA—DRB1基因的第2外显子区域，最后根据大量DNA的常规HLA分型结果对单细胞第1轮扩增产物进行第2轮筑巢式序列特异性引物PCR（PCR-SSP）分型。结果酶解法制备单细胞DNA模板效率最高，第1轮扩增成功率为93．3％，而碱裂法和冻融法分别为83．3％和73．3％；采用酶解法制备单细胞DNA模板进行第2轮PCR—SSP分型验证，20份标本扩增成功率为95％，有3份标本只扩增出一条染色体，等位基因脱扣发生率为15％，全部操作可在6h内完成。结论筑巢式多重PCR技术对单细胞HLA分型具有较高的扩增效率，操作时间短，可望应用于妊娠前诊断。     

骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化的动态观察

目的:探讨体外诱导骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的可能性,并观察其动态变化。方法:实验于2005-09/2007-03在山东大学齐鲁医院完成。①标本来源:骨髓标本15例来自山东大学齐鲁医院成人骨髓检查结果正常者,均签署捐献同意书。②实验方法:无菌条件下取骨髓2.0～5.0mL,采用percoll分离液和贴壁法获得纯化的成人骨髓间充质干细胞。③实验评估:流式细胞仪行细胞表面抗原检测,在适当的条件下诱导其分化为成骨细胞和脂肪细胞。采用两步法向胰岛素分泌细胞诱导,观察其在碱性成纤维细胞生长因子、活化素A、胰岛素样生长因子、尼克酰胺等因子刺激下向胰岛素分泌细胞分化的动态变化。双硫踪染色鉴定胰岛样细胞团,酶联免疫吸附试验检测细胞分泌胰岛素的情况,RT-PCR检测胰岛细胞特异基因的表达。结果:①骨髓间充质干细胞的生长特性及免疫表型:分离培养获得的贴壁细胞,呈形态均一的梭形,流式细胞仪检测CD34、CD45表达阴性,CD29、CD44表达阳性。②向成骨细胞和脂肪细胞的诱导分化:此类细胞经茜素红染色、油红O染色均呈阳性,可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞。③向胰岛素分泌细胞的诱导分化:第1步诱导后出现细胞簇,双硫腙染色不着色,胰岛素分泌量少,仅检测到PDX-1基因的表达,证实其为胰岛前体细胞。第2步诱导后细胞簇数目逐渐上升,至诱导14d大部分细胞簇经双硫腙染色都呈红色。④诱导后培养上清中胰岛素含量:诱导第3,7,14,21天的胰岛素分泌量分别为(15.3±4.9),(34.1±5.6),(40.4±5.3),(39.8±5.1)mU/L。⑤胰岛细胞特异基因的表达:诱导7d仅检测到PDX-1基因的表达,insulin1、insulin2和Glut2基因均不表达。诱导14,21d检测到insulin2、PDX-1基因表达,insulin1基因弱表达,Glut2基因不表达。结论:体外分离、纯化得到的骨髓间充质干细胞诱导7d可分化出胰岛前体细胞,不具功能性;诱导14d后可成功地分化出成熟的具有功能性的胰岛素分泌细胞。     

山东脐血库保存4000人份脐血资料的统计分析

对山东脐血库保存的 4 0 0 0人份脐血的部分结果进行了统计分析 ,每份脐血的平均有核细胞数超过 1.2× 10 9,每份脐血CD34+ 细胞总量平均为 3.9× 10 6,有 76 8人份脐血有核细胞数超过 1.5× 10 9,一般可满足体重 4 0kg以上的患者使用。对基因频率的分析表明 ,常见基因与中国其他地区的统计结果相近 ,有 4 0 %的患者可以在山东脐血库找到 1个位点不合的脐血     

混合脐血移植重建小鼠免疫造血功能的研究

目的:探索多份脐血混合移植重建免疫造血系统的可能性,扩大脐血移植的应用范围。方法:将1×10~6个C57BL/6和1×10~6个615小鼠脐血单个核细胞(MNC)同时输注给经致死量照射的BALB/c小鼠,10～15天后检查受鼠的脾结节(CFU-S),作受鼠的骨髓粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)培养,以检测造血重建;1个月后用流式细胞仪(FCM)检测受鼠体内供者细胞的嵌合状态;用单向混合淋巴细胞反应(MLR)检测免疫重建和免疫耐受;用受鼠小肠和皮肤病理切片检测移植物抗宿主病(GVHD)。结果:混合脐血移植小鼠的生存率为65％,未移植小鼠全部死亡;移植后10～15天在小鼠的脾脏可以检测到CFU-S,小鼠骨髓培养有CFU-GM生长;移植后30天发现在同一个小鼠的体内有2个供者的不全嵌合体同时存在;受鼠对两个供鼠的淋巴细胞均产生了免疫耐受;受鼠小肠和皮肤病理切片检查表明有轻-中度GVHD。结论:混合脐血移植可以重建同种异基因小鼠的免疫和造血功能而不引起重度GVHD。本研究为扩大脐血移植的应用范围打下了一定的理论和实践基础。     

肿瘤浸润淋巴细胞及其临床应用

恶性肿瘤的生物治疗是近几年肿瘤免疫学的研究热点之一,其中抗癌免疫效应细胞的研究尤其引人注目。1982年;美国的Rosenbery首先提出淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)的概念,时隔3年,作者又证实了恶性肿瘤组织中浸润淋巴细胞的存在。肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)作为一种新型、高效的肿瘤杀伤细胞,在恶性肿瘤免疫过继性治疗中的潜力愈来愈受到重视。 一、TIL的生物学特征 TIL不同于其他肿瘤细胞杀伤细胞的特征主要     

体外扩增脐血巨核细胞生物学特性的研究

目的:研究脐血巨核细胞的体外扩增及扩增后脐血巨核细胞的生物学特性和功能,为脐血巨核细胞的扩增和临床应用提供依据。方法:收集16份足月妊娠健康新生儿的脐带血,免疫磁珠法分离出其中的CD34 细胞。采用细胞因子组合(1)(TPO加SCF加IL-3加IL-6)、细胞因子组合(2)(TPO加SCF)2种细胞因子组合．将富集的脐血CD34 接种于无血清无基质细胞的悬浮培养体系中,分别在3、7、10、14 d收集扩增产物。运用流式细胞术检测巨核细胞的表型和黏附分子的表达;血浆块法检测巨核细胞集落(CFU-MK)的形成;对巨核细胞进行DNA含量检测以评价巨核细胞的成熟程度。结果:不同细胞因子组合和培养时间扩增后,巨核细胞的数量和生物学特性不同。随着培养时间的延长,巨核细胞(CD41 )的数量逐渐增加,但培养至14 d时增势减缓。因子组合(1)各时间段的扩增能力(分别扩增5．2、40．7、121．2、149．7倍)均比因子组合(2)(分别扩增3．8、27．4、85．9、106．5倍)强(P<0．05),但因子组合(2)的扩增能力仍能满足临床的需要。巨核祖细胞(CD34 ／CD41 )的数量在7 d时最多,这也被CFU-MK所证实。DNA含量检测发现．随着培养天数的增加,多倍体细胞所占的百分比增加。扩增后巨核细胞黏附分子CD49d和CD11a的表达维持在高水平,而CD54降低(P<0．05)。结论:通过对扩增后巨核细胞的生物学特性研究,有助于寻找有效、简便、易于植入受者体内的扩增方法。     

山东地区新生儿脐血HLA-A、HLA-B等位基因多态性研究

目的研究山东地区新生儿脐血人类白细胞抗原（HLA—A、HLA—B）等位基因的分布特征．探讨国人用山东脐血供者进行造血干细胞移植的可能性。方法应用PCR—SS0方法对山东地区5844例无血缘关系的汉族健康新生儿脐血进行HLA—A、HLA—B等位基因分布调查。结果检出20种HLA—A等位基因，频率较高的为A＊02（0．3041）、A＊11（0．1443）、A＊24（0．1434）、A＊30（0．0975）和A＊33（0．0859），较低的为A＊34（0．0006）、A＊25（0．0005）、A＊66（0．0005）、A＊74（0．0004）和A＊36（0．0001）。检出46种HLA—B等位基因．频率较高的为B＊13（0．1348）、B＊51（0．0713）、B＊62（0．0712）、B＊61（0．0676）和B＊60（0．0642），较低的为B＊77（0．0001）．B＊76（0．0002）．B＊47（0．0003），B＊42（0．0003）和B＊72（0．0004）。结论山东新生儿脐血HLAI类基因具有多态性，能代表山东汉族人群HLA的分布特征，反映北方汉族HLA的分布规律；国人（尤其是北方汉族人）在山东脐血库中最容易找到HLAI类等位基因相合的异基因脐血供者。     

麻疹合并綠脓杆菌肺炎和脓胸一例报告

患者朱××,男,18个月,住院号37628。7天前开始发烧,眼紅、流泪、怕光,咳嗽。次日,发际与面部出現紅色皮疹,并迅速扩及全身。第三日,皮疹突然隐退,但咳、喘、烧加重,嗜睡,腹泻日3—4坎,黄色稀便,无脓血。在外曾用青霉素与鏈霉素治疗无效,故于1963年6月15日轉来我院。检查:体溫37.8℃,脉搏128次/分,呼吸30次/分,血压90/60。