糖尿病的基因治疗技术:大鼠胰岛素原基因真核细胞表达质粒构建与鉴定

目的:构建大鼠胰岛素原基因的真核细胞表达质粒pCMV/proinsulin并进行序列测定。方法:实验选用雄性SD大鼠1只,从大鼠胰腺组织中提取总RNA,通过RT-PCR法获得胰岛素原基因cDNA全长序列,并采用现代分子生物学技术,借助真核细胞表达质粒pCMV-Scriptvector具有多克隆酶切位点的特点,选择适当的限制性酶切位点(EcoRⅠ和HindⅢ),并使大鼠胰岛素原基因cDNA两端带有相同的酶切位点,利用其黏性末端进行定向克隆,从而将大鼠胰岛素原基因准确地插入到表达质粒pCMV上。结果:经RT-PCR法扩增并通过DNA核酸序列测定获得大鼠胰岛素原基因。经PCR法及酶切法初步筛选阳性克隆重组子,并进一步进行DNA核酸序列测定(双脱氧末端终止法),确定其序列与目的基因序列完全一致。结论:成功构建重组质粒pCMV/proinsulin,为进一步进行胰岛素原基因转染糖尿病大鼠和非胰岛β细胞,使之产生胰岛素、建立类胰岛β细胞系的研究奠定了扎实的基础。     

针刺预处理诱导全脑缺血大鼠海马CA1区即刻早期基因c-fos mRNA及其蛋白的表达

目的：观察针刺预处理对全脑缺血大鼠海马CA1区c-fos mRNA及其蛋白表达的影响，并与缺血预处理的效果进行比较。 方法：实验于2005—02／09在黑龙江中医药大学神经电生理实验室完成。①选用健康Wistar大鼠120只．雄性，体质量（250&;#177;20）g。采用随机数字表法将120只Wistar大鼠随机分为5组．每组24只：正常对照组：正常饲养，不干预。假手术组：暴露4条血管，不造模；脑缺血组：四动脉阻断法全脑缺血10min制作大鼠全脑缺血模型；脑缺血预处理组：预全脑缺血3min，再灌注24h后再次全脑缺血10min；针刺预处理组：术前7d给予针刺，双侧足三里、曲池穴，双侧连接全能脉冲电疗仪．频率为1Hz，电压为2V，30min/次．针刺百会30min／次．1次／d，7d后全脑缺血10min。②每组分别于术后12,24，48和72h麻醉状态下取材，每个时间点6只大鼠。免疫组织化学法检测海马CA1区c-Fos蛋白阳性细胞数，原位分子杂交技术检测大鼠海马CA1区c-fos mRNA表达。③计量资料差异比较采用单因素方差分析．两组间比较采用Newman-Keuls q检验。 结果：120只大鼠均进入结果分析。①脑海马CA1区c-Fos阳性细胞数：正常对照组和假手术组无；脑缺血组少量表达，术后48h为高峰[（23．35&;#177;7．68）个／mm^2]，而脑缺血预处理组和针刺预处理组术后24，48，72h比较，差异不明显，但均明显高于脑缺血组（P〈0．05）。②脑海马CA1区c-fos mRNA阳性细胞数：正常对照组和假手术组无；脑缺血组少量表达，术后72h为高峰[（20．87&;#177;6．67）个／mm^2，而脑缺血预处理组和针刺预处理组术后24，48，72h比较，差异不明显，但均明显高于脑缺血组（P〈0．05）。 结论：针刺预处理和脑缺血预处理均可能通过上调c-fos mRNA表达而减轻严重缺血后细胞凋亡，促成脑缺血耐受的产生。     

脊柱结核再手术的疗效分析

脊柱结核是发病率最高的肺外结核,约占总结核病的1%~3%。具有难治性和易复发性,疗程长达1.5～2年,且手术治疗后仍有1.28％～25％的复发率。脊柱结核术后再手术的患者与初次手术治疗的患者有许多差异。我院5年内收治62例脊柱结核再手术的患者,总结报告如下。     

脑微出血神经影像学诊断及评估标准的研究进展

为了明确脑微出血的神经影像学表现对临床诊治的帮助,本文通过对脑微出血病变的神经影像学的研究进展进行综述,提出临床影像学对脑微出血的诊断要点,及其对脑微出血诊断和治疗的帮助,继而总结不同表现所提出的治疗策略,为临床对此种症状不典型的疾病做出正确的决策提供依据。     

全反式维甲酸对各种人甲状腺肿瘤细胞株增殖、摄碘及甲状腺特异基因表达的影响

对4种甲状腺癌细胞株予全反式维甲酸处理,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖,同位素法测定摄碘功能,半定量RT-PCR检测甲状腺特异基因及维甲酸受体表达.结果 显示全反式维甲酸可抑制FTC-133细胞增殖,促进其摄碘及甲状腺特异基因的表达,但对C643、HTH74及XTC.UC1细胞无影响,提示不同甲状腺肿瘤细胞对全反式维甲酸的反应性不相同.     

胆囊息肉样病变手术指征的探讨（附96例报告）

随着B超、CT等影象学检查的普遍使用，临床发现的胆囊息肉样病变（PLG）比以前增多。本文报道我院最近5年经手术、病理证实的96例胆囊息肉样病变，并对其手术指征进行讨论。1资料和方法1．1一般资料：我院近五年来经B超诊断胆囊息肉样病变1362例次（男837、女525例次），同期经手术切除、病理证实的96例（男50例、女46例）。年龄为26～86岁。72例良性病变中，26～50岁54例，51～60岁18例。24例恶性病变中，30～50岁3例，51～86岁21例。1．2临床表现：本组病人中27例是体检时B超发现，26例有反复发作的右上腹胀痛或绞痛、发热、恶心呕吐…     

MRI及临床急性生理和慢性健康评估Ⅲ评分系统评价急性胰腺炎严重程度的研究

目的 应用MRI及临床急性生理和慢性健康评估Ⅲ(APACHEⅢ)评分系统评价急性胰腺炎(AP)的严重程度,并探讨两者的相关性.方法 回顾性分析100例AP患者的临床资料及MRI表现,采用MR严重程度指数(MRSI)进行评分,分为轻度(0～3分)、中度(4～6分)、重度(7～10分)AP.并按照临床APACHEⅢ评分,分为轻型(＜35分)和重型(≥35分)AP,记录100例AP患者并发症发生率、入住重症监护病房(ICU)及住院天数等情况,采用Spearman等级相关分析法分析MRSI、APACHEⅢ评分及住院时间的关系,MRSI、APACHEⅢ评分与各项临床结果的比较采用x2检验.结果 100例AP,在MRI上80例表现为水肿型,20例表现为坏死型.MRSI评分显示轻度34例,中度59例,重度7例.APACHEⅢ评分为(24.9±12.2)分,APACHEⅢ＜35分者77例,APACHEⅢ≥35分者23例.MRSI评分轻、中、重组之间的局部并发症发生率、系统并发症发生率及ICU入住率的差异均有统计学意义(x2值分别为9.161、19.118和54.767,P值均＜0.01);APACHEⅢ评分轻、重型之间系统并发症发生率差异有统计学意义(x2=13.120,P=0.000),而与局部并发症发生率、ICU入住率差异无统计学意义(x2值分别为0.245和2.568,P值均＞0.05).MRSI评分同住院时间呈低度相关(r =0.235,P=0.019);APACHEⅢ评分与MRSI评分及与住院时间之间无相关性(r值分别为0.168和0.105,P值均＞0.05).结论 MRSI评分和APACHEⅢ评分在评估系统并发症方面有预测作用.MRSI评分在预测局部并发症、是否需要ICU治疗以及患者住院时间长短上优于APACHEⅢ评分.     

护理干预对妊娠糖尿病患者血糖水平的影响

妊娠期间发现或发生糖耐量异常而引起不同程度的高血糖,当血糖异常达到诊断标准时,称为妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)[1].