不同年龄大鼠坐骨神经损伤后脊髓中神经生长导向因子Slit-1及Robo-2受体的表达变化

目的观察不同年龄大鼠坐骨神经损伤后,轴突导向因子Slit-1及其Robo-2受体在脊髓中的表达,以探讨不同年龄大鼠外周神经损伤后再生神经具有靶向性差异的可能机制。方法老年、成年和幼年大鼠各20只,建立左侧坐骨神经横断、硅胶管桥接模型。通过免疫荧光染色观察Slit-1蛋白和Robo-2受体在腰段脊髓中表达的变化,计算其荧光强度值,并进行统计学分析。结果伤后2周和4周,3组大鼠脊髓前角Slit蛋白均有较高表达,但各组间无显著差异。伤后2周和4周各组Robo-2受体表达均升高,其中老年鼠脊髓前角Robo-2受体表达明显高于成年和幼年组,差异有统计学意义(P0.05)。结论大鼠坐骨神经损伤后能刺激脊髓前角Slit-1高表达,不同年龄大鼠脊髓组织中Robo-2受体表达的差异可能决定了Slit-1在再生神经中的靶向性调节作用。     

微管蛋白、水通道蛋白4和K~+通道蛋白4.1在大鼠脊髓损伤后不同时间的表达变化

目的探究微管骨架、水通道蛋白4(AQP4)和K+通道4.1(Kir4.1)在大鼠急性脊髓损伤后的时间变化规律。方法 90只成年雌性Sprague-Dawley大鼠,随机分组为假手术组(n=30)和损伤组(n=60),损伤组设6 h、1 d、3d、5 d、7 d,每个亚组12只大鼠。用Allen打击法制备T10打击损伤模型。损伤后各时间点各组行脊髓含水量检测、脊髓HE染色,观察急性脊髓损伤后的病理变化;行微管蛋白、AQP4和Kir4.1免疫组织化学染色和Western blotting检测,观察急性损伤后三组蛋白的表达变化及相对灰度值分析。结果损伤组各时间点脊髓含水量均高于假手术组(P0.05),且5 d时最高。HE染色显示,损伤后6 h,灰质主要以出血为主;损伤后1 d,灰质出血严重,神经元肿胀加重;损伤后3 d,灰质坏死面积加大,水肿现象明显;损伤后5 d、7 d,灰质坏死更加明显,水肿现象更加严重。Western blotting和免疫组织化学染色结果显示,损伤后AQP4在灰质表达逐渐增高,且5 d表达为高峰,微管蛋白和Kir4.1表达趋势基本相同,为损伤后表达逐渐下降,5 d表达最低。结论脊髓损伤后微管蛋白表达与Kir4.1表达趋势相似,与AQP4表达趋势相反,可能共同参与水肿形成。     

不同方法所制备黄芪多糖含药血清对神经干细胞增殖分化的影响

【目的】观察不同给药方法制取的APS含药血清对神经干细胞增殖分化的影响。【方法】用连续注射法、一次性大剂量注射法和灌胃法制取APS含药血清,采用间接免疫荧光法检测Nestin,β-tubulinⅢ和GFAP,通过CCK-8 Brdu检测细胞增殖,Elisa检测VEGF、NGF含量,Western Blot法检测PI3K、P-Akt、Casepase-9蛋白表达。【结果】APS含药血清组与对照组在增殖分化中有明显差异(P<0.05),可提高VEGF、NGF含量,提高PI3K、P-Akt蛋白表达,降低Casepase-9蛋白表达。其中APS腹腔注射含药血清组优于APS灌胃含药血清组,而连续注射法与一次性大剂量注射法含药血清组无明显差异(P>0.05)。【结论】APS含药血清组可能通过调节VEGF、NGF含量,活化PI3K/Akt信号通路,促进神经干细胞增殖分化,Akt磷酸化后,调节Casepase-9,延缓细胞凋亡。效果与其给药方式有关,腹腔注射法优于灌胃法,但与腹腔注射给药时间无关。     

神经干细胞假体移植促进脊髓损伤后功能恢复的实验研究

目的探讨神经干细胞假体移植治疗脊髓损伤的疗效。方法建立大鼠脊髓损伤模型,在此基础上进行神经干细胞假体移植治疗,并同时设立手术、神经干细胞及材料对照组。对各组实验大鼠分别在不同时相点给予BBB运动功能评分及电生理功能检测。结果神经干细胞假体治疗组在各时相点的评测数值均不同程度地优于其它各对照组,如在实验进行84d时,假体治疗组大鼠手术侧肢体BBB评分为(10．88±1．13)分,健侧肢体为(11．25±1．58)分；手术侧运动诱发电位N1波峰潜时为(12．28±2．19)ms,波幅为(15．84±1．81)μV,体感诱发电位波峰潜时为(17．88±2．18)ms,波幅为(7．43±1．84)μV,均不同程度地优于其它各组。结论神经干细胞假体移植治疗可显著促进脊髓损伤大鼠运动功能及电生理传导功能的恢复。     

FK506缓释剂促进周围神经再生的形态学研究

[目的]探讨FK506缓释剂对周围神经再生纤维形态学恢复的促进作用.[方法]利用自行研制的梭形双通道桥接管桥接32只SD (Sprague-Dawley)大鼠坐骨神经长10 mm缺损.根据梭形管的两支管内加入的药物不同将动物随机均分为A组(两支管内均加入几丁糖凝胶)、B组(一侧支管内注入几丁糖+ FK506(B1组);另一侧支管内注入几丁糖(B2组)).术后8、16周对再生神经进行Holmes银染、透射电镜观察、硫代乙酰化胆碱染色和碳酸酐酶染色观察再生神经形态结构.[结果]术后8、16周,Holmes还原银染色及透射电镜观察到A组两支管内再生纤维无明显差异,与B2组比,B1组再生纤维数量多,排列整齐,粗细均匀;其运动纤维与感觉纤维的数量均优于对照组(P＜0.05).[结论] FK506缓释剂可明显促进周围神经再生纤维形态结构的恢复.     

啮齿类动物创伤应激障碍模型的评价及研究进展

创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)是指由于生命受到威胁、遭遇悲剧导致的精神、躯体症状持续的临床综合征[1].当前普遍认为,任何伴有强烈心理反应如恐惧、绝望、失控感和幻灭感的创伤事件都有可能导致PTSD.据美国精神病协会(American Psychiatry Association,APA)统计,美国PTSD的人群总患病率为1％～14％,平均为8％,个体终身患病危险性达3％～5％,女性约为男性的2倍.而我国伍志刚、张本等分别对洞庭湖严重洪涝灾区成人和唐山大地震所致孤儿PTSD发病率调查情况显示为33.89％和23％[2-3].2008年"5.12"汶川地震极重灾区幸存者中,3个月后罹患失眠、梦魇、闪回等PTSD典型症状的人群比例约为18.4％[4].基于以上现状,在PTSD研究中,选择理想的PTSD动物模型无疑是了解疾病发病机制、筛选鉴别性实验可能治疗靶点的关键.因此,当前亟待结合动物实验深入开展多角度研究,以拓展对PTSD复杂病症的理解.本文综述了当前关于PTSD实验动物模型主要是啮齿类动物模型的进展,旨在深入探讨其发病规律和病理生理机制,并为临床治疗方法、预后评估等提供有益的借鉴和启示.     

丙戊酸对神经干细胞修复损伤脊髓功能的影响

目的 观察丙戊酸(VPA)对神经干细胞(NSCs)移植修复成鼠损伤脊髓功能的影响.方法 SD大鼠96只,随机分为单纯损伤组、VPA治疗组、NSCs治疗组和NSCs+VPA治疗组.在T10节段造成半切脊髓损伤,于损伤后第2、4、8周进行BBB评分和神经诱发电位检测,在8周时用核黄和DIL进行示踪检查.结果 NSCs+VPA治疗组核黄和DIL标记的神经元数量多于其他3组;NSCs+VPA治疗组BBB评分和诱发电位各项指标均优于其余3组,其中以运动诱发电位峰潜伏期的优化最明显.结论 VPA能促进NSCs移植对成鼠损伤脊髓功能的修复作用.     

心肌营养素-1基因转染对大鼠脑损伤的保护作用

目的 在体观察腺病毒介导的心肌营养素-1基因(Adv-CT1)脑内转染对创伤大脑组织细胞的生物效应,探讨CT-1对创伤性脑损伤(TBI)治疗的作用和机制.方法 以Allen方法建立大鼠TBI模型,利用Adv-CT1脑内转染技术,以Nissl染色、原位细胞凋亡检测、流式细胞凋亡检测等技术,观察CT-1基因治疗TBI后创伤大脑细胞凋亡及存活的变化及规律.结果 TBI后12 h～7 d创伤对照组大脑皮层和海马等损伤脑区细胞凋亡明显增加,存活细胞减少;利用Adv-CT1脑内转染治疗TBI,伤后12 h～14 d损伤脑区凋亡细胞较创伤对照组减少,存活细胞增加.结论 CT-1可减少TBI后脑细胞凋亡发生,增加脑细胞的存活数量,对损伤脑区细胞的生存有保护作用.     

神经干细胞与原浆型星形胶质细胞联合移植对大鼠损伤脊髓轴浆运输功能的修复作用

目的：观察神经干细胞（NSC）与原浆型星形胶质细胞（PAS）联合移植对大鼠损伤脊髓轴浆运输功能的修复作用。方法：40只Wistar大鼠，制成L1～L2左侧脊髓半切空洞损伤模型，随机分为损伤组（A组），损伤后移植PAS组（B组）、移植NSC组（C组）、NSC和PAS按2：1比例联合移植组（D组），每组10只。4周及8周后行损伤部位神经丝-200（NF-200）染色观察NSC在体内的分化情况，腓肠肌胆碱酯酶染色观察运动终板的反应和核黄逆行示踪观察轴浆运输的恢复情况。结果：（1）4周时D组和C组移植部位可见少量NF-200阳性标记的神经元．8周时数量明显增多，D组多于C组；4周及8周时A、B组均未见到明显阳性标记的神经元。（2）4周时．A、B组胆碱酯酶染色示运动终板均出现退变，终板染色变浅；8周时A组终板明显退变，出现大片染色空白区，甚至终板消失，只剩下模糊的轮廓；B组终板退变程度轻于A组，着色淡，轮廓欠清晰，周边呈浅棕红色淡染，但未出现大片染色空白区；C、D组4周时终板边缘发生皱缩，呈颗粒样改变，无明显染色缺失；8周时C组较4周时变化不明显，D组受损终板皱缩明显好转，颗粒样改变消失。（3）4周时，B、C、D组核黄染色的神经元散在位于脊髓的前、后、侧角，其中D组阳性标记的神经元的数量及荧光强度大于B、C组，C组又稍强于B；8周时B、C、D组阳性神经元数量均增多．神经元的数量及荧光强度仍是D组〉C组〉B组；A组4周及8周时均未见到明显阳性染色的神经元。结论：联合移植NSC和PAS（2：1）能更好地修复损伤脊髓的轴浆运输功能并能较好地防治其后肢肌肉运动终板的溃变。