腺病毒介导的心肌营养素1基因修饰大鼠神经干细胞

目的:以心肌营养素1基因修饰大鼠神经干细胞,为心肌营养素1基因修饰的神经干细胞移植治疗中枢神经系统损伤提供物质基础。方法:实验于2002-06/2003-06在第三军医大学野战外科研究所全军重点开放实验室进行。从W istar大鼠胚胎海马和室管膜区组织分离、培养大鼠胚胎神经干细胞,以构建纯化好的重组腺病毒-心肌营养素1和重组腺病毒-增强绿色荧光蛋白载体转染神经干细胞。相差显微镜下直接观察细胞生长存活情况,应用免疫细胞化学和免疫荧光技术检测神经干细胞及其诱导后分化细胞的特异性蛋白巢蛋白、神经微丝蛋白、胶质纤维酸性蛋白,外源性Brdu和增强绿色荧光蛋白的掺入情况,并观察心肌营养素1基因在神经干细胞中的表达。结果:①从胚胎大鼠分离的神经干细胞可在体外多次传代,经细胞增殖标记物Brdu掺入实验证明神经干细胞具有分裂增殖能力。②检测神经干细胞标志物巢蛋白、神经元标志物神经微丝蛋白和胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白,证实神经干细胞具有多向分化潜能。③重组腺病毒-心肌营养素1及重组腺病毒-增强绿色荧光蛋白转染神经干细胞后应用免疫组化和荧光示踪技术,检测到神经干细胞中心肌营养素1和报告基因增强绿色荧光蛋白表达明显持续增加。结论:①实验成功地分离和培养出大鼠神经干细胞,并在体外可多次传代增殖并可诱导分化为神经元和胶质细胞。②重组腺病毒-心肌营养素1和重组腺病毒-增强绿色荧光蛋白转染神经干细胞后,外源性心肌营养素1基因和增强绿色荧光蛋白在细胞中可持续稳定表达。     

脊髓运动诱发电位在大鼠胚胎脊髓移植实验中的应用

目的脊髓运动诱发电位（ＭＥＰ）直接反映脊髓下行传导功能，将其用于脊髓移植实验，检测脊髓运动功能状态。方法应用多功能神经诱发电位仪，对移植胚胎脊髓及单纯损伤对照组大鼠的脊髓ＭＥＰ进行动态检测。结果术后４天，移植组ＭＥＰ波幅及峰潜伏时已有一定程度的恢复；对照组ＭＥＰ无明显好转趋势。术后２周、４周和１２周，三组的ＭＥＰ早期反应（Ｐ１，Ｎ１）的波幅，均基本恢复正常，但移植组峰潜伏时的恢复优于对照组（Ｐ＜０．０５）。结论ＭＥＰ检测能为脊髓的功能状态提供客观资料；在脊髓移植实验中，检测ＭＥＰ是判断受体脊髓运动功能的可靠方法之一。     

创伤后应激障碍大鼠动物模型行为学表现及学习记忆功能的变化

目的:制备创伤后应激障碍(post-traumaticstressdisorder,PTSD)大鼠模型并观察其行为学表现和学习记忆功能的变化。方法:利用幽闭+电击方式制备Wistar大鼠PTSD实验动物模型,观测其总体运动水平和前25min各运动类型成分的变化,以及利用穿梭箱实验检测PTSD大鼠学习记忆功能的改变。结果:PTSD大鼠总体运动水平发生两极性变化,多数(7/9)降低,少数(2/9)升高,与对照组比较均差异均有显著性意义(t=10.230,P<0.01);前25min各运动类型成分中,静止状态和逃避状态显著增加,对照组和PTSD组分别为(11.08±1.67)%和(24.24±9.69)%(t=-6.878,P<0.05),梳理状态成分显著减少,对照组和PTSD组分别为(28.34±6.86)%和(13.13±7.02)%(t=2.234,P<0.05);PTSD大鼠学习记忆功能检测发现,主动回避反应显著下降(P<0.01),回避反应失败显著增加(P<0.01)。结论:用幽闭+电刺激制备大鼠PTSD实验动物模型,行为学出现明显异常,学习记忆功能受损,与临床表现有较好的拟似性,重复性高。     

心肌营养素-1基因转染对大鼠脑损伤的保护作用

目的 在体观察腺病毒介导的心肌营养素-1基因(Adv-CT1)脑内转染对创伤大脑组织细胞的生物效应,探讨CT-1对创伤性脑损伤(TBI)治疗的作用和机制.方法 以Allen方法建立大鼠TBI模型,利用Adv-CT1脑内转染技术,以Nissl染色、原位细胞凋亡检测、流式细胞凋亡检测等技术,观察CT-1基因治疗TBI后创伤大脑细胞凋亡及存活的变化及规律.结果 TBI后12 h～7 d创伤对照组大脑皮层和海马等损伤脑区细胞凋亡明显增加,存活细胞减少;利用Adv-CT1脑内转染治疗TBI,伤后12 h～14 d损伤脑区凋亡细胞较创伤对照组减少,存活细胞增加.结论 CT-1可减少TBI后脑细胞凋亡发生,增加脑细胞的存活数量,对损伤脑区细胞的生存有保护作用.     

兔脑缺血时皮层体感诱发电位的观察

体感诱发电位(SEPS)逐渐应用于临床。但对于各种神经系统疾病过程中SEPS的变化研究尚不充分。为给临床应用提供参考资料,我们结合脑组织病理,观察了兔实验性脑缺血过程中SEPS的改变。同时以SEPS为脑功能指征,观察了临床新药胞二磷胆碱(CDP—Choline)促进缺血脑功能恢复的作用。实验动物用氯酸糖和氨基甲酸乙酯混合液麻醉。刺激隐神经,在对侧皮层感觉运动区硬膜外引导SEPS,经TQ—19医用数据处理机叠加处理,照相记录。     

伤害性刺激时海马θ节律与升压反应之间的关系

本文观察了伤害性刺激对家兔海马电及动脉血压的影响;并采用侧脑室注射毒扁豆硷、阿托品及电解损毁内侧隔区等加强、抑制或阻断海马θ节律的方法,探讨伤害性刺激时海马与升压反应之间的关系。实验结果如下:(1)伤害性刺激可诱发明显的海马θ节律及升压反应,两者持续时间在统计学上有显著性相关。(2)侧脑室注射阿托品后,同参数伤害性刺激诱发的海马θ节律持续时间明显缩短(P<0.01)、升压反应明显减弱(P<0.01);侧脑室注射毒扁豆硷后,海马EEG转为θ节律型式,此时同参数伤害性刺激诱发的升压反应明显加强(P<0.01)。(3)电解损毁内侧隔区后,伤害性刺激不再能诱发海马θ节律,升压反应明显减弱。 上述结果提示:伤害性刺激时,海马具有增强升压反应的作用,其过程与中枢胆硷能系统激活有关。     

Windows多媒体生理学实验教学系统的建立

本文介绍了一套新型的生理学实验教学系统。该系统已应用于多所院校生理学教学实验，实践说明具有交互性好、操作简便、功能齐全的特点。     

褪黑素对癫痫大鼠海马GABA、GABAARα5表达的影响

目的 探讨褪黑素(Mel)抗癫痫作用的机制.方法 采用匹罗卡品(PILO)诱导大鼠癫痫持续状态(SE)模型,用免疫组化技术检测大鼠SE后4个时相点即6 h、48 h、72 h和7 d海马γ-氨基丁酸(GABA)和GABAA受体α5(GABAARα5)亚单位表达的动态变化,以及Mel对其变化的影响.结果 PILO组大鼠SE后6h,海马内GABA能神经元和GABAARα5亚单位表达均开始减少,尤其以SE后72 h～7 d改变最为明显,与对照组比较差异有极显著意义(P＜0.01);而Mel组大鼠在SE后72 h～7 d,海马各区的GABA能神经元和GABAARα5亚单位表达均显著高于PILO组大鼠(P＜0.05).结论 Mel可能通过上调GABA和GABAARα5亚单位的表达来发挥抗癫痫作用.     

Preparation and degradation characteristic study of bone repair composite of DL—polylactic acid／hydroxyapatite／decalcifying bone matrix

Objective:To explore the preparative method and study the degradation characteristics of bone repair composite of DL-polyactic acid(PDLLA) /hydroxyapatite(HA)/decalcifying bone matrix(DBM) in vitro.Methods:An emulsion blend method was developed to prepare the composite of PDLLA/HA/DBM in weight ratio of PDLLA:HA:DBM=1.2-2:1.5:1.The dynamic changes of weight,biomechanical property and pH value of PDLLA/HA/DBM and PDLLA in phosphate buffered saline(PBS,pH7.4)were studied respectively through degradation tests in vitro.Results:Without being heated,PDLLA,HA and DBM could be synthesized with the emulsion blend method as bone composite of PDLLA/HA/DBM,wich had both osteoconductive and osteoinductive effects.The diameter of the aperture was 100-400μm and the gap rate was 71.3%.During degradation,the pH value of PDLLA solution decreased lightly within 2 weeks,but decreased obviously at the end of 4 weeks and the value was 4.0 .While the pH value of PDLLA/HA/DBM kept quite steady and was 6.4 at the end of 12 weeks.The weight of PDLLA changed little within 4 weeks,then changed obviously and was 50% of its initial weight at the end of 12 weeks.While the weight of PDLLA/HA/DBM changed little within 5 weeks ,then changed obviously and was 60% of the initial weight at the end of 12 weeks.The initial biomechanical strength of PDLLA was 1.33 MPa, decreased little within 3 weeks, then changed obviously and kept at 0.11 MPa at the end of 12 weeks.The initial biomechanical strength of PDLLA/HA/DBM was 1.7 MPa, decreased little within 4 weeks, then changed obviously and kept at 0.21 MPa at the end of 12 weeks.Conclusions:The emulsion blend method is a new method to prepare bone repair materials.As a new bone repair material,PDLLA/HA/DBM is more suitable for regeneration and cell implantation,and the environment during its degradation is advantageous to the growth of bone cells.     

神经干细胞与原浆型星形胶质细胞联合移植对大鼠损伤脊髓轴浆运输功能的修复作用

目的：观察神经干细胞（NSC）与原浆型星形胶质细胞（PAS）联合移植对大鼠损伤脊髓轴浆运输功能的修复作用。方法：40只Wistar大鼠，制成L1～L2左侧脊髓半切空洞损伤模型，随机分为损伤组（A组），损伤后移植PAS组（B组）、移植NSC组（C组）、NSC和PAS按2：1比例联合移植组（D组），每组10只。4周及8周后行损伤部位神经丝-200（NF-200）染色观察NSC在体内的分化情况，腓肠肌胆碱酯酶染色观察运动终板的反应和核黄逆行示踪观察轴浆运输的恢复情况。结果：（1）4周时D组和C组移植部位可见少量NF-200阳性标记的神经元．8周时数量明显增多，D组多于C组；4周及8周时A、B组均未见到明显阳性标记的神经元。（2）4周时．A、B组胆碱酯酶染色示运动终板均出现退变，终板染色变浅；8周时A组终板明显退变，出现大片染色空白区，甚至终板消失，只剩下模糊的轮廓；B组终板退变程度轻于A组，着色淡，轮廓欠清晰，周边呈浅棕红色淡染，但未出现大片染色空白区；C、D组4周时终板边缘发生皱缩，呈颗粒样改变，无明显染色缺失；8周时C组较4周时变化不明显，D组受损终板皱缩明显好转，颗粒样改变消失。（3）4周时，B、C、D组核黄染色的神经元散在位于脊髓的前、后、侧角，其中D组阳性标记的神经元的数量及荧光强度大于B、C组，C组又稍强于B；8周时B、C、D组阳性神经元数量均增多．神经元的数量及荧光强度仍是D组〉C组〉B组；A组4周及8周时均未见到明显阳性染色的神经元。结论：联合移植NSC和PAS（2：1）能更好地修复损伤脊髓的轴浆运输功能并能较好地防治其后肢肌肉运动终板的溃变。