FK506缓释剂促进周围神经再生的形态学研究

[目的]探讨FK506缓释剂对周围神经再生纤维形态学恢复的促进作用.[方法]利用自行研制的梭形双通道桥接管桥接32只SD (Sprague-Dawley)大鼠坐骨神经长10 mm缺损.根据梭形管的两支管内加入的药物不同将动物随机均分为A组(两支管内均加入几丁糖凝胶)、B组(一侧支管内注入几丁糖+ FK506(B1组);另一侧支管内注入几丁糖(B2组)).术后8、16周对再生神经进行Holmes银染、透射电镜观察、硫代乙酰化胆碱染色和碳酸酐酶染色观察再生神经形态结构.[结果]术后8、16周,Holmes还原银染色及透射电镜观察到A组两支管内再生纤维无明显差异,与B2组比,B1组再生纤维数量多,排列整齐,粗细均匀;其运动纤维与感觉纤维的数量均优于对照组(P＜0.05).[结论] FK506缓释剂可明显促进周围神经再生纤维形态结构的恢复.     

不同方法所制备黄芪多糖含药血清对神经干细胞增殖分化的影响

【目的】观察不同给药方法制取的APS含药血清对神经干细胞增殖分化的影响。【方法】用连续注射法、一次性大剂量注射法和灌胃法制取APS含药血清,采用间接免疫荧光法检测Nestin,β-tubulinⅢ和GFAP,通过CCK-8 Brdu检测细胞增殖,Elisa检测VEGF、NGF含量,Western Blot法检测PI3K、P-Akt、Casepase-9蛋白表达。【结果】APS含药血清组与对照组在增殖分化中有明显差异(P<0.05),可提高VEGF、NGF含量,提高PI3K、P-Akt蛋白表达,降低Casepase-9蛋白表达。其中APS腹腔注射含药血清组优于APS灌胃含药血清组,而连续注射法与一次性大剂量注射法含药血清组无明显差异(P>0.05)。【结论】APS含药血清组可能通过调节VEGF、NGF含量,活化PI3K/Akt信号通路,促进神经干细胞增殖分化,Akt磷酸化后,调节Casepase-9,延缓细胞凋亡。效果与其给药方式有关,腹腔注射法优于灌胃法,但与腹腔注射给药时间无关。     

啮齿类动物创伤应激障碍模型的评价及研究进展

创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)是指由于生命受到威胁、遭遇悲剧导致的精神、躯体症状持续的临床综合征[1].当前普遍认为,任何伴有强烈心理反应如恐惧、绝望、失控感和幻灭感的创伤事件都有可能导致PTSD.据美国精神病协会(American Psychiatry Association,APA)统计,美国PTSD的人群总患病率为1％～14％,平均为8％,个体终身患病危险性达3％～5％,女性约为男性的2倍.而我国伍志刚、张本等分别对洞庭湖严重洪涝灾区成人和唐山大地震所致孤儿PTSD发病率调查情况显示为33.89％和23％[2-3].2008年"5.12"汶川地震极重灾区幸存者中,3个月后罹患失眠、梦魇、闪回等PTSD典型症状的人群比例约为18.4％[4].基于以上现状,在PTSD研究中,选择理想的PTSD动物模型无疑是了解疾病发病机制、筛选鉴别性实验可能治疗靶点的关键.因此,当前亟待结合动物实验深入开展多角度研究,以拓展对PTSD复杂病症的理解.本文综述了当前关于PTSD实验动物模型主要是啮齿类动物模型的进展,旨在深入探讨其发病规律和病理生理机制,并为临床治疗方法、预后评估等提供有益的借鉴和启示.     

大鼠脊髓半横切损伤动物模型的建立与神经功能评价

目的:建立一种稳定可靠、操作简单的脊髓半横切损伤动物模型,并对其神经功能进行初步评价。方法:将18只SD大鼠随机分为正常对照、假手术组和T10段脊髓半切组。术后不同时间点分别采用BBB运动功能评分及足迹法检测其脊髓功能的变化情况,同时检测其运动诱发电位(MEP)和体感诱发电位(SEP),记录N1及P1波潜伏期。结果:损伤组BBB运动功能评分显著低于正常对照及假手术组(P<0.01),且足迹法检测结果也存在统计学意义(P<0.01)。神经电生理检测结果表明,SEP和MEP潜伏期均具有统计学意义(P<0.01)。结论:成功制备了大鼠脊髓半切损伤动物模型,为研究脊髓损伤相关机制及药物治疗奠定了基础。     

一种改良的胚胎大鼠颞叶海马区神经元的培养方法

目的:探索胚胎大鼠颞叶海马区神经元的改良培养方法。方法:在无血清培养基础上,采用改良的分离纯化法获取单细胞悬液,接种后在不同阶段通过加入不同配方的培养基进行培养,并进行免疫组化鉴定。结果:用该方法培养的颞叶海马区神经元细胞存活率高,生长状态良好,且βⅢ-tublin免疫染色为阳性,神经元细胞纯度可达90%以上。结论:改良分离、结合分阶段的不同培养条件是一种简单、高效的颞叶海马区神经元的纯化培养方法。     

微管蛋白、水通道蛋白4和K~+通道蛋白4.1在大鼠脊髓损伤后不同时间的表达变化

目的探究微管骨架、水通道蛋白4(AQP4)和K+通道4.1(Kir4.1)在大鼠急性脊髓损伤后的时间变化规律。方法 90只成年雌性Sprague-Dawley大鼠,随机分组为假手术组(n=30)和损伤组(n=60),损伤组设6 h、1 d、3d、5 d、7 d,每个亚组12只大鼠。用Allen打击法制备T10打击损伤模型。损伤后各时间点各组行脊髓含水量检测、脊髓HE染色,观察急性脊髓损伤后的病理变化;行微管蛋白、AQP4和Kir4.1免疫组织化学染色和Western blotting检测,观察急性损伤后三组蛋白的表达变化及相对灰度值分析。结果损伤组各时间点脊髓含水量均高于假手术组(P0.05),且5 d时最高。HE染色显示,损伤后6 h,灰质主要以出血为主;损伤后1 d,灰质出血严重,神经元肿胀加重;损伤后3 d,灰质坏死面积加大,水肿现象明显;损伤后5 d、7 d,灰质坏死更加明显,水肿现象更加严重。Western blotting和免疫组织化学染色结果显示,损伤后AQP4在灰质表达逐渐增高,且5 d表达为高峰,微管蛋白和Kir4.1表达趋势基本相同,为损伤后表达逐渐下降,5 d表达最低。结论脊髓损伤后微管蛋白表达与Kir4.1表达趋势相似,与AQP4表达趋势相反,可能共同参与水肿形成。     

不同年龄大鼠坐骨神经损伤后脊髓中神经生长导向因子Slit-1及Robo-2受体的表达变化

目的观察不同年龄大鼠坐骨神经损伤后,轴突导向因子Slit-1及其Robo-2受体在脊髓中的表达,以探讨不同年龄大鼠外周神经损伤后再生神经具有靶向性差异的可能机制。方法老年、成年和幼年大鼠各20只,建立左侧坐骨神经横断、硅胶管桥接模型。通过免疫荧光染色观察Slit-1蛋白和Robo-2受体在腰段脊髓中表达的变化,计算其荧光强度值,并进行统计学分析。结果伤后2周和4周,3组大鼠脊髓前角Slit蛋白均有较高表达,但各组间无显著差异。伤后2周和4周各组Robo-2受体表达均升高,其中老年鼠脊髓前角Robo-2受体表达明显高于成年和幼年组,差异有统计学意义(P0.05)。结论大鼠坐骨神经损伤后能刺激脊髓前角Slit-1高表达,不同年龄大鼠脊髓组织中Robo-2受体表达的差异可能决定了Slit-1在再生神经中的靶向性调节作用。     

神经干细胞假体移植促进脊髓损伤后功能恢复的实验研究

目的探讨神经干细胞假体移植治疗脊髓损伤的疗效。方法建立大鼠脊髓损伤模型,在此基础上进行神经干细胞假体移植治疗,并同时设立手术、神经干细胞及材料对照组。对各组实验大鼠分别在不同时相点给予BBB运动功能评分及电生理功能检测。结果神经干细胞假体治疗组在各时相点的评测数值均不同程度地优于其它各对照组,如在实验进行84d时,假体治疗组大鼠手术侧肢体BBB评分为(10．88±1．13)分,健侧肢体为(11．25±1．58)分；手术侧运动诱发电位N1波峰潜时为(12．28±2．19)ms,波幅为(15．84±1．81)μV,体感诱发电位波峰潜时为(17．88±2．18)ms,波幅为(7．43±1．84)μV,均不同程度地优于其它各组。结论神经干细胞假体移植治疗可显著促进脊髓损伤大鼠运动功能及电生理传导功能的恢复。     

轴突再支配过程中大鼠脊髓Ⅲ板层树突变化的电镜观察

本文利用保留背根(L4)的动物模型,电镜下观察测量了术后4天和35天大鼠脊髓Ⅲ板层树突的形态学变化。结果表明,树突在脊髓可塑过程中既没增加数目,也没改变直径。部份大中型树突内反而出现了由小到大,以致融合的泡状结构。我们认为,这些泡状结构是树突变性的又一形式。其早期作用可能是吸引轴突定向生长,晚期则阻碍或抑制冲动的传递。     

丹参对实验性颅脑损伤大鼠血流动力学的作用

目的：探讨丹参对实验性颅脑损伤（traumatic brain injury,TBI)后大鼠血液流变学影响及可能作用机理。材料与方法：用流体冲击装置制作中度大鼠颅脑损伤模型。实验分为：TBI＋丹参组、TBI＋生理盐水组（NS）、TBI模型组，前2组分别于脑损伤后24h静脉给予丹参治疗（丹参注射液，1mg/kg,iv)、和等量的生理盐水，TBI模型组不治疗。氢清除法检测大鼠脑局部血流量（regional cerebral blood flow,rCBF)变化，在给予丹参注射液后1、2、4、6h抽血液，检测全血粘度（whole blood viscosity,WBV)、血球压积（hematocrit of red cells,HRC)的变化。结果：TBI＋丹参组，全血粘度、红细胞压积明显低于TBI＋NS。结论：丹参治疗能改善脑损伤早期的血液流变性，且rCBF明显低于伤前。