α2－巨球蛋白活性检测方法的建立与优化

目的：建立α2－巨球蛋白（α2－macroglobulin ,α2－M）活性检测方法,检测Cohn组分Ⅳ中α2－M的活性。方法α2－M可与胰蛋白酶相互作用形成“α2－M－胰蛋白酶复合物”,利用酶标仪检测出“α2－M－胰蛋白酶复合物”与小分子底物Na－苯甲酰－DL－精氨酸－对硝基酰胺盐酸盐（ Na－benzoyl－DL－arginine 4－nitroanilide hydrochloride ,BAPNA）显色反应后的光密度值（410 nm）,根据建立的血浆α2－M活性标准曲线,定量计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2－M的活性。结果通过对实验体系中几个关键实验条件进行优化,建立了血浆α2－M活性标准曲线,并计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2－M活性的平均值为1．578 PU／ml。结论以正常人混合血浆作为参考标准品,用发色底物法检测Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2－M的活性,方法简便易行,为α2－M制备过程中活性测定提供了实验基础。     

猪APOBEC3F基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定

目的 克隆猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide 3F,APOBEC3F)基因,构建真核表达载体实现其在体外表达与鉴定。方法分离4头21周龄,体质量25～30kg的雌性健康五指山猪的外周血单个核...     

两种ELISA 试剂盒对我国单采血浆中水痘-带状疱疹病毒中和抗体滴度的测定和比较

目的采用两种不同的检测抗水痘一带状疱疹病毒（VZV）中和抗体间接ELISA法试剂盒,对我国单采血浆中vZv特异性免疫球蛋白（VZIG）的效价进行测定,比较两种试剂盒测定结果的相关性和血浆筛查的适用性,并分析利用国内单采血浆研发生产VZIG的可行性。方法随机选取182份单采血浆样品,100倍稀释后,使用Virion／Serion和VaccZyme／BindingSite两种商品试剂盒同时对样品进行测定,根据评估系统公式或曲线方程计算每份样品中VZIG的效价;采用Pearson乘积矩相关性方法对两种试剂盒的线性关系进行统计学分析。结果（1）VZIG高于10IU／ml的血浆样品数量为13份（7％,Vifion）和16份（9％,VaccZyme）;②两种试剂盒检测结果之间的直线线性关系数R2为0．62（P〈0．0001）,变异系数为4％;（3）Virion与VaccZyme的工作范围有不同,前者对于低效价（0．2—0．4IU／m1）样本的测定具有很好的灵敏度,而VaccZyme适用于高效价血浆样本（〉150IU／ml）的检测。结论Virion与VaccZyme结果具有一致性和相关性;两种试剂盒的工作范围略有差异,VaccZyme较Virion更适用于高效价VZIG原料血浆的检测,可用于普通献浆员单采血浆中VZV中和抗体的筛查。     

防治人巨细胞病毒感染的抗体类药物

人巨细胞病毒因易造成婴幼儿先天性感染、免疫抑制(器官/干细胞移植受体和重度艾滋病等)患者致死性并发症而备受关注。更昔洛韦等化学药物是目前防治巨细胞病毒感染的主要药物,同时,巨细胞病毒特异性的抗体类药物也是防治巨细胞病毒感染的努力方向之一。巨细胞病毒特异性的抗体类药物具有较强病毒中和能力,且可激活补体并介导调理作用,被证明为防治巨细胞病毒感染的有效被动免疫制剂。本文主要就巨细胞病毒感染的抗体类药物,即巨细胞病毒免疫球蛋白和巨细胞病毒特异的治疗性工程化抗体的研制、临床应用及目前存在问题进行综述。     

小型猪在异种移植中的应用前景

目的 建立狂犬病病毒感染动物疾病模型.方法 狂犬病病毒CVS-B2C毒株以10LD50剂量腿部肌肉注射接种4～6周龄的BALB/c小鼠,0.2 mL/只,于BSL2实验室负压IVC设备内饲养观察,并对其模型进行评价.结果 小鼠接种狂犬病病毒后一周左右就出现临床症状,表现为饮食量下降,毛皮慢慢失去原先的光泽,体重下降,并出现麻痹等症状,进而死亡,部分小鼠出现躁狂的症状或抽搐性和强直性痉挛,而对照组小鼠则表现正常.DFA法检测结果:感染上狂犬病毒的小鼠脑组织涂片中出现特异性荧光抗体染色反应,而对照组动物的小鼠脑组织涂片未出现荧光抗体染色反应.RT-PCR法检测结果:从感染小鼠脑组织标本中提取病毒RNA,引物扩增出的目的 基因片段,大小约为1kb,为N蛋白.免疫组化法检测结果:感染狂犬病毒的小鼠脑切片显示出棕色阳性颗粒,对照组小鼠脑切片染色阴性.病理检测结果:HE染色可见感染小鼠脑组织炎性细胞浸润.神经细胞胞质内出现内基体以及神经细胞退行性病变.结论 成功的复制出小鼠狂犬病病毒感染模型,为研究和控制狂犬病奠定了基础.     

肿瘤静脉血栓栓塞症的危险因素研究进展

静脉血栓栓塞症(venous thromboembolism, VTE)作为恶性肿瘤常见并发症之一,发生率高达20％,是引起恶性肿瘤患者死亡的第二大原因,严重影响患者的生活质量和预后。但目前国内关于肿瘤VTE危险因素的阐述尚不系统,故本文基于VTE发生率高及病死率高的现状,梳理患者、恶性肿瘤及相关抗肿瘤治疗因素对肿瘤性静脉血栓的影响,集中讨论近5年来VTE各种风险因素的研究进展,并对未来的研究方向进行讨论,为精准防治肿瘤血栓形成、优化血栓预防提供理论依据。     

氢气通过诱导血红素加氧酶1表达减轻氧中毒急性肺损伤的实验研究

目的 研究氢气(H2)对于防治氧中毒急性肺损伤(HALI)的作用机制.方法 将30只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:正常对照组、氧中毒模型组(HALI组)和H2治疗组(H2组).其中正常对照组大鼠仅暴露于常压空气,HALI组和H2组大鼠暴露于100%医用纯氧,每隔12 h分别腹腔注射医用生理盐水和氢饱和生理盐水(10 ml/kg).60 h后对各组大鼠进行动脉血氧分压检测和肺组织病理学检查,并应用RT-qPCR和Western印迹技术检测肺组织中血红素加氧酶1(human heme oxygenase 1,HO-1)的mRNA转录水平和蛋白表达水平.结果与HALI组相比,H2组大鼠因慢性纯氧暴露导致的肺损伤程度明显减轻,动脉血氧饱和度升高,HO-1蛋白及其mRNA在肺组织中的表达显著升高.结论 HO-1可能在H2防治大鼠HALI中发挥重要作用.     

嗜人性猪内源性反转录病毒感染性克隆感染人胚肾细胞HEK293后Stathmin蛋白差异表达分析

目的 分析嗜人性猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retroviruses,PERV)感染的人源细胞中Stathmin蛋白的差异表达情况,探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应机制.方法 嗜人性PERV感染性克隆感染HEK293细胞,采用PCR、实时定量RT-PCR、免疫荧光分析确认PERV感染,利用实时定量RT-PCR和免疫印迹法分析Stathmin蛋白表达差异.结果 嗜人性PERV感染性克隆成功感染HEK293细胞,实时定量RT-PCR和免疫印迹法检测结果表明,PERV感染后Stathmin蛋白与对照相比表达上调.结论 嗜人性PERV感染HEK293细胞后Stathmin表达上调,该研究结果为深入研究嗜人性PERV与人源细胞的相互作用及PERV感染后的分子效应等提供了线索,也提示了PERV感染后可能会对细胞的生长、生理功能等造成影响,甚至存在潜在的致病性.对探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应以及猪→人异种移植的病毒安全性评价也具有重要意义.     

纤维蛋白止血敷料的生物相容性研究

目的评价纤维蛋白止血敷料的生物相容性。方法对纤维蛋白止血敷料进行如下生物学检测:细胞毒性试验(MTT法)、急性全身毒性试验、皮肤刺激试验、皮内刺激试验和溶血试验,根据标准对实验数据进行分析和评估。结果纤维蛋白止血敷料的细胞毒性分级0—1级;无急性全身毒性作用,无皮肤刺激反应、皮内刺激反应,无溶血性。结论纤维蛋白止血敷料具有良好的生物相容性。