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目的:优化发色底物法,使其在酶促反应初速度内测定α1抗胰蛋白酶( AAT)的活性并用于血浆蛋白纯化过程中各样品活性的检测。方法采用酶标仪动态监测模式观察酶浓度和反应时间对酶促反应的影响;计算初速度并确定被底物饱和的最大酶浓度。将AAT与胰蛋白酶孵育,剩余靶酶和底物作用产生的光密度可反映AAT的活性。通过△D与AAT标准品活性进行拟合建立标准曲线,测定相关样品的活性,进行精密度和准确度验证。结果胰蛋白酶浓度为0.0625 mg/ml,20 min内酶促反应处于初速度内。 AAT标准曲线范围为200~1200 IU/ml, r>0.99。该法测定Cohn Ⅳ、前处理液、洗脱峰样品中AAT的活性分别为(720.59±18.63)、(601.84±19.18)、(568.09±24.83)IU/ml。每个样品之间的RSD<10%,加样回收率均在90%~110%。结论发色底物法经优化后,准确度和精密度大幅度提高,更适于实验室制备AAT或不同生产阶段样品的活性检测。 相似文献
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目的:建立α2-巨球蛋白(α2-macroglobulin ,α2-M)活性检测方法,检测Cohn组分Ⅳ中α2-M的活性。方法α2-M可与胰蛋白酶相互作用形成“α2-M-胰蛋白酶复合物”,利用酶标仪检测出“α2-M-胰蛋白酶复合物”与小分子底物Na-苯甲酰-DL-精氨酸-对硝基酰胺盐酸盐( Na-benzoyl-DL-arginine 4-nitroanilide hydrochloride ,BAPNA)显色反应后的光密度值(410 nm),根据建立的血浆α2-M活性标准曲线,定量计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2-M的活性。结果通过对实验体系中几个关键实验条件进行优化,建立了血浆α2-M活性标准曲线,并计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2-M活性的平均值为1.578 PU/ml。结论以正常人混合血浆作为参考标准品,用发色底物法检测Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2-M的活性,方法简便易行,为α2-M制备过程中活性测定提供了实验基础。 相似文献
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目的:研究埃坡霉素D在人尿中的主要代谢产物。方法:受试者6名静脉滴注埃坡霉素D,收集0~72h尿样,经SPE固相萃取小柱分离纯化后,采用液相色谱-串联电喷雾离子阱质谱法(LC—MS^n)对样品进行分析,通过比较空白尿样和给药后的尿样的总离子流色谱图和选择离子扫描色谱图,分析可能的代谢产物。代谢产物的结构鉴定主要依据代谢产物的各级质谱图与原药的各级质谱图的相关性推断所得。结果:在人尿中共检测到11种主要的代谢产物,根据所提供的代谢产物标准品鉴定出3种代谢产物的结构,代谢方式主要有氧化、还原、水解和结合反应。结论:本方法选择性好,为深入研究埃坡霉素类药物在人体内的代谢规律提供了可靠的方法和可参考的依据。 相似文献
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Luschka关节对下颈椎稳定性影响的生物力学实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:测试Luschka关节在仿生理状态脊柱功能单位(functiona lspinal unit,FSU)伸、屈活动时对下颈椎稳定性的影响。方法:自外伤致死新鲜尸体下颈段截取32个脊柱功能单位(FSU),随机抽样,将32个标本均分Ⅰ、Ⅱ两组,Ⅰ组切除双侧Luschka关节,Ⅱ组保留Luschka关节,两组标本分别进行力学测试,根据White下颈椎临床不稳诊断评分标准,研究Luschka关节对维持下颈椎稳定性影响。结果:Luschka关节具有限制椎体向侧方移位(P〈0.05)及在下颈椎生理范围伸、屈活动时限制上椎体向侧方移位(P〈0.05)和旋转(P〈0.01)的作用。结论:Luschka关节对下颈椎稳定性有显著的影响,Luschka关节是下颈椎维持稳定的重要结构。 相似文献
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凝血因子Ⅷ(FⅧ)产品的替代疗法是治疗和预防血友病A患者出血的主要手段,产生抑制物是重要的药物不良反应。本文结合已上市FⅧ产品的临床试验数据及上市后研究的结果,探讨FⅧ产品抑制物发生的特点及相关临床试验要求,为FⅧ产品临床审评及研发提供参考。五项登记和队列研究提供的证据显示,重型血友病A的未经治疗患者(PUPs)接受FⅧ产品治疗50~75暴露日(EDs)的抑制物发生率在26%~45%,国内已进口FⅧ产品在PUPs临床试验的抑制物发生率在此区间范围。FⅧ抑制物虽然在PUPs中较常见,但在暴露日超过150 EDs的先前治疗过的患者(PTPs)中少见。国内已进口的FⅧ产品在重型血友病A的PTPs临床试验的抑制物发生率为0~2.1%。欧洲药品管理局(EMA)在综合分析已有数据后认为,现有证据不能确定不同品牌和类别的FⅧ产品抑制物风险的差异,每种产品的抑制物风险应单独评估。EMA的指导原则要求FⅧ产品上市前及上市后完成至少200例PTPs至少100EDs的临床试验,PUPs纳入上市后疾病登记系统,以监测抑制物风险。美国食品药品监督管理局(FDA)及我国对于FⅧ产品抑制物相关临床试验要求与EMA基... 相似文献
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目的: 研究炎性因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对诱导人血管内皮细胞血管形成的影响及血管内皮生长因子(VEGF)的作用,为探讨GM-CSF和VEGF与动脉粥样硬化斑块内血管新生及斑块稳定性之间的关系提供实验基础。方法: 在 Matrigel上诱导人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)形成管腔结构,从而建立稳定的血管形成的体外培养体系,然后施加实验因素。分别检测rhGM-CSF的浓度效应和时间效应,及加入VEGF165的作用。然后各实验组用CD34免疫细胞化学染色,光学显微镜下计数各组管腔数。最后用统计学方法进行分析。结果: 应用Matrigel可在体外诱导培养的HUVECs形成管腔结构。rhGM-CSF作用后,培养体系的管腔数逐渐增多,呈剂量及时间依赖效应;加入VEGF165后,管腔数显著增多。结论: 应用Matrigel可在体外诱导培养的HUVECs形成管腔结构。GM-CSF可以促进体外诱导人血管内皮细胞血管形成,并在一定范围内呈剂量及时间依赖效应。VEGF可以促进体外诱导人血管内皮细胞血管形成。 相似文献
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王延琳 《辽宁中医药大学学报》2006,8(2):95
随着现代医学的发展,我国护理工作也要与国际接轨。整体护理是医学模式转变而产生的一种护理方法。它以现代护理为指导,以护理程序为核心,强调护理工作由护理疾病转向护理人为中心的整体护理。笔者在围手术期的整体护理中引用的理论体系是人的基本需要层次论。这一理论体系使这 相似文献
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目的评价重组人生长激素(rhGH)冻干粉针剂受试制剂与参比制剂在猕猴体内的相对生物利用度。方法猕猴随机分成两组,运用交叉设计方法,先后接受皮下注射受试制剂或参比制剂0.5IU·kg^-1,测定不同时间点生长激素血药浓度,并进行相关药动学参数分析。结果受试制剂与参比制剂的主要药代动力学参数Tmax分别为(3.0±1.4)、(2.3±1.8)h;Cmax分别为(173.2±79.0)、(159.0±41.3)μg·L^-1;AUC(0-12h)分别为(1139±258)、(1108±390)μg·h·L^-1;结论受试制剂的相对生物利用度为(107±16)%。 相似文献